150 likes | 329 Views
Determinarea rapida a insecticidelor neurotoxice. Dr. Bogdan BUCUR: Centrul de Bioanaliza Institutul National de Cercetare-Dezvoltare pentru Stiinte Biologice, Bucuresti. http://www.dbioro.eu/index.php?lang=ro http://bioanaliza.dbio.ro/. F os f ate (mult mai toxic)
E N D
Determinarea rapida a insecticidelor neurotoxice Dr. Bogdan BUCUR: Centrul de Bioanaliza Institutul National de Cercetare-Dezvoltare pentru Stiinte Biologice, Bucuresti http://www.dbioro.eu/index.php?lang=ro http://bioanaliza.dbio.ro/
Fosfate(mult mai toxic) Fosfotionate(comercial) ( S ) O C H 3 O P N R 1 C H N 3 O S P + N H P X 2 - O P O C H 3 O R Paration 2 Anatoxin-a(s) Anabaena, Aphanizomemon Clorpyrifos O O C H O 3 C l O C H C H 2 3 C C H O P P O C C H C O N H C H 3 C l O C H C H C H O 3 2 3 C H 3 Ometoat Diclorvos Monocrotofos C H O 2 5 P O N O 2 C H O 2 5 S Agenti neurotoxici de tip organofosforic:
Agenti neurotoxici de tip carbamat: C O N H C H O 3 O C H 3 C H 3 Aldicarb Carbofuran Carbaril Pirimicarb O R1=radical aril, acil etc. R2, R3=metil sau hidrogen R 2 N R C 1 R3
Insecticidele in lantul trofic: Indirect-Poluare: Direct-Alimente:
Structura acetilcolinesterazei (AChE): Alge toxice: Anabaena Flos aquae
Biosenzori cu AChE Traductori: Electrochimici Optici Enzime: Diferite surse Modificari genetice Punerea la punct a: Metode de imobilizare Proceduri de analiza Utilizare pentru pre-screeningal probelor. Ameliorareasensibilitatii. Crestereanumarului de insecticide detectabile. SCOP:
Acetilcolinesteraza k1 k2 k3 E+CX ECX EC+X E+C Inhibitie enzymatica Competitiva pentru OP si CB k-1 Posibila auto-reactivare ´ k1 k2 = Ki k-1 Reactie enzimatica Mai multe substraturi ATCh+H2O CH3COOH + TCh Detectie amperometrica Mediatori: TCNQ, CoPhC Dithio-bis-Ch + 2H++2e- 2TCh Detectie spectrometrica Reactiv: DTNB (Ellman) TCh + DTNB TCh-DTNB
Producerea de biosenzori prin inglobare in sol-gel: Solutieenzimatica pH=7 Componenti electrochimici, stabilizatori…. Amestec racit in gheata Precursori hidrolizati in mediu acid Depunere rapida a 1 mL pe WE Electrod auxiliar Pseudo-reférinta Ag/AgCl
Tratarea probelor complexe: extragere si oxidare Alti compusi care nu inhiba AChE C H O C H O 2 5 NBS 2 5 O NO2 P O NO2 P + C H O C H O 2 5 S 2 5 O paration paraoxon Studiul posibilitatii de evitare a efectului denaturant al agentului oxidant asupra AChE fractie1: 0.5 mL I% = 90% 5 mL ACN 2 XAD fractie2: 0.5 mL I% = 3% 20 mL 10-2 M NBS 5 mL ACN fractie1: 0.5 mL I% = 23% 10 mL PBS fractie 2: 0.5 mL I% = 4%
Analiza omethoatului: Semnale analitice: Biosenzorii cu Dm sunt sensibli Biosenzorii cu Eelneinhibati O O O P S O N Curbe de calibrare: LOD pentru wt-Dm2x10-6 M LOD pentru B31x10-7 M
Evaluarea interferentelor: Semnale analitice B3: Hg2+autoregenerare ClO-inhibitie ireversibila Semnale analitice Eel: Hg2+autoregenerare ClO-inhibitie ireversibila
CONCLUZII : • Metoda de analiza bazate pe bioafinitate • Informatii bazate pe mimarea efectului toxic • Sisteme rapide utilizabile pentru prescreening • Detectie toxicitate totala a unei probe • Aplicatii pentru analiza de probe reale: mediu si alimente • Posibilitate de adaptare pentru alti compusi