BIO1540 Lab 3: Processus cellulaires chez Amoeba proteus

1. BIO1540 Lab 3:Processus cellulaires chez Amoebaproteus

2. Objectifs • Identifier, photographier et mesurer les organites présentes dans Amoebaproteus. • Visualiser des processus cellulaires tels que le mouvement amiboïde, le cycle de la vacuole contractile et l’endocytose. • Mesurer le diamètre de la vacuole contractile au cours de son cycle. • Utiliser ces mesures pour tracer un graphique montrant la variation du volume de la vacuole en fonction du temps.

3. Méthode (mise en place) • Connecter délicatement la caméra du microscope au câble de l’ordinateur. • Nettoyer les surfaces optiques du microscope (lentille du condenseur, oculaires, objectifs et lampe) à l’aide de Kimwipes

4. Observations au Microscope • Garder une intensité lumineuse relativement faible. • Ne laissez pas la préparation sécher • Ne touchez pas la lamelle couvre-objet

5. Partie I: Anatomie de l’amibe Identifiez les structures et organites présentes dans la liste « structures amibe » (LabWeb): • Localisez une amibe sur votre lame en utilisant l’objectif 4x, puis passez au 10x puis au 40x pour observer les détails. • Des questions sur l’anatomie de l’amibe seront posées pendant l’examen de laboratoire.

6. capuchon hyalin plasmalemme endoplasme pseudopode vacuole digestive uroïde ectoplasme vacuole contractile noyau repas

7. Partie II: Mouvement Amiboïde Votre tâche: • Sous l’objectif 10x, observez la formation et l’élongation d’un pseudopode. • Passez au 40x et observez le flux de l’endoplasme granuleux. • Regardez la vidéo sur le site Digizoo. • Prenez des photos et faites des schéma, représentez le flux de l’endoplasme fluide par des flèches.

8. Partie II: Mouvement Amiboïde Astuces: • Localisez une amibe sur la lame en utilisant l’objectif 4x. • Fermez le diaphragme d’ouverture (sur le condenseur) vers la gauche pour augmenter le contraste (pas complètement ou l’image sera trop sombre). • Passez ensuite à l’objectif 10X ou 40X pour observer l’amibe avec le niveau de détail désiré

9. Partie III: Cycle de la vacuole contractile Votre tâche: Mesurer le diamètre de la vacuole contractile (en µm) durant son cycle. Vacuole contractile (VC): • Fonction: osmorégulation et élimination des déchets. • Durée: environ 5 minutes à 20°C (cycle augmente avec la température). • Emplacement: variable • Composantes du cycle: • Diastole: croissance continue • Systole: expulsion du contenu dans le milieu extérieur.

10. Partie III: Cycle de la vacuole contractile

11. Partie III: cycle de la VC t=0 Systole t=5-8 minutes (300-480s*) t=30 s Pas de vacuole visible (diamètre=0) Diastole t=60-120 s Des petites vacuoles s’agrègent puis fusionnent. *Arrétez les mesures après 480s

12. Vacuole Contractile – Méthodes • Identifiez une VC à l’objectif 10x. • Passez à l’objectif 40x. • Observez la VC pendant au moins un cycle complet avant de commencer les mesures. • Le t=0 correspond au moment de la systole (=la vacuole disparaît).

13. Vacuole Contractile – Méthodes • Photographiez la VC toutes les 30 secondes jusqu’à 480 secondes maximum. • Sauvegardez vos images dans un dossier: K:/BIO1540/BIO1540XX au format JPEG • Attention: sauvegardez vos images au fur et à mesure ou vous les perdrez • Une fois les 2 cycles terminés, mesurez le diamètre enµm de la VC sur chaque photo Attention: pendant la phase de mesure, n’écrivez rien sur les moniteurs d’ordinateurs.

14. Vacuole Contractile – Méthodes • Entrez vos données (2 cycles) dans le fichier Excel. • Les diamètres seront convertis en volumes, et la moyenne et l’erreur-type seront calculés automatiquement sur la feuille Excel. • Les données de la classe seront disponibles demain sur la page « Lab3 » du site web des laboratoire (PASBBLearn)

15. Partie IV: Endocytose • Démontez la lame contenant les amibes. Ne jetez pas la lame. • Jetez les lamelles dans les béchers situés au centre des bancs. • Allez à la station ‘endocytose’ (demandez à votre TA). • Attrapez 1 ou plusieurs amibes dans le flacon et transférez-les dans la plaque multi-puits avec le minimum de liquide • Ajoutez 2 gouttes de solution inductrice sur les amibes. • Attendez 1-2 minutes. • Transférez 1 amibe dans la lame “porte amibe”, placez une lamelle et observez la formation de canaux endocytiques sous le microscope (40X).

16. Budget-temps • Quiz Lab3 – 10 minutes • Présentation du laboratoire - 15 min. • Observation des Amibes – locomotion – anatomie – 45 minutes • Mesure de cycles de la vacuole contractile - 75 min. • Endocytose – 10 min. • Instruction pour le rapport / question / nettoyage des bancs et microscope – 10 min.

17. Rapport Lab3: Page de titre + Graphique • Graphique: Tracez un graphique (nuage de points) représentant le volume de la VC (moyenne de la classe et erreur type) pendant 1 cycle (t=0 à 480 secondes). • Utilisez les données combinées affichées sur le site web des labs. • Suivez les instructions postées sur le site web, et l’annexe I du manuel de laboratoire. • Utilisez du papier millimétré. • Incluez une légende située sous le graphique (cf. manuel) • Date de remise: • Sections de la semaine 1: deux semaines après votre lab Sections de la semaine 2: 1 semaine après le lab. • Les données combinées seront disponibles demain sur le site web des labs.

18. Rappels • Pour ne pas perdre de points techniques: • Rincez la lame « amibe » et remettez-la dans le plateau où vous l’avez prise. Jetez les lamelles dans le bécher prévu à cet effet. • Effacez tous les fichiers que vous avez sauvegardés • Nettoyez votre banc de travail • Nettoyez les surfaces optiques du microscope si vous avez versé du liquide • Montrez votre banc à votre Démonstrateur/trice avant de partir. N’oubliez pas: mini-quiz au début du lab4