1.33k likes | 1.56k Views
Genetika mikroorganismů. Z latinského genaó = tvořím Přenos genetické informace je základní atribut živé hmoty Základní genetické pochody jsou konzervativní = podobné u všech organismů ( společný původ? ) Genetická informace je uložená v nukleových kyselinách. Nukleové kyseliny.
E N D
Genetika mikroorganismů • Z latinského genaó = tvořím • Přenos genetické informace je základní atribut živé hmoty • Základní genetické pochody jsou konzervativní = podobné u všech organismů (společný původ?) • Genetická informace je uložená v nukleových kyselinách
Nukleové kyseliny • Základní nositelky dědičné informace • DNA = deoxirubonukleová kyselina (deoxyribonucleic acid) • RNA = ribonukleová kyselina (ribonucleic acid) • Fosfát – pentózová kostra s postranně navázanými bázemi • Pořadí bází nese genetickou informaci
P P P P P P P A A G G A G G G P P P P P P P P Nukleové kyseliny P T C C C T C C T
DNA Deoxyribóza Báze Adenin, Guanin, Cytozin, Thymin Stabilnější Obvykle dvouvláknová (double-stranded = ds) RNA Ribóza Báze Adenin, Guanin, Cytozin, Uracil Méně stabilní Obvykle jednovláknová (single-stranded ss) Nukleové kyseliny
Báze nukleových kyselin Purinové báze Adenin Guanin Pyrimidinové báze Cytosin Thymin Uracil
Dvouřetězcové NK • NK bývají obvykle dvouvláknové = dva samostatné řetězce NK jsou spojené vodíkovými vazbami mezi bázemi • Báze se tzv. párují • Oba řetězce jsou tzv. komplementární = nesou opačnou genetickou informaci („negativ a pozitiv“)
Párování bazí • Základ všech genetických pochodů • Párování umožňuje předávání a expresi genetické informace • Purin (A, G) s pyridinem (T, U, C) • 2 nebo 3 vodíkové můstky • A = T • A = U • C ≡ G
Šroubovicová struktura • Oba řetězce NK se vzájemně obtáčejí = dvojšroubovice • Řetězce leží tzv. antiparalelně = konec jednoho leží u začátku druhého („hlava-pata“) • podle popisu struktury pentózy jsou konce vlákna označovány jako 3’- a 5’-
Párování bazí DNA - DNA 5’- A T T C G G C T T A G G C G - 3’ 3’- T A A G C C G A A T C C G C - 5’ DNA – RNA 5’- A T T C G G C T T A G G C G - 3’ 3’- U A A G C C G A A U C C G C - 5’ RNA – RNA 5’- A UU C G G C UU A G G C G - 3’ 3’- U A A G C C G A A U C C G C - 5’
Genetická informace • Pořadí bází určuje genetickou informaci • Gen = úsek NK kódující nějakou funkci • Strukturní gen – kóduje strukturu bílkoviny • Gen pro RNA – kóduje strukturu RNA • Soubor všech genů = genom • Kromě genů jsou v NK i další úseky • Regulační (řídící) • Nekódující – bez funkce nebo s neznámou funkcí – evolučně pokročilejší organismy mají více nekódujících sekvencí
Genetické pojmy • Intron = sekvence DNA nekódující bílkovinu vmezeřená do strukturního genu • Sestřih = proces odstraňování intronů ze strukturního genu • Promotor = sekvence DNA uvozující gen nebo operon • Operon = sekvence několika genů se společnou regulací • Kodon = trojice bází kódující jednu aminokyselinu v peptidovém řetězci • Antikodon = sekvence tří bazí komplementární ke kodonu
Typy RNA • mRNA(messanger, mediátorová)= přenos exprimovaných genů z jádra na ribozómy • rRNA(ribozomální)= stavební funkce v ribozómech, uplatňují se při translaci • tRNA(transferová)= čtení genetického kódu, přenos aminokyselin při syntéze proteinů
Základní genetické pochody • Replikace (zdvojení) = kopírování genetické informace do nové molekuly NK • Transkripce (přepis) = kopírování malé části genetické informace z DNA do RNA • Translace (překlad) = syntéza primární struktury bílkoviny podle informace v RNA
Základní genetické pochody DNA replikace transkripce reverzní transkripce replikace RNA translace „Základní dogma molekulární biologie“ Bílkovina
Replikace • Nutná pro předání genetické informace další generaci • Enzym DNA polymeráza • Rozpletení dsDNA • Ke každému vláknu je dosyntetizováno druhé komplementární • Semikonzervativní (polovina nové molekuly DNA pochází od rodiče, polovina je nová)
P P P P P P P P P P P P P P C C C C C C T T A A A A G G G A G G G G G A G A P C C T T P P P P P P P P P P P T T T C P P P P
Exprese genů • Soubor pochodů vedoucích od genu po funkční bílkovinu • Možná regulace na všech úrovních transkripce translace gen mRNA polypeptid posttranslační modifikace transport Funkční protein
Transkripce • Přepis jednoho nebo několika genů z DNA do mRNA • Enzym RNA polymeráza
Reverzní transkripce • Pouze u tzv. retrovirů (např. HIV) • Přepis z RNA do DNA • Enzym reverzní transkriptáza – nekontroluje chyby mutace • Vzniklá DNA je integrována (začleněna) do genomu může vzniknout rakovina
Translace • Syntéza bílkovin podle genetické informace • Probíhá na ribozómech • Ribozóm se posouvá po mRNA a syntetizuje peptid • Čtení genetické informace podle genetického kódu mRNA
Genetický kód • Soubor kódů pro všechny aminokyseliny • 20 kódovaných aminokyselin • Jedna aminokyselina je kódována třemi bázemi (tzv. triplet nebo kodon) • Triplet = 64 kombinací genetický kód je degenerovaný (více kódů pro jednu aminokyselinu) • Genetický kód je univerzální (= až na výjimky stejný ve všech organismech)
Čtení genetického kódu 5’-A U UC G GC U UA G G- 3’ N- Ile ArgLeuArg-C Nukleové kyseliny jsou čteny i syntetizovány od 5’ konce Bílkoviny jsou čteny i syntetizovány od N konce
Čtecí rámec • 1 aminokyselina je kódována 3 bázemi = záleží na tom, kde se začne číst • Čtecí rámec, jsou 3 možné začátky čtení, ale jen jeden je správný 5’-A U UC G GC U UA G G- 3’ N- IleArg Leu Arg-C
Čtecí rámec • 5’-A U UC G GC U UA G G- 3’ N- IleArgLeuArg-C
Čtecí rámec • 5’- A U U C G G C U U A G G - 3’ N- Ile Arg Leu Arg -C 5’-AU U CG G CU U AG G- 3’ N- PheGlyLeu-C
Čtecí rámec • 5’- A U U C G G C U U A G G - 3’ N- Ile Arg Leu Arg -C 5’- A U U C G G C U U A G G - 3’ N- Phe Gly Leu -C 5’-AUU C GG C UU A G G- 3’ N- SerAlaSTOP-C
Genomika • Genetická informace uložena v DNA • U některých virů i v RNA • Genomika = věda zabývající se genomy a genetickou informací • Velikost genetické informace se udává v párech bazí (base pairs = bp)
Genetická informace • Jaderná • Chromózómy= hlavní „velké“ DNA • Mimojaderná • Plasmidy = malé kruhové DNA u bakterií • DNA v organelách (mitochondrie, plastidy)
Bakteriální genóm • Obvykle kruhová DNA • Obvykle jeden chromozóm • Volně v cytoplazmě • DNA obalena alkalickými aminy (spermin a spermidin) • Časté plasmidy, i několik desítek • Bez intronů • Geny uspořádány do operonů
Eukaryotický genom • LineárníDNA • Obvykle více chromozómů(člověk 46) • DNA je uložena vjádřeobaleném dvojitoumembránou • Zahuštěna do kompaktní struktury pomocí alkalických bílkovin (histonů) • Plasmidy výjimečné • Geny majíintrony • Operony nenacházíme
Archeální genóm • Mezistupeňmezi bakteriemi a eukaryoty • Obvykle lineární • Volně v cytoplasmě • DNA obalena bílkovinamipodobnými eukaryotickým histonům • Primitivní introny • Plasmidy (méně než bakterie) • Geny organizované dooperonů
Plasmidy • Krátké cyklické úseky DNA • Výskyt zejména u bakterií • V buňce může být i několik stovek plasmidů, stejných i různých • Některé plasmidy vzájemněnekompatibilní(nemohou být v jedné buňce) • Nezávisle se replikují • Občas vymizení
Plasmidy • Postaru nazývanéfaktory • Kódují vlastnosti, které bakterie k životu nutně nepotřebuje • rezistenci vůči antibiotikům(tzv. RTF –Resistence Transfer Factor) • nové metabolické dráhy (např. odbourávání uhlovodíků apod.) • produkce toxinů
Plasmidy • Význam v genetickém inženýrství • umělé plasmidy s požadovanými vlastnostmi
Replikace u bakterií • Dvojsměrná • 3 fáze • Iniciace (zahájení) • v tzv. místě ori(origin = počátek) • Elongace (prodlužování) • Terminace (zakončení)
Replikační enzymy u bakterií • DNA polymerázy • 3 druhy (DNA-pol I. II. a III.) dNTP + DNAn PP + DNAn+1 • dNTP = dATP, dGTP, dCTP, dTTP • napojování nukleotidů na 3’-konec • neumí začátek řetězce, jen napojovat, potřebuje tzv. primer (očko) = krátká sekvence DNA nebo RNA • DNA primáza • syntetizuje krátký fragment RNA - primer
H N 2 N N N O O O N O P O P O P O O H H O - O - O - H H H O H
Replikační enzymy u bakterií • DNA ligáza • spojuje delší řetězce DNA • DNA helikázy • rozplétají dvojšroubovici na jednotlivá vlákna
Iniciace replikace 1. Rozpoznání ori místa • DnaA proteiny – najdou orimísto a oddělí v něm oba řetězce DNA • ori místo je bohaté na AT páry = snadno se oddělí • vznik tzv. replikační vidlice 2. Navázání helikáz • na oba konce vidlice se naváže helikáza a začne rozplétat DNA 3. Navázání DNA polymeráz a dalších replikačních enzymů
Iniciace replikace A A A A
Iniciace replikace A A A A
Iniciace replikace A A A A H H
Iniciace replikace A H H A A A
Iniciace replikace A H H A A A
Iniciace replikace Pol A H Pol H A A A
Iniciace replikace Pol A H Pol H A A A