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乙肝表面抗原的 ELISA 法定量分析方法学验证. 课程要求. 掌握： ①乙肝表面抗原的 ELISA 法定量检测方法； ② ELISA 法方法学评价的方法。 熟悉： ①定量检测的酶标仪操作要领； ②各种缓冲液的配制。 了解： ELISA 检测中的影响因素和注意事项。. 试验目的. 进行乙肝表面抗原 ELISA 法定量分析的方法学验证。. 试验材料. 1 试剂盒 乙肝表面抗原 ELISA 法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。 2 仪器及酶标板 酶标仪： Bio-Rad 680 ；
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课程要求 掌握： ①乙肝表面抗原的ELISA法定量检测方法； ②ELISA法方法学评价的方法。 熟悉： ①定量检测的酶标仪操作要领； ②各种缓冲液的配制。 了解： ELISA检测中的影响因素和注意事项。
试验目的 • 进行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法学验证。
试验材料 1 试剂盒 • 乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。 2 仪器及酶标板 • 酶标仪：Bio-Rad 680 ； • 洗板机：Bio-Rad 1575； • 超纯水系统：Millipore Elix ； • 电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有限公司。
3 溶液配制 • 0.01M pH7.4的PBS缓冲液： 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。 • 质控品： 用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。
试验方法 1 标准曲线各浓度的配制 • 用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625ng/ml。
2 测定方法 • 设计标准品、质控品及空白分配方案； • 取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按需要重新配制； • 在相应孔中加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul； • 37℃温育30min，洗板4次； • 加入酶标抗体，生物素二抗，50 ul/孔； • 37℃温育30min，洗板4次； • 加入A、B液,50 ul/孔，37℃温育15分钟。 • 加入终止液，50 ul/孔。
3 标准曲线制作及结果计算 • 酶标板放入酶标仪，盖上盖子； • 在电脑上打开Microplate Manager 5.2软件 • 选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值； • 输入标准品各浓度值，以双对数法制备标准曲线，获取各孔的浓度值，打印标准曲线图和计算结果。
4 准确度（回收率）计算 • 按示例表1样式列表并计算回收率。
6 检测限（LOD）计算： • 取空白孔的OD值的均数加2倍标准差。
注意事项 • 标准品和质控品配制要准确。 • 实验各个环节都很重要，每步操作都要认真。
讨 论 1.实验背景介绍（目的、采用的方法、检测原理、方法学验证的基本知识介绍） 2.本实验的设计及实施特点 3.实验结果分析 4.临床应用及分析
本实验报告要求 • 按科研论文格式 • 有摘要和关键词 • 字数不限 • 以WORD形式打印，元月18日前集体上交。
