1 / 18

Pullulanase Type 1 Pullulan 6-glucanohydrolase EC 3. 2. 1. 41 ( Baccillus subtilis strain 168)

Oleh: Riong Seulina Panjaitan (20511313 ) Nelson Gaspersz (20512021). Pullulanase Type 1 Pullulan 6-glucanohydrolase EC 3. 2. 1. 41 ( Baccillus subtilis strain 168). Agenda Presentasi. Klasifikasi Enzim Mekanisme Reaksi Enzim Isolasi, Pemurnian dan Karakterisasi Enzim

alissa
Download Presentation

Pullulanase Type 1 Pullulan 6-glucanohydrolase EC 3. 2. 1. 41 ( Baccillus subtilis strain 168)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Oleh: Riong Seulina Panjaitan (20511313) Nelson Gaspersz (20512021) Pullulanase Type 1Pullulan 6-glucanohydrolaseEC 3. 2. 1. 41(Baccillus subtilis strain 168)

  2. Agenda Presentasi • Klasifikasi Enzim • Mekanisme Reaksi Enzim • Isolasi, Pemurnian dan Karakterisasi Enzim • Struktur 3D Enzim Pullulanase • Inhibitor Enzim • Kegunaan dan Aplikasi Enzim

  3. Klasifikasi Enzim EC. 3. 2. 1. 41 Pullulanase Pada senyawa pullulan, pati dan amilopektin Menghidrolisis ikatan glikosida Kelas Hidrolase Recommended Name: pullulan 6-glucanohydrolase • Synonim Name: • α-dextrin endo-1,6-α-glucosidase • amylopectin 6-glucanohydrolase • limit dextrinase

  4. HidrolisisPullulan Pullulanase

  5. PeremajaanBakteri Inkubasi, t= 24 jam, T =37 oC, diinduksidengan IPTG pada 600 nm kulturinokulasikandalam media LB 500 mL

  6. InokulasiBakteriPenghasilEnzimPullulanase Inokulasi KulturBakteri Media LB 500 mL+ Ampisilin 100 µg/mL KoloniBakteri Inkubasi t= 60 jam, T= 18°C

  7. IsolasiEnzim Kultur bakteri Supernatan : dimurnikandanujiaktivitasenzimekstraseluler Sentrifugasipada6000 rpm, t=20 menit, T=4oC Sentrifugasi 14000 rpm, t=30 menit, T=4oC pellet Sonikasi Buffertris-HClpH 8,1 Supernatan : dimurnikandanujiaktivitasenzimintraseluler

  8. PemurnianEnzim Crude Extract Supernatan : fraksinasiAmoniumSulfat 60 % dansentrifugasi Supernatan Sentrifugasi Pellet dilarutkan buffer tris-HCl pellet EnzimPullulanase Dialisisdengan buffer Protein dialirkankedalamkolomdandielusidengangaram

  9. UjiAktivitasEnzim (Bernfeld 1955)

  10. PengujianEnzim

  11. KarakterisasiEnzim

  12. TabelHasilPemurnianEnzim

  13. SDS-PAGE Enzim

  14. Struktur EnzimPullulanase Struktur Kristal EnzimPullulanase Struktur 3D EnzimPullulanase

  15. Inhibisi Enzim • Mekanisme Inhibisi Enzim dapat dibagi 2 yaitu: • Inhibisi reversibel • Membentuk kompleks enzim inhibitor yang meningkatkan laju reaksi • Inhibisi irreversibel • Membentuk senyawa yang stabil dengan enzim melalui ikatan kovalen dengan residu asam amino pada sisi aktif • Enzim ini dapat menginhibisi produk dan sustrat : • Untuk inhibisi substrat  banyak substrat yang dapat digunakan oleh organisme ketika konsentrasi enzim rendah dan ketika konsentrasi enzim tinggi substrat dapat bertindak sebagai inhibitor pertumbuhan yang beracun • Untuk inhibisi produk  Inhibisi produk akan meningkat ketika produk mengikat enzim bebas dan memblok akses ke substrat. • Sehingga enzim ini bersifat sebagai inhibitor kompetitif

  16. Kegunaan dan Aplikasi Enzim

  17. REFERENSI Malle, D., T. Itoh, W. Hashimoto, K. Murata, S. Utsumi and B. Mikami, 2006, Overexpression, purification and preliminary X-ray analysis of pullulanase from Bacillus subtilis strain 168, ActaCryst. (2006). F62, 381-384. Singh, Ram S., G. K. Saini, J. F. Kennedy, 2010, Maltotriose syrup preparation from pullulan using pullulanase, Carbohydrate Polymers 80 (2010) 401–407. Zhang, H., Y. Tian, Y. Bai, X. Xu, Z. Jin, 2012. Structure and properties of maize starch processed with a combination of α-amylase and pullulanase. Int. J. Biol. Macromol. 3407 (2012) 1-7.

  18. Terimakasih Prof. Dr. FidaM. Warganegara

More Related