1 / 24

Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE

Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE. Možnost využít rozpouštědla, které ovlivní selektivitu separace Nízká vodivost pracovních elektrolytů rozpuštěných v nevodných rozpousštědlech Možnost separace obtížně separovatelných látek

annick
Download Presentation

Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE • Možnost využít rozpouštědla, které ovlivní selektivitu separace • Nízká vodivost pracovních elektrolytů rozpuštěných v nevodných rozpousštědlech • Možnost separace obtížně separovatelných látek • možnost analýzy látek nestabilních ve vodném prostředí Fyzikálně chemické vlastnosti rozpouštědel používaných v NACE

  2. Požadavky na rozpouštědlo pro NACE • Kompatibilní s materiálem kapiláry a detektorem • musí být dobrým rozpouštědlem pro složky pracovního elektrolytu i pro separované analyty • musí být dostupné v dostatečné čistotě. Důležitý je poměr relativní permitivity a viskozity! Čím je viskozita větší tím bude pomalejší separace. Vzhledem k nízké viskozitě a poměrně dostatečné polaritě jsou nejčastěji používaná rozpouštědla pro NACE methanol a acetonitril, případně jejich směsi v různých poměrech. Methanol je navíc rozpouštědlo, které změní disociační konstanty kyselin a zásad oproti vodnému prostředí.

  3. Electrophoregrams of nine structurally similar chiralanticholinergic drugs using 20 mM phosphoric acid and 10 mMNaOH, containing 10 mM HDMS-β-CD in methanol. (1) Compound I; (2) compound II; (3) compound III; (4) compound IV; (5) compound V; (6) compound VI; (7) compound VII; (8) compound VIII; (9) compound IX. (*) 55 cm capillary tube in efficient length for compounds IV and V; 45 cm for others.

  4. Analysis of phtalate derivatized PEG 2000 (2 mM). Uncoated fused silica capillary: 67 cm lt, 58.5 cm ld, 50m i.d. Running buffer: 210mM Tris at pH 8.7, with 0, 20, and 40% ACN. Capillary temperature: 25 ◦C. Run voltage: 30 kV. Injection at 50 mbar for 8 s. UV detection at 205 nm

  5. Hydro–organic MEKC analysis of a cosmetic product containing PEG with chain lengths between 8 and 21. Uncoated fused silica capillary: 58 cm lt, 44cm ld, 50m i.d. Running buffer: 20mM borax, 50mM SDS, 20% THF. Run voltage: 25 kV. Injection at 50 mbar for 6 s. UV detection at 234 nm. Peak E5: internal standard.

  6. Využití heterokonjugace pro separace fenolických derivátů NACE Heterokonjugace = konjugace mezi nedisociovanou kyselinou a vhodným aniontem Vhodný anion např. k. pikrová V nevodném aprotním rozpouštědle (acetonitril) se budou tvořit homokonjugáty: V případě, že se v systému vyskytuje další kyselina slabší než k. pikrová dojde ke tvorbě heterokonjugátů: Heterokonjugáty jsou v prostředí acetonitrilu stabilní a lze je vzájemně separovat

  7. Aplikace plošné kapilární elektroforézy Elektroforéza v plošném uspořádání se hodí pouze pro separaci molekul s vysokou hodnotou MR. Běžné jsou separace fragmentů peptidů, proteinů, enzymů a nukleových kyselin. Po ukončení separace je potřeba provést detekci odseparovaných látek vhodnou detekční metodou (barvením, imunofixací, MS apod.) Častěji je využívána jako metoda identifikační a semikvantitativní. Přesnou kvantitativní analýzu lze provést, ale velmi obtížně. Nejčastější je dnes 2D-gelová elektroforéza

  8. SDS PAGE

More Related