Auteur : Bruno Flamand, IUT de Dijon

8. Automatisation de l'h�mogramme La chronologie par �tapes

11. Deux principes tr�s diff�rents:

12. La variation d'imp�dancePrincipe Coulter

13. Construction des histogrammes de distribution volum�trique: 1-amplification des impulsions (�V en mV)2-tri des impulsions selon des seuils �lectroniques3-R�partition des impulsions dans des canaux �lectroniques (256 ou 128) en fonction du niveau d�impulsion donc du volume cellulaire 4-comptage des impulsions dans un intervalle de volume cellulaire

14. Num�ration des Globules Rouges et des Plaquettes Bac de comptage des GR/PLT Comptage et mesure du volume � partir d'une suspension cellulaire dilu�e en solution isotonique: taux de dilution �lev� (1/10 000 � 1/20 000 ), ce qui permet de rendre n�gligeable une interf�rence des GB Un seul bac de comptage: Toute particule d'un volume sup�rieur � 25 fl (et inf�rieur � 250 fl) est compt�e comme un GR Toute particule d�un volume sup�rieur � 2 fl (et inf�rieur � 25 fl) est compt�e comme une PLT Chaque particule est plac�e dans un histogramme de distribution volum�trique

15. Num�ration des Globules Rouges Histogramme des GR Mise en �vidence de fragments de cytoplasme ou de grandes plaquettes par l'analyse de l'histogramme � partir de 24 fl.

16. Num�ration des Globules Rouges Les param�tres calcul�s L'IDR ou RDW (Red Cell Distribution Width) L'IDR est une valeur statistique correspondant au CV % calcul� sur la distribution des rouges = coefficient d'anisocytose.

17. Num�ration des Plaquettes Histogramme des PLT et param�tres calcul�s

18. Num�ration PLT Existent des seuils variablespermettant �limination risques d�interf�rences et num�rations justes

19. Num�ration des globules blancs Bac de comptage des GB Comptage � partir d'une suspension cellulaire dilu�e en liquide h�molytique: taux de dilution faible, (1/200 � 1/300) Un bac de comptage r�serv� Toute particule d'un volume sup�rieur � 35 fl est compt�e comme un globule blanc. Les globules rouges sont lys�s (ammonium quaternaire, ferri cyanure, cyanure de K+), permet la lib�ration de Hb CyanMetHb Une partie de la dilution des leucocytes passe dans une cuve spectrophotom�trique pour la mesure � 540 nm

20. Le r�sultat de num�ration est assujeti � une correction dite "correction de co�ncidence". Occasionnellement deux ou trois cellules peuvent traverser l'orifice de comptage en m�me temps. Une impulsion de grande amplitude est g�n�r�e. La fr�quence de ces passages en co�ncidence est statistiquement pr�visible en fonction du nombre de cellules. Cette correction est r�alis�e automatiquement par les analyseurs. Correction de passage en co�ncidence  Doublet ou triplet cellulaires

21. LA FORMULE LEUCOCYTAIRE automatis�eTROIS POPULATIONS ou CINQ POPULATIONS (5 Diff)

23. Formule 3 populationsR�le de la lyse diff�rentielle (Cytolyse m�nag�e)

24. Histogramme diff�rentiel volum�trique de GB D�termination de 3 sous-populations Reconnaissance des cellules d'apr�s le volume r�sultant, par variation d�imp�dance 3 sous populations : Lymphocytes, Monocytes, Granulocytes. Les anomalies de distribution sont signal�es par des alarmes.

26. Hydrofocalisation

27. La mesure optique

29. Formule 5 Populations : crit�res de reconnaissance Les automates associent divers principes technologiques permettant l�acc�s � divers crit�res de reconnaissance Variation Imp�dance (= Volume cellulaire) Principe Coulter pour le volume, ou mesure optique pour la taille Diffraction lumineuse (= taille cellulaire et Granularit�) Diffraction de la lumi�re par la cellule (diff�rents angles) Cytochimie s�lective Coloration d�un �l�ment de la cellule, par simple affinit� (ex:coloration des granulations �osinophiles) ou par activit� enzymatique chromog�ne s�lective (ex: peroxydase des granulations) Conductivit� (opacit�) Courant Radio Haute Fr�quence (RF) Structure de la cellule par un conduction courant haute fr�quence Cytolyse Lyse s�lective de populations. Ex: tous les GB sauf PB. (�videmment dans tous les cas de FL compl�te automatis�e, la lyse de GR est obligatoire

30. D�termination de la formule 5 populationsChaque soci�t� sur ses automates combine plusieurs technologies et donc plusieurs crit�res de reconnaissance Imp�dance + Conductivit� HF + Diffraction lumineuse BeckmanCoulter Automates MAXM, HmX, GenS, LH500, LH750 Imp�dance + Cytolyse + Cytochimie (Actvit� peroxydasique) BayerDiagnostics Automates Advia120, Technicon H2, H3 Imp�dance + Cytolyse + Cytochimie (Coloration des granulationsEo.) HoribaAbx Automates Pentra60, Pentra80, Pentra120 BayerDiagnostics Automates Advia70 BeckmanCoulter Automates ACT 5Diff Diffraction lumineuse + Cytochimie (Eosino) + Cytolyse Sysmex SF3000, XE2100 Diffraction lumineuse multi-angulaire sans cytolyse AbbottDiagnostics Automates CELL-DYN 3200, 3700, 4000

31. Horiba ABX Imp�dance/Cytolyse/Cytochimie

33. Horiba ABX Imp�dance/Cytolyse/Cytochimie

34. Horiba ABX Imp�dance/Cytolyse/Cytochimie 

37. Beckman Coulter Imp�dance/Conductivit�HF/Diffraction

39. Beckman CoulterImp�dance/Conductivit�HF/Diffraction Analyse en 3D

41. Abbott DiagnosticsDiffraction Laser multi-angulaire

42. Abbott Diagnostics  Diffraction Laser multi-angulaire  Angles de diffraction et crit�res de reconnaissance

43. Abbott Diagnostics Diffraction Laser multi-angulaire  Diffractogrammes

47. Bayer-Technicon Diffraction/Cytolyse/Cytochimie Diffraction lumineuse enregistr�e sous deux angles diff�rents

49. Bayer-Technicon Diffraction/Cytolyse/Cytochimie Diagramme Perox et Diagramme Basophiles

50. SysmexVolume/RF/Cytolyse

51. Volume/RF/Cytolyses

52. Volume/RF/Cytolyses Matrice RF/Volume et Histogrammes Eo et Ba

53. Le marquage d�autres types cellulairesLes R�ticulocytesMarquage fluorescent sur ARNs r�siduels

54. R�ticulocytesFluorescence vs Complexit�

55. Diffraction lumineuse + Cytolyse Sysmex

56. SysmexDiffraction lumineuse/Cytolyse

57. Diffraction lumineuse/CytolyseEnregistrement de deux angles de diffraction

58. Diffraction lumineuse/CytolyseFormule Ly, Mo, Eo, Ne+Ba

59. Diffraction lumineuse/CytolyseD�termination de la 5 �me pop : les Neutrophiles

60. Diffraction lumineuse avec ou sans cytolyse compl�mentaire Abbott

61. R�ticulocytesNouveau bleu de m�thyl�ne

62. Cytolyse compl�mentaire Abbott (CD 3200)

63. Cytolyse : le NOCCD 3200

64. Diffraction lumineuse + Marquage Abbott

65. Marquage � l'iodure de propidium CD 4000

66. Analyse de la fluorescence Marquage des noyaux accessibles

67. LE MARQUAGE D'AUTRES TYPES CELLULAIRESRETICULOCYTESCD4/CD8

68. Lymphocytes T4/T8Marquage des sites CD4/CD8 par cytosph�res (Ag-Ac)