Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas

1. Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas Dr. Carlos Díaz Olachea 2005

2. Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas • Termino aplicado en Patología Clínica a la metodología empleada en la detección de enfermedades infecciosas pueden ser: • Detección de Antígenos directos • Detección de la respuesta inmune (Anticuerpos ó células sensibilizadas) del huésped al antígeno específico • Detección indirecta de respuesta inmune a otros antígenos( Reacción cruzada)

3. Pruebas Inmunológicas en Enfermedades infecciosas • Se describen ejemplos más frecuentes: • ASLO • Diagnóstico de EBV • Reacciones Febriles • Rotavirus • H. Pylori • Otras que se discutirán en la sección especifica del programa son: • Infecciones virales exantemáticas • Hepatitis viral • TB • Hongos • Etc.

4. Antiestreptolisinas O (ASLO) • Son anticuerpos contra estreptococo beta hemolítico del grupo A • Indican solo exposición al Estreptococo beta hemolítico del gpo. A • Aparece a la semana de infección, pico máximo a las 3 semanas • Utilidad clínica asociada a complicaciones secundarias del estreptococo como Escarlatina, F. Reumática, Glomérulo nefritis, Endocarditis bacteriana. • NO es específico

6. Antiestreptolisinas O (ASLO)técnica: • Inhibición de la hemoaglutinación • Aglutinación látex • Valores de referencia: • Adultos < 160 U/ml Todd • < de 2 años < 50 • de 2 a 4 años < 160 • de 4 a 12 años entre 160 – 300 • Alterados por esteroides, uso de antibióticos y beta lipoproteína • Substituida por pruebas rápidas

8. EBV • Manifestación clínica primaria: Faringitis y Linfocitosis, Esplenomegalia ó Hepatitis y Fiebre prolongada. • Normalmente en < de 10 años, subclínica • Adolescencia MI (Fiebre glandular) 4-7 semanas de incubación, inicio insidioso, fiebre fluctuante, faringitis, linfadenopatía y hepato esplenomegalia. • Dura varias semanas, raro meses. • 90% de adulto tienen Acs. Contra el • Reactivación: • Eliminación de virus en saliva • Linfoproliferación B • Inmunosupresión y linfoproliferación • Neumonitis y afectación de SNC es raro.

9. ÉBV Infección Latente LCT Replicación L NK En inmunodepresión aparece: Mononucleosis Infecciosa Linfomas tipo Hodking, Linfomas Inmunoblasticos Linfomas Burkitt´s CUCI Etc.

11. EBV Diagnóstico • Cuadro Clínico de presentación • Citometria hematica con linfocitosis atípicos > 30%, neutropenia y trombocitopenia ocasional • Enzimas hepáticas elevadas • Acs. Heterofilos (monotest, mospot) • Acs. Que dan reacción cruzada co GR de carnero y caballo. Especificidad de 95% • Positiva en : 30% niños < 2 años y > 2 a 4 años 90% . Japoneses negativa • Falsos positivos en Linfoma y enfermedades autoinmunes. • Títulos de Acs. Específicos IgM • PCR

12. EBV Diagnóstico • Componentes virales: • Antigeno del capside (VCA) IgG e IgM (+) en enfermedad temprana • Antigeno temprano (EA) (+) en enfermedad temprana y convalecencia • Antigeno nuclear (NA) (+) en convalecencia y reactivación crónica • El VCA es producido por linfos B infectados se encuentra en citoplasma, el IgM se encuentra a las 4 – 7 días de infección a conc. Bajas desaparece a los 2 – meses • Ideal PCR carga viral

13. Las Reacciones FebrilesPruebas de laboratorio • Grupo de pruebas de aglutinación de antígenos bacterianos por anticuerpos presentes en el suero de pacientes con enfermedades infecciosas no relacionadas. • Reacción de Widal • Reacción de Hudleson • Reacción de Weil Felix • Tularemia

14. Reacciones FebrilesMetodología • Uso de suspensiones de bacterias tratadas (atenuadas) previamente identificadas. • Suero de paciente • Placas ó tubos • Observación de aglutinación • Actualmente se agrega a algunas un medio de identificación macroscópica como el Rosa de Bengala

16. Reacción de Widal • Diseñadas para infecciones por Salmonella • S. Tiphy • S. Enteritidis • Antígenos • Tifico O Somático • Tifico H Flagelar • Vi • Paratifico A • Paratifico B • Antígeno C • Antígeno E • Sin embargo todos los antígenos dan reacciones cruzadas en zonas endemicas.

17. Interpretación • Títulos de Tifico O de 1:160 ó mayores • Títulos de Tifico O, H, Paratifico A ó B que aumenten 3-4 veces el valor inicial en 2 ó más determinaciones en el transcurso de la enfermedad, en zonas endémicas. • Zona NO endémica cualquier título es positivo.

18. Falsas Negativas Falta de respuesta inmune en el 30% de los casos Uso de antibióticos que inhibe la respuesta inmune Tiempo inadecuado para la determinación (lo más frecuente) falta de estandarización comercial de los antígenos. Error de laboratorio ( fenómeno de Zona) Reacción de Widal • Falsas positivas • Inmunización previa con vacuna tifoidica • Hepatitis aguda y crónica • Endocarditis estreptococcica • Brucelosis • Infección por bacterias Gram negativas • Salmonelosis

20. Reacción de WidalConclusiones • No substituye los cultivos • No es específica • No estandarizada • Difícil interpretación • La negatividad no descarta la enfermedad

21. Reacción de Hudleson • Después del cultivo son las pruebas más específicas para el diagnóstico de Brucelosis. • De las reacciones febriles son las más útiles y confiables

23. Reacción de Hudleson • Se utiliza una suspensión de Brucella Abortus para la investigación en suero del paciente anticuerpos contra las tres especies comunes de Brucella: Suis , Mellitensis y Abortus. • Métodos usados son: Aglutinación en placa, tubo, IEA, ELISA.

24. Reacción de HudlesonInterpretación • Títulos de 1:160 ó mayores son diagnósticos en zonas endémicas • Para Banco de sangre en donadores sanguíneos cualquier título es positivo. • Los títulos ascenderán en 2 ó más determinaciones durante la enfermedad. • Un resultado negativo no descarta el diagnóstico.

25. Reacción de Hudleson • Los anticuerpos aparecen en relación a la bacteremia y alcanzan títulos altos (miles) • Al alcanzar el nivel máximo puede ocurrir: • Disminución gradual con desaparición en 6 meses a un año. • Normalizarse y luego ascender • Producir espigas intermitentes sin normalización • Negativizarse por bloqueo (zona)

27. falsas negativas Falsas positivas Memoria inmunologica Reacción cruzada con otras enfermedades Idiopatica Error de laboratorio Reacción de Hudleson • Respuesta inmune inadecuada (30%) • Fenómeno de zona • Anticuerpos bloqueadores • Uso de antibióticos • Defectos técnicos

28. Reacción de Weil Felix • Son pruebas de aglutinación catalogadas como NO específicas, porque la intención de la prueba es la búsqueda de anticuerpos contra ciertas cepas de bacterias del tipo del Proteus. • La reacción clásica utiliza cepas de Proteus OX19, Proteus OXK, Proteus OX2.

29. Reacción de Weil Felix • En las Rikettsiosis los anticuerpos aumentan en la 2da. Semana y alcanzan su máximo en la 3a. Y 5ta semana y desaparecen en 1 a 2 meses. • Aumentos de los títulos de 2 a 4 veces en 4 a 7 días de diferencia es la base del diagnóstico. • Los títulos siempre son altos > 1000

30. Falsas Negativas Falta de respuesta Inmune Uso de Antibióticos Falsas Positivas Infecciones por Proteus, predominantes en vías urinarias . Reacción cruzada con otras enfermedades infecciosas y auto inmunes. Reacción de Weil Felix

31. RotavirusNorwalk virus • Afecta más de 130 millones de niños anualmente en el mundo y produce una mortalidad de 1 millon. (ASM News 64, 1998) • La detección de antigenos en heces en niños de 2 meses a 3 años causa más común de diarrea ( 30-40% de las GEV). • Contaminación oro-fecal • Solo útil en periodo agudo de diarrea inicio de síntomas 4 –48h. • Em Mayores de 3 años 90% tienen Acs. IgG. • Sensibilidad 100% y VPP amplio de 57.7 93.7 % • Journal of Clinical Microbiology, December 2001, p. 4532-4534, Vol. 39, No. 12 • MMWR, 3/99, Vol. 48. • Pediatric Infectious Disease Journal. 22(9):808-814, September 2003

32. TABLE 1.   Summary of results Test Sensitivity (%) Specificity (%) NPV (%) PPV (%) No. of results that were: Concordantly positive Concordantly negative False negative False positive EM 14 378 1 0 93.3 100.00 99.73 100.00 Pathfinder rotavirus 15 367 0 11 100.00 79.10 100.00 57.70 Ridascreen rotavirus 15 377 0 1 100.00 99.73 100.00 93.74

33. Rotavirus Prueba ( ICG ) inmunocromatografica Sensilidad 100% Especificidad 97.3% Positivo Negativo

34. Helicobacter Pylori • El Helicobater pylori (H.pylori) es una bacteria microaerófila, espiroidea, que coloniza primeramente la mucosa gastrica antral, donde produce una inflamación aguda y crónica denominada gastritis crónica activa. • El nicho ecológico en los seres humanos parece estar restrigido al estómago y al duodeno. • Fue descubierto por Marshall y Warren hace más de 20 años y es reconocido como uno de los patógenos más comunes y médicamente más importantes de todo el mundo. • El Helicobacter pylori es una infección común, donde el 50% de los adultos de mediana edad han sido infectados con ella. Tiende a propagarse entre personas que viven juntas, que comparten la comida y los baños. • Se diagnostica por exámenes de laboratorio como: * Análisis de sangre. • *Análisis de aliento de urea. • *Análisis de heces. • *Endoscopía.

35. Helicobacter Pylori • Después de infectarse con H.pylori la mayoría de las personas desarrolla gastritis, una inflamación del revestimiento del estómago. Sin embargo la mayoría de las personas nunca tienen síntomas o problemas relacionados con la infección, cuando los síntomas estan presentes pueden incluir: • Dolor sordo • Pérdida de peso. • Pérdida de apetito. • Pesadez de estómago. • Eructos. • Náuseas. • Vómitos

36. Pruebas inmunocromatografica para Suero y heces

37. Pruebas inmunocromatografica para Suero y heces

38. Pruebas inmunocromatografica para Suero y heces

39. HELICOBACTER PYLORI EN ALIENTO • Principio de la prueba • Consiste en administrar al paciente una cápsula conteniendo urea marcada con Carbono (C 14) 14; en presencia de H. pylori la urea marcada se convierte en amonio e ión de bicarbonato, el cual lleva el carbono marcado. Más tarde pasa la circulación y es excretada a través de los pulmones. • La prueba de aliento con urea implica le recolección de una muestra de aliento 15 minutos después de beber una solución con C 14. si H. pylori está presente, su enzima ureasa hidrolizará la urea en CO2, que finalmente será excretada en el aliento. Pueden presentarse resultados negativos falsos si la prueba se hace dentro de la semana siguiente de haber tomado inhibridos de bomba de protones, bismuto o antibióticos, o después de una cirugía gástrica.

40. Comparación de métodos En Lab del HSJ-2005

41. Evaluación de Artritis • Pcr ó VSG • Factor Reumatoide • Tipo de HLA • ANA • Pruebas para LES • Anti DNA y Sm • Complemento • Citometría Hematica • Química sanguinea

42. Artritis Reumatoide • La AR se caracteriza por ser crónica, bilateral y simétrica, erosión articular y periarticular, nódulos subcutáneos, vasculitis. • Asociación con DR4 y DR1 • Marcadores: • Factor reumatoide • Anticuerpo antiqueratina • Factor antiperinuclear • Anticuerpos asociados a antígeno nuclear (RANA) • Anti RA33

43. Artritis Reumatoide • Inflamación de tres ó más articulaciones pos > 6 semanas • Inflamación de muñecas, cadera ó rodillas por > 6 semanas • Dolor e inflamación matutina por una hora y por >6 semanas • Cambios en manos y radiografías de AR ( erosión y descalcificación ) • Nódulos reumatoides • Factor reumatoide positivo ( normal en 5 %) • Se requieren al menos 4 criterios. • Arnett et.al. Arth. Rheum 30:S17, 1987)

44. Artritis ReumatoideFactor reumatoide (FR): • Ig tipo IgM(IgA ó IgG) anti fracción Fc de la IgG. • Detección por aglutinación, Elisa, Nefelometría. • FR se asemeja la proteína A de estafilococo aureus • Positivo en • 50-90% de AR • 75% de SS • 60% MCTD • 35% LES

45. Positivo Negativo Factor reumatoide por aglutinación