Diagnostic sérologique de la FCO (ELISA, SN) : état des lieux

1. Journée FCO - Mars 2010 Diagnostic sérologique de la FCO (ELISA, SN) :état des lieux E Albina, C Cêtre-Sossah, C Grillet,R Lancelot, A Pédarrieu

2. Les bases immunologiques • Infection ou vaccination (atténué/inactivé) production d’anticorps • Différentes spécificités : • Anticorps anti-orbivirus (FCO – EHDV) • Anticorps anti-sérogroupe (FCO) • Anticorps anti-sérotype Anticorps neutralisants VP2– VP5 Anticorps de groupe FCO VP7–VP3 VP1, VP4 and VP6

3. Tests recommandés par l’Organisation Mondiale de la Santé Animale (OIE) • Fixation du complément (désuet) • Immunodiffusion en gélose(croise avec EHDV) • ELISA de compétition (prescrit dans les échanges internationaux) = meilleure sensibilité, robustesse, spécifique du sérogroupe FCO Détection de sérogroupe FCO pas de différenciation animal vacciné/infecté

4. Tests ELISA • En France, cinq tests sont agréés par la DGAl sur la base d’un contrôle par le LNR sérologie (CIRAD) • Ils sont tous basés sur une réponse anticorps dirigée contre la VP7 Anticorps neutralisants VP2– VP5 Anticorps de groupe FCO VP7–VP3 VP1, VP4 and VP6

5. Tests ELISA • Deux principes : ELISA de compétition ELISA sandwich Plaque Plaque Ag Ag Test sérum + Mab Test sérum A B B A Substrat Substrat Pas de coloration Coloration Coloration Pas de coloration POSITIF NEGATIF POSITIF NEGATIF

6. Tests ELISA • 3 tests de compétition : • détection des anticorps à 14-21 jours post-infection • 2 tests sandwich : • détection plus précoce 7 jours post-infection en particulier après vaccination avec vaccin inactivé, • meilleure détectabilité (entre 1 et 2 dilutions base 2) aucun test DIVA pratiquement plus de sérologie en France

7. Evolution des tests ELISA au CIRAD FCO Corse FCO Continent

8. Dispositif diagnostic sérologique en France • LNR Sérologie CIRAD  EILA Européen annuel • Laboratoires départementaux d’analyse vétérinaire  EILA national (pas en 2009 et 2010)

9. Le test de séroneutralisation • Test spécifique du type (24 sérotypes) • Basé sur l’interaction anticorps - VP2 & VP5 • Test non décrit dans le manuel OIE (!) •  réactions croisées entre sérotypes Principe Plaque virus Test sérum Cellules sensibles A B Substrat Pas de lyse Lyse POSITIF NEGATIF

10. Réactions croisées entre sérotypes Neutralisation croisée in vitro Protection partielle croisée Faible communauté antigénique

11. Application pratique : le cas de la surveillance sentinelle en Corse • Prélèvements mensuels de 150 veaux de 6 à 12 mois dans chaque département depuis 2005 • Analyse ELISA aux LVD • Envoi positifs et douteux CIRAD pour séroneutralisation

12. 2008 : 119 positifs sur 6400 (1,86%) 2009 : 228 positifs sur 4000 (5,7%)

13. Résultats SN Corse • Analyse de 55 résultats « complets » pour les 6 sérotypes identifiés en Corse:BTV-1, 2, 4, 8, 9 et 16

14. Analyse en composantes principales

15. Hypothèses • Fiabilité de la SN ? • Réactions sérologiques croisées hors cadre? • Vaccination/infection sérotypes 1 et 8? • … ?

16. Performances des tests : EILA européen • 100 % de résultats conformes en ELISA avec tous les kits représentés (36 laboratoires participants) • 0% de résultats conformes en SN(8 laboratoires participants)

17. Résultats détaillés SN, EILA européen

18. Perspectives • Epilogue sur la séroneutralisation : • Standardisation du test à l’échelle européenne • Apprentissage des réactions croisées entre sérotypes européens • Perspectives ELISA : ELISA DIVA ?

19. Merci pour votre attention