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CONCORSO CENTOSCUOLE “Verso il futuro con l’ingegneria genetica”

CONCORSO CENTOSCUOLE “Verso il futuro con l’ingegneria genetica”. 3^ liceo scientifico A e B. FASE 4: Controllo del DNA mediante elettroforesi su gel d’agarosio. E’ una tecnica fondamentale per: -l’ analisi (elettroforesi analitica ) -la purificazione degli acidi nucleici

billy
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CONCORSO CENTOSCUOLE “Verso il futuro con l’ingegneria genetica”

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Presentation Transcript

  1. CONCORSO CENTOSCUOLE “Verso il futuro con l’ingegneria genetica” 3^ liceo scientifico A e B

  2. FASE 4: Controllo del DNA mediante elettroforesi su gel d’agarosio E’ una tecnica fondamentale per: -l’analisi (elettroforesi analitica) -la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa)

  3. 1- Preparazione del gel di agarosio • agarosio + tampone TAE 1X +Sybr Green (intercalante)

  4. agarosio polisaccaride con residui alternati di D-galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio

  5. effetto setaccio del gel di Agarosio

  6. Sybr Green

  7. Sybr Green

  8. 2- preparazione della slitta con pettine 3- caricamento DNA nei pozzetti • campioni (DNA plasmidico estratto e purificato) + tampone di caricamento: • bromofenolo (blu, migra come il DNA di 300 pb) • glicerolo (appesantisce il campione nel pozzetto)

  9. Nei pozzetti: 1- marker 2- DNA plasmidico puro 3- campione A 4- campione B 5- campione D 6- campione F

  10. marker, 1 kb DNA ladder • Questo marker contiene 13 frammenti di DNA di diverse lunghezze • (da 250kpb a 10.000 kpb)

  11. curva e retta di taratura

  12. plasmide Il plasmide pGEX ha una lunghezza di 4900 bp, ma è chiuso ad anello: si muove alla stessa velocità di un tratto di DNA da 3000 bp

  13. 4- elettroforesi

  14. 5- risultati dell’elettroforesi al transilluminatore

  15. GRUPPOA GRUPPOF GRUPPOB PLASMIDE STANDARD MARKER GRUPPOD PLASMIDE CIRCOLARE 3000 BP PLASMIDE FORMA RILASSATA POZZETTI

  16. nick Plasmide superavvolto (supercoiled) Plasmide circolare rilassato Plasmide linearizzato 6- discussione dei risultati

  17. campione A • Solo il campione A proviene da una coltura o/n di cellule trasformate dal gruppo A • Gli altri campioni contengono il DNA plasmidico purificato da cellule fornite dal tecnico di laboratorio

  18. 7- risultati della crescita di E.coli • EFFICIENZA BASSA: • inesperienza nel pipettare correttamente  sono state trasferite poche cellule • è diminuita la competenza delle cellule di E.coli • la quantità utilizzata di plasmide è minore di due volte rispetto agli esperimenti delle altre classi

  19. Gruppo C

  20. prova di conta delle colonie di E.coli • Gruppo C

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