2011. November 4.

1. Fluoreszcens mérőkészüléka fluoreszcencia-dinamikakiszajú mérésére kis festék (bead) koncentrációk esetére Zelles Tivadar, Offenmüller Katalin, Maák Pál 2011. November 4.

2. Az áramlásos fehérjekötés-erősség mérés elve Ms Áramlás v sebessége Fs Mulvaney et al., Biosensors-Bioelectronics23, pp. 191-200, 2007 Beadek leszakadnak Kötési erő: r Kötés hossza L Ahol Fs a Stokes erő, Ms a forgatónyomaték Feszítőerő Fk Idő (s) v az áramlási sebesség, r a bead sugara

3. Gerjesztés Fénykábel Fényforrás Motoros adagoló Lemosó folyadék Fluoreszcencia Minta Érzékelő Állvány mozgatóval Fluoreszcencia-mérésen alapuló fehérjekötés-erősség mérő berendezés Állítható sebesség víz lemosódik

4. Az összeépített berendezés Léghűtéses lézer Áramlási cella mozgatható állványon Detektoregység az interferencia- szűrővel Kevert optikai y kábel A berendezés egyedi fejlesztésű erősítő és kiolvasó elektronikát tartalmaz

5. S 9269 erősítővel közös tokba foglalt fotodetektor A detektor árama illetve feszültsége a megvilágító fényintenzitással lineáris A tok tartalma - detektor és erősítő – nagy erősítéssel

6. A fluoreszcencia-érzékelő detektor gyári paraméterei

7. A megvalósított áramkör paraméterei

8. A lézer hőmérsékleti stabilizálása Stabilizálatlan lézer ingadozása hőmérséklet teljesítmény Sikeres stabilizálás

9. Fluoreszcencia-spektrumok lézeres gerjesztéssel és PMT spektrométerrel Itt a folyadék nem áramlik! A kimutatható koncentráció határa 10-4 mg/ml amely 7*10-11 gfesték gerjesztése ez 2,1*10-13 mól Várhatóan ennél nagyobb koncentráció lesz a beadekkel Hullámhossz (nm) Tipikus spektrum interferenciaszűrő nélkül, 10-1 mg/ml koncentrációnál

10. Fluoreszcencia-spektrumok különböző hígítású beadekkel 1000-es hígítás Z=-600 µm Z=-1200 µm Z=-800 µm Fluoreszcencia csúcs 10000-es hígítás A végleges mintában reményeink szerint a 10 000 hígításnak megfelelőnél jóval több beadet sikerül megkötni

11. A mérési módszer validálása: különböző koncentrációjú festékek befecskendezése Látszik jelkülönbség a különböző koncentrációk hatására, de a mérés kiértékelhetetlen Befecskendezések kezdete Befecskendezések vége 10-2 mg/ml Sima víz 10-1mg/ml Drasztikusan más a jel, ha a kamrában áramlik a folyadék, vagy ha áll! Egyenletes áramlási sebességet kell biztosítani!

12. Programozható adagoló – 20 ml fecskendőkkel Beállítható áramlási mennyiség – ezáltal beállítható áramlási sebesség a kamrában beáramlás kiáramlás

13. A mérési módszer validálása: egyenletes vízáramlási sebesség Kézi befecskendezés Egyenletesen áramló víz, de nem kontrollált sebességű festék-hozzákeverés – az egyidejűleg fluoreszkáló anyag-tartalom elég bizonytalan 10-4 mg/ml Kézi nyomású fecskendővel kevertük hozzá az áramló vízhez a különböző koncentrációjú festékeket – a kisebbik koncentrációt nem sikerült egyenletesen nyomni

14. A mérési módszer validálása: váltás egyenletes vízáramlásról ugyanazon sebességű festék-áramlásra és vissza Festékoldat Vízről egy adott koncentrációjú - 10-4 mg/ml – (70 pikogram – 2,1*10-13 mól festék egyszerre) oldatra váltás ugyanazon áramlási sebesség mellett Víz Bár a jel a kis koncentráció miatt kicsi, a jel/zaj viszony 5-ös körül van A várható bead-koncentráció-értékek ennél magasabbal lesznek

15. Nagyobb koncentrációval – 10-3 mg/ml: Átkapcsolási tranziens A jelszint sokkal nagyobb, a jel-zaj viszony

16. Köszönöm a figyelmet!