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Conferenza di Denver

Conferenza di Denver. Sc.Biosanitarie Genetica I. Universita’ di Bari. 1-3 gruppo A. 4-5 gruppo B. 1966. X-6-12 gruppo C. 13-15 gruppo D. 16-18 gruppo E. 19-20 gruppo F. Y-21-22 gruppo G. by GP&NA. Cariotipi a confronto. Sc.Biosanitarie Genetica I. Universita’ di Bari.

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Presentation Transcript


  1. Conferenza di Denver Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B 1966 X-6-12 gruppo C 13-15 gruppo D 16-18 gruppo E 19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G by GP&NA

  2. Cariotipi a confronto Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B X-6-12 gruppo C 13-15 gruppo D 16-18 gruppo E 19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G by GP&NA

  3. Metodi colorazione differenziale Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Colorano una regione specifica di alcuni o di tutti i cromosomi C-bande : tutti i centromeri e le regioni eterocromatiche variabili dei cromosomi 1,9,16,Y • Creano un’alternanza di bande chiare e scure lungo l’asse del cromosoma • specifica per ogni coppia di omologhi. by GP&NA

  4. QM-banding pattern Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari utilizzando la mostarda di quinacrina...... by GP&NA

  5. DAPI e QM Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  6. G-bande Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  7. R-bande Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  8. Diagramma Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  9. Terminologia 46,XX - cariotipo normale Femminile 46,XY - cariotipo normale Maschile Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Questo modo di scrivere ci da’ due informazioni: • numero totale dei cromosomi (46) • sesso dell’organismo 47,XY,+21 Maschio con 47 cromosomi (invece di 46) ed un cromosoma 21 in piu’ (sindrome di Down) 46,XX,del(14)(q23) del=delezione 46,XY,dup(14)(q22q25) dup= duplicazione 46,XX,r(7)(p22q36) r=ring (cromosoma ad anello) by GP&NA

  10. FISH sintesi di una sonda complementare marcata con un fluorocromo cromosoma sul vetrino denaturazione A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T A T doppia elica di DNA A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T A T ibridazione della sonda sui cromosomi denaturati sul vetrino A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T A T A C C T T A T denaturazione G C G T A A T C G G T A T C C T A A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T G G C A T A G G A T G G C A T A G G A T A A A T T T osservazione del vetrino Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  11. Osservazione al microscopio Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari FISH : microscopio a fluorescenza • fotografia CCD camera filtro di emissione Lampada a vapori di mercurio specchio dicroico filtro di eccitazione Elaborazione al computer obiettivo/ condensatore by GP&NA

  12. FISH: metafase in DAPI Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Cromosomi 1. denaturati 2. colorati con DAPI by GP&NA

  13. FISH: segnali Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  14. FISH: merge Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  15. Analisi del cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

  16. Allestimento del preparato fitoemoagglutinina (stimola la crescita) colchicina (ultimi 30’) Ipotonica (20’) sangue periferico centrifugazione proliferazione centrifugazione 48-96h terreno di coltura pellet risospeso allestimento del preparato risospensione in poco fissativo fissativo fissativo pellet risospeso centrifugazioni (2-3) Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

  17. Analisi del cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

  18. Colorazione QM Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine • Fluorocromi: QM, DAPI. Necessario un microscopio a flurescenza by GP&NA

  19. Colorazione Giemsa Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine G-banding con Giemsa dopo trattamento con tripsina by GP&NA

  20. Analisi del cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

  21. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Ottima ma….. by GP&NA

  22. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Puo’ essere anche cosi’.. • Cromosomi non ben riconoscibili, difficili anche da contare. Scartare!(potendo) by GP&NA

  23. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • .. O cosi’ • Troppo contratti pero’ si puo’ usare per contarli. Scartare! (potendo) by GP&NA

  24. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Sufficiente • Si possono contare Puo’ essere utile per analizzare i cromosomi non sovrapposti by GP&NA

  25. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Discreta • Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, si possono analizzare by GP&NA

  26. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Buona • Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, la morfologia dei cromosomi e’ buona by GP&NA

  27. Come si fa il cariotipo? Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO CROMOSOMICO 2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA’ 3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE by GP&NA

  28. Fare il cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 46 10 9 11 16 by GP&NA

  29. Cariotipo ordinato Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari CARIOTIPO IN QM (specifico il bandeggio) by GP&NA

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