Conferenza di Denver

1. Conferenza di Denver Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B 1966 X-6-12 gruppo C 13-15 gruppo D 16-18 gruppo E 19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G by GP&NA

2. Cariotipi a confronto Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1-3 gruppo A 4-5 gruppo B X-6-12 gruppo C 13-15 gruppo D 16-18 gruppo E 19-20 gruppo F Y-21-22 gruppo G by GP&NA

3. Metodi colorazione differenziale Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Colorano una regione specifica di alcuni o di tutti i cromosomi C-bande : tutti i centromeri e le regioni eterocromatiche variabili dei cromosomi 1,9,16,Y • Creano un’alternanza di bande chiare e scure lungo l’asse del cromosoma • specifica per ogni coppia di omologhi. by GP&NA

4. QM-banding pattern Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari utilizzando la mostarda di quinacrina...... by GP&NA

5. DAPI e QM Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

6. G-bande Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

7. R-bande Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

8. Diagramma Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

9. Terminologia 46,XX - cariotipo normale Femminile 46,XY - cariotipo normale Maschile Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Questo modo di scrivere ci da’ due informazioni: • numero totale dei cromosomi (46) • sesso dell’organismo 47,XY,+21 Maschio con 47 cromosomi (invece di 46) ed un cromosoma 21 in piu’ (sindrome di Down) 46,XX,del(14)(q23) del=delezione 46,XY,dup(14)(q22q25) dup= duplicazione 46,XX,r(7)(p22q36) r=ring (cromosoma ad anello) by GP&NA

10. FISH sintesi di una sonda complementare marcata con un fluorocromo cromosoma sul vetrino denaturazione A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T A T doppia elica di DNA A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T A T ibridazione della sonda sui cromosomi denaturati sul vetrino A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T A T A C C T T A T denaturazione G C G T A A T C G G T A T C C T A A T C G G T A T C C T A G G C A T A G G A T G G C A T A G G A T G G C A T A G G A T A A A T T T osservazione del vetrino Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

11. Osservazione al microscopio Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari FISH : microscopio a fluorescenza • fotografia CCD camera filtro di emissione Lampada a vapori di mercurio specchio dicroico filtro di eccitazione Elaborazione al computer obiettivo/ condensatore by GP&NA

12. FISH: metafase in DAPI Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari Cromosomi 1. denaturati 2. colorati con DAPI by GP&NA

13. FISH: segnali Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

14. FISH: merge Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

15. Analisi del cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

16. Allestimento del preparato fitoemoagglutinina (stimola la crescita) colchicina (ultimi 30’) Ipotonica (20’) sangue periferico centrifugazione proliferazione centrifugazione 48-96h terreno di coltura pellet risospeso allestimento del preparato risospensione in poco fissativo fissativo fissativo pellet risospeso centrifugazioni (2-3) Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari by GP&NA

17. Analisi del cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

18. Colorazione QM Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine • Fluorocromi: QM, DAPI. Necessario un microscopio a flurescenza by GP&NA

19. Colorazione Giemsa Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine G-banding con Giemsa dopo trattamento con tripsina by GP&NA

20. Analisi del cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1) Allestimento della coltura 2) Preparazione dei vetrini 3) Colorazione del preparato con colorazioni differenziali di routine 4) Osservazione al microscopio, selezione delle metafasi e acquisizione delle immagini by GP&NA

21. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Ottima ma….. by GP&NA

22. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Puo’ essere anche cosi’.. • Cromosomi non ben riconoscibili, difficili anche da contare. Scartare!(potendo) by GP&NA

23. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • .. O cosi’ • Troppo contratti pero’ si puo’ usare per contarli. Scartare! (potendo) by GP&NA

24. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Sufficiente • Si possono contare Puo’ essere utile per analizzare i cromosomi non sovrapposti by GP&NA

25. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Discreta • Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, si possono analizzare by GP&NA

26. Selezione delle metafasi Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari • Buona • Si possono contare, e anche se ci sono alcune sovrapposizioni, la morfologia dei cromosomi e’ buona by GP&NA

27. Come si fa il cariotipo? Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO CROMOSOMICO 2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA’ 3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE by GP&NA

28. Fare il cariotipo Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari 46 10 9 11 16 by GP&NA

29. Cariotipo ordinato Sc.Biosanitarie Genetica I Universita’ di Bari CARIOTIPO IN QM (specifico il bandeggio) by GP&NA