Ragadozó atka reprodukciós teszt talajban

1. Ragadozó atka reprodukciós teszt talajban OECD 226 Készítette: Magai Zsolt

2. Teszt jellemzése • A teszt célja, hogy értékeljük a vegyi anyagok hatását a talajban élő atkafajok (Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer) reproduktivitására. Ezáltal becsülhetjük az adott faj növekedési rátáját. • Reproduktivitás itt azt jelenti, hogy hány ‘fiatal’ élőlény marad a teszt végén. • Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer reprezentálja a tesztben a ragadozó atkákat. Ez a faj, könnyen beszerezhető, tenyészthető alaboratóriumi körülmények között. • A teszt végpontja a reprodukciós ráta (utódok száma edényenként). • Időtartam: 14 nap

3. A vizsgálat elve • Az atkák a vizsgált anyag különböző koncentrációinak vannak kitéve. A teszt elején 10 felnőtt nőstény egyedet juttatnak a teszt edényekbe (szinkrontenyészetből). A hímeket nem használják fel. • A tesztben felhasznált nőstények 28-35 naposak. A vizsgálat 14. napon ér véget (a nőstények talajba tevésétől számítva). Ekkora érik el a ‘fiatalok’ a deutonymph szakaszt fejlődésükben. • Amit mérünk az az, hogy hány ‘fiatal’ egyed van egy kísérleti edényben és emellett túlélő nőstények száma. • Meghatározzuk az ECx-et (pl. EC10, EC50) vagy a nem megfigyelhető hatást okozó koncentrációt (NOEC). Előbbi meghatározásához 12 mérési pontot veszünk fel.

4. A Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer • A Lealapidae családjába tartozó atkafaj. • Mindenféle talajon megélnek és fő táplálékul egyéb atkák, fonálférgek, • collembolák szolgálnak. Élelemhiány esetén váltanak kannibalizmusra. • Ízeltlábúak, minden lábon tövis és sörte található, utóbbit ásásra használja. • 4 pár lába van, ebből az első pár antennaként funkcionál. • A hím 0,55-0,65 mm hosszú, és súlya 10 - 15 µg. • A nőstény 0,8-0,9 mm hosszú, és súlya 50-60 µg.

5. Az atkák kb. 7 nap alatt fejlődnek petéből lárvává, és 28-35 naposan használjuk fel a teszthez. • Egy nőstény egyed élhet 100 napig is, ezalatt akár 100 tojást is lerakhat.

6. Vizsgált anyag tulajdonságai • Vízben való oldhatóság • log Kow (oktanol-víz megoszlási hányados) • Gőznyomás Ezek lehetőleg ismertek legyenek. Ami még fontos lehet: • A vizsgált anyag sorsa a talajban, biotikus, abiotikus degradáció. • A tesztelés során vízben oldható vagy oldhatatlan anyagokat használunk. A teszt nem alkalmazható illékony anyagokra, azaz azokra, amelyeknek a Henry állandója, vagy a levegő / víz megoszlási hányadosa nagyobb mint egy, vagy olyan anyagokra, amelyeknél a gőz nyomása meghaladja a 0,0133 Pa-t 25 ° C-on.

7. A referencia anyag • A referencia anyagra meg kell határozni ECx (EC20, EC50) és/vagy a NOEC értékeket annak bizonyításához, hogy a laboratóriumi vizsgálati körülmények megfelelőek, és ellenőrzésként, hogy a vizsgált szervezetek reakciója idővel nem változott. • Két referencia anyagot használnak: • Dimetoát (CAS 60-51-5) • Bórsav (CAS 10043-35-3)

8. A teszt menete • Előszőr létrehozzuk a szinkrontenyészetet. • Az optimális tenyésztési hőmérséklet 20 ± 2 ° C. • A generációk nagyrészt fedik egymást. • A nőstényeket egy edénybe tesszük, majd adjunk hozzá megfelelő mennyiségű táplálékot. • Két-három napig lehetővé tesszük, hogy lepetézzenek, majd eltávolítjuk a nőstényeket. • 28-35 nappal később kivesszük a szinkron tenyészetből a hasonló korú kifejlett élőlényeket és a tesztedénybe juttatjuk. • Összeállítjuk a talajunkat

9. Ehhez a vizsgálathoz egy mesterséges talajt kell használni. A mesterséges talaj áll a következő összetevőkből: • 5% tőzegmoha • 20% kaolin agyag • 75% ipari homok • Kiszámítjuk, hogy megfelelő-e a talaj maximális víztartó képessége (20-30%-nak kell lennie, és a későbbiekben nem térhet el ennél 10%-nál jobban. ) • S = vízzel telített szubsztrát + cső tömege + szűrőpapír tömege • T = tára (+ szűrőpapír tömege) • D = szubsztrát száraz tömege • TESZTELÉS (10 ‘felnőtt’ nőstény atkára és 20 g mesterséges talajra van szükség mintánként, kontrollonként )

10. 14 nap után vége a tesztelésnek • Megszámoljuk a túlélő atkákat (külön a lárvákat, ‘fiatalokat’ és külön a ‘felnőtteket’).

11. Vizsgálati edények és eszközök • Eszközök • Szabványos laboratóriumi eszközökre van szükség, különösen a következőkre: • Szárító szekrény; • Sztereomikroszkóp; • pH-mérő; • Megfelelő pontosságú mérleg; • Megfelelő felszerelés a hőmérséklet szabályozásához; • Hőmérséklet-vezérelt inkubátor Edények • A vizsgálati edények 3 - 5 cm átmérőjű üvegből vagy más, kémiailag inert anyagból készültek. • Csavaros fedeleket előnyben részesítik. • Olyan fedél kell, mely megakadályozza az atkák elszökését.

12. Vizsgálati jelentés tartalma • Vizsgálati anyag • azonosítás (név, CAS-szám) • fizikai-kémiai tulajdonságok • Tesztorganizmusok • azonosítása • tenyészet leírása, jellemzése (melyik fejlődési szakaszban vannak a tesztorganizmusok) • Vizsgálati körülmények • eljárás leírása • előkészítés leírása • talaj maximális víztartó képessége • alkalmazott technológia leírása • edények mérete, talaj száraz tömege • hőmérséklet, fény intenzitás, sötét-világos ciklus hossza • pH és víztartalom mérés • táplálék fajtája, etetési időpontok • Vizsgálati eredmények • Fiatal egyedek száma a teszt végén • Felnőtt egyedek száma a teszt végén és ebből mortalitás (%) számítása • ECx és/vagy NOEC meghatározása

13. A teszt érvényessége • A következő kritériumoknak kell teljesülnie: • Az átlagos ‘felnőtt’ nőstény mortalitás nem haladhatja meg a 20%-ot. • Az átlagos ‘fiatalok’ száma egy (10 ‘felnőtt’ nősténynél bevezetett) mérésnél min. 50-nek kell lennie a vizsgálat végén. • A fiatal atkáknak a száma ne legyen 30% felett a teszt végén.

14. Forrás • OECD GUIDELINE FOR TESTING OFCHEMICALS 226 – Predatory mite (Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer) reproduction test in soil; http://oberon.sourceoecd.org/vl=19224635/cl=13/nw=1/rpsv/cw/vhosts/oecdjournals/1607310x/v1n2/contp1-1.htm Képek: • http://www.aguafilter.hu/atka3.jpg • http://www.biokontroll.hu/cms/index.php?option=com_content&view=article&id=202:ragadozo-atkak-a-lathatatlan-segitk-2&catid=112:bionovenyektermesztese&Itemid=43&lang=hu • http://daam.lapunk.hu/?modul=oldal&tartalom=621211