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Azoospermies non obstructives

Atelier TESE C.Giorgetti – FFER 2006. Azoospermies non obstructives. Cryo - TESE. Utilisation de spermatozoïdes congelés après TESE (Testicular Sperm Extraction). Volume. Biochimie. 20%. Carnitine. T+E. E. 60%. Fructose. VS. VS. 20%. Citrate + P. Ac. P+CE. P+CE.

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Azoospermies non obstructives

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Presentation Transcript

  1. Atelier TESE C.Giorgetti – FFER 2006 Azoospermies non obstructives Cryo - TESE Utilisation de spermatozoïdes congelés après TESE (Testicular Sperm Extraction)

  2. Volume Biochimie 20% Carnitine T+E E 60% Fructose VS VS 20% Citrate + P. Ac P+CE P+CE Constitution d’un éjaculat

  3. Classification des azoospermies Paramètres Obstructive Non obstructive (excrétoire) (sécrétoire) Taille des Testicules N  ou N Vol. éjaculat  ou N N FSH N  Biochimie séminale Fructose  ou N N Carnitine  N

  4. Cryo-TESE-ICSI ICSI décrit 1991 ICSI + TESE décrit en 1993: Craft (fécondation), Schoysman (grossesse) ICSI + TESE à l’ IMR en janvier 1997 ICSI + Cryo-TESE par Fischer 1996 ICSI + Cryo-TESE à l’ IMR en juin 97

  5. Données de la littérature Séries peu nombreuses nombre de patients faible non randomisées mixtes : NOA + OA Spermatozoïdes « frais » + « congelés » critères d’inclusion variables pas toujours l’histologie

  6. Données de la littérature Efficacité TESE = TEFNA TESE : 1 seul gros fragment = plusieurs petits Taux de fécondation TESE = TEFNA Spermatozoïdes “frais” = “congelés” Pas de spz retrouvé dans 50% des cas NOA (30% à 70%) depuis 1997, spz prélevés lors de la biopsie testiculaire diagnostique sont congelés pour une ICSI différée.

  7. Anesthésie générale Incision: peau vaginale albuginée (1 – 1.5 cm) Pression douce – pulpe testiculaire Echantillon de grande taille (500 mg) Transport au laboratoire Prélèvement chirurgical

  8. Transport au laboratoire Tube Falcon de 10 ml contenant 4 à 5 ml un milieu de culture (BM1)

  9. Traitement au laboratoire Rinçage avec un milieu de culture

  10. Traitement au laboratoire Dilacération mécanique avec 2 lames de verre dans une boite de Pétri contenant 2 ml de BM1

  11. Traitement au laboratoire Suspension la plus fine possibleExamine un aliquot de 20 μl sous microscope inversé

  12. Traitement au laboratoire Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments

  13. Traitement au laboratoire Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments

  14. Sélection des spermatozoïdes Surnageant traité classiquement / monocouche (1 ml de SpermFilter 80%)

  15. + La totalité du culot est dilué dans 0.250 ml de BM1Congélation + Recherche des spermatozoïdes Examiner un aliquot de 20 μl de la suspension Recherche - Recherche + La totalité du culot de centrifugationest resuspendu dans 30 μl de BM1Examine un aliquot de 2 μl - Examiner la totalité du culot - Fragments / collagénase

  16. Congélation Congélation en paillettes de 0.150 ml Même protocole que pour congeler les spermatozoïdes éjaculés Test de décongélation est réalisé le jour même réalisé dans les mêmes conditions que le jour de l’ICSI

  17. Utilisation des spermatozoïdesaprès Cryo-TESE Décongélation 10 mn à 37°C et « lavage » avec 2 ml BM1Centrifugation 15 mn à 300gCulot resuspendu dans 20 μl de BM1 Totalité des 20 μl est examiné au microscope inversé (sous huile) Si pas de spermatozoïdes mobiles (1/2 cas) + 20 μl de Pentoxifylline (Torental à 10% dans BM1 soit 7.2 mmol/l) Après 5 mn de contact recherche le moindre mouvement flagellaire

  18. Cryo-TESE-ICSI Article (C.Giorgetti - IMR) : Crude cumulative delivery rate following ICSI using intentionally frozen-thawed testicular spermatozoa in 51 men with non-obstructive azoospermia. Publié dans RBMOnline – Vol 11. N° 3. 2005 ---------------------------- 118 patients qui bénéficient d’une biopsie testiculaire pour NOA (1998-2002) Examen histologique confirme le diagnostic de NOA Spermatozoïdes sont retrouvés dans 54 cas (46%) Congélation est réalisée dans 51 cas (43%) 3 patients : < 5 spermatozoïdes tous dysmorphiques (non congelés) ICSI réalisées 1998 – juin 2004

  19. Cryo-TESE-ICSI

  20. Cryo-TESE-ICSI : Résultats

  21. Cryo-TESE-ICSI : Résultats

  22. Azoospermies non obstructives- Conclusion • En cas d’azoospermie aucun examen ne peut prédire la présence d’une production de spermatozoïdes dans le testicule. • On peut prédire seulement un % de chance de retrouver des spermatozoïdes • La biopsie diagnostique est la seule à apporter une réponse • Lors d’une biopsie toujours être prêt pour une congélation des spermatozoïdes • Le taux de biopsie positive est fonction des critères cliniques et biologiques d’inclusion • Taux d’accouchement proche de 50% après 2 cycles d’ ICSI • Enfants nés aucune particularité

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