Praktické cvičenie č. 2 Stafylokokové infekcie

1. Praktické cvičenie č. 2 Stafylokokové infekcie • Diagnostika stafylokokových infekcií • Diagnostický model: absces - hnis, enterotoxikóza - zvyšky potravín, osteomyelitída - punktát, • Mikroskopia, kultivácia, biochemické testy, dôkaz patogenity, citlivosť na ATB

2. 1 normálnamikroflóra 2impetigo 8 meningitis 11 respiračnéinf 3 furunkul, karbunkul 6 osteomyelitis 4 inf. v rane, absces5 šírenie lymfatickou a krvnou cestou 7 endokarditis 10 nefritis 9 enteritisotrava potravinami 1 normálnamikroflóra 1 normálnamikroflóra

3. Odoberaný materiál • Absces - hnis - sterilne odobratý • enterotoxikóza - zvyšky potravín - dôkaz toxínu, prítomnosť stafylokoka nestačí • osteomyelitída - punktát, sekrét - sterilne odobratý, aj krv na hemokultiváciu

4. Impetigo… http://pathmicro.med.sc.edu/fox/staph-impetigo.jpg

5. bulózne impetigo http://www.adhb.govt.nz/newborn/TeachingResources/Dermatology/BullousImpetigo/BullousImpetigo3.jpg

6. otitis externa s furunkulom www.merck.com/mmpe/print/sec08/ch088/ch088c.html.

7. infekcie kože http://www.dermatology.co.uk/media/images/Infection_staphylococcus_crusting_chin_closeup.jpg

8. Abscesy mozgu http://www.mja.com.au/public/issues/176_12_170602/got10354_fm.html

9. Diagnostika stafylokokových infekcií • Mikroskopicky - z bazy abscesu, aspirát, punktát - obvykle málo baktérií a viac PMNL, krv na hemokultiváciu - obvykle málo baktérií - menej ako 1/ml, v zbytkách potravy pri enterotoxikóze - nedostatočný dôkaz • Kultivácia - krvný agar, manit slaný, pigment, hemolýza • Identifikácia - biochemicky • Dôkaz plazmakoagulázy, toxínov, enzýmov, • analýza nukleových kyselín • Sérologicky - protilátky proti kyseline teichoovej - imunodifúziou - dôkaz dlhodobého ochorenia - bakterémia, endokarditída

10. Mikroskopický preparát • kultúra Staphylococcus aureus – • fixovaná a zafarbená podľa Grama : • G+ koky v zhlukoch

11. Hnis – stafylokoky uložené intracelulárne

12. spútum - stafylokoky +pneumokoky stafylokoky leukocyty pneumokoky

14. Detekcia katalázy Kataláza: - enzym, hydrolyzujúci H2O2 , ktorý je toxický pre bunku pričom vzniká kyslík ( prejaví sa ako bublinky).. Pozitívny u Stafylokokov, negatívny u streptokokov

16. Kultivácia Stafylokokov • Krvný agar: Stafylococcus aureus - šedé až žlté pigmentované kolónie, vypuklé, mazľavé, beta hemolýza, • Stafylococcus epidermidis - biele kolónie, bez hemolýzy

17. Kultivácia Stafylokokov • Rast na pôde s prítomnosťou NaCl a indikátorom - Manit slaný - rastie len St. Aureus - zmena červenej farby na žltú

18. Vlastnosti - dôkaz plazmakoagulázy • Voľná • Viazaná • Sklíčková • Skúmavková metóda

19. Voľná koaguláza • Skúmavková metóda – kolonia testovaného kmeňa sa emulzifikuje v 0,5 ml plasmy. Inkubuje sa 6 h.pri 37*C, potom pri izbovej teplote 24 hrs. • Odčítava sa za 1 hod, 2 hod and 24 hod. • metóda – sledovanie tvorby koagula = pozit., • Kvôli možnej prítomnosti fibrinogénu v plazme môže byť koagulum rozpustené preto je potrebné odčítavať po 1,2,aj 24 hod

21. Plazmakoaguláza http://www.emdchemicals.com http://microbiology.scu.edu.tw

22. Viazaná koaguláza • Sklíčková metóda • V 2 kvapkách sterilnej vody alebo FR vytvorte suspenziu testovaného kmeňa, pridajte kvapku plazmy Odčítava sa o 10-15 sec. • Biely precipitát = pozit. • Negatívny výsledok musí byť potvrdený skúmavkovou metódou

23. http://memiserf.medmikro.ruhr-uni-bochum.de

24. stafytesty Zkum

25. ApiStaph – fotometrické odčítavanie http://www.microbes-edu.org

26. API-Staph – „okometrické“ odčítanie http://www.microbes-edu.org

27. Staphaurex http://www.pathologyinpractice.com www.microbes-edu.org

28. Určenie citlivosti na ATB - princíp • Diskový difúzny test • 6-8 ATB na platňu • zóna inhibície rastu v mm - porovnanie so štandardami Bez zóny inhibície - rezistencia na testované ATB Zóna inhibície rastu - dostatočne veľká ATB disk Rast testovanej baktérie Malá zóna inhibície

29. Citlivosť na ATB • Staphylococcus aureus - PNC - penicilináza, semisyntetické PNC: oxacilin, methicilin rezistencia na oxacilin ( znamená rezistenciu na ostatné betalaktámové a cefalosporínové ATB ) - MRSA - alterácia na úrovni cieľovej štruktúry - pencilin viažúci protein PBP - chromozomálny typ - súvisiaca s rezistenciou na ostatné atb - klindamycin, erytromycin, aminoglykozidy - Dobrá citlivosť na vankomycin (možnosťprenosu rezistencie na vankomycín zs nozokomiálnych kmeňov Strep.faecalis – na St. aureus • Problematika MRSA, CoMRSA • Staphylococcus epidermidis a ostatné PK negat. – rezistencia na oxacilín častejšia

32. stafylokoky – terapiapodľa citlivosti stanovenej in vitro • peniciliny • cefalosporiny • aminoglykosidy • tetracykliny • makrolidy • linkosamidy • glykopeptidy • fluorochinolony • chloramfenikol • trimetoprim

33. Porovnanie citlivosti • Streptococcus pyogenes – HSA / Staphyolococcus aureus PNC, TET • Staphylococcus aureus / Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus OXA, CEF,

34. Mikrokoky • Micrococcus luteusKocuria rosea • Jako kontaminácia v klinickom materiále www.medmicro.info

35. Diagnostika G+ kokov -schéma http://www.ratsteachmicro.com/Staphylococci_Notes/HCOE_CAI_Review_Notes_Staphylococci.htm