1 / 29

Rezan DEMİRALAY

SEPSİS SONRASI ERDOSTEİN VE ASETİLSİSTEİN TEDAVİSİNİN PULMONER EPİTEL HÜCRELERDE APOPİTOTİK VE ANTİAPOPİTOTİK GÖSTERGELER ÜZERİNE ETKİLERİ. Rezan DEMİRALAY. GİRİŞ.

dimaia
Download Presentation

Rezan DEMİRALAY

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. SEPSİS SONRASI ERDOSTEİN VE ASETİLSİSTEİN TEDAVİSİNİN PULMONER EPİTEL HÜCRELERDE APOPİTOTİK VE ANTİAPOPİTOTİK GÖSTERGELER ÜZERİNE ETKİLERİ Rezan DEMİRALAY

  2. GİRİŞ Sepsis, multipl organ disfonksiyonu ve yüksek mortaliteye neden olabilen bir hastalıktır. Sepsisli hastaların lenfoid organlarında önemli apopitozisin (programlı hücre ölümü) geliştiği ve bu organlardaki apopitozis inhibisyonunun yaşam süresi ile ilişkili olduğu tespit edilmiştir. Sepsiste başlıca hasar gören organ akciğerdir ve akut solunum sıkıntısı sendromu (ARDS)’a öncülük eden akut akciğer hasarı (ALI) sıklıkla sepsisin bir komplikasyonu olarak ortaya çıkmaktadır.

  3. Apopitozis sinyal yolları; Ölüm reseptörü (dış) veya mitokondrial ve/veya endoplazmik retikulum (iç) yolları ile oluşan apopitotik cevabın bazı ana noktaları.

  4. Ölüm reseptör aracılıklı kaspaz aktivasyonu

  5. mitokondri Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c Cytchrome c AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF AIF Mitokondri (iç) yolu; sitokrom c ve apopitozis indükleyici faktör gibi apoptojenik faktörlerin mitokondriden salınımını içerir.

  6. Bcl-2 ailesi Anti-apoptotik (Bcl-2) Pro-apoptotik (Bax) Mitokondri

  7. Bcl-2 Dış mitokondri membranında bulunur Mitokondri dış zarının geçirgenliğini ↓ Sitokrom c ve AFI’ün salgılanmasını engeller Bax Sitoplazmada bulunur. Dış mitokondri zarının geçirgenliğini ↑ Sitokrom c ve AIF’ün sitoplazmaya geçişini sağlar

  8. Apoptozom kompleksi oluşumu ve aktivasyonu

  9. Apopitozis sinyal yollarında kaspaz aktivasyonu

  10. Sepsisteki akciğer hasarında serbest oksijen radikalleri önemli bir rol oynamaktadır.

  11. ROS Bax Mitokondri Sitokrom c salınımı Hücre ölümü Mitokondride bax aktivasyonu, sitokrom c salınımı ve hücre ölümü için serbest radikal oluşumu gereklidir.

  12. Bu nedenle, hücresel antioksidan savunma sistemini artıran ve serbest oksijen radikal oluşumunu nötralize eden tedavi ajanları ile apopitozis regülasyonu, sepsis gidişatını ve akut akciğer hasarı (ALI) gelişimini kontrol altına alabilir gibi görünmektedir.

  13. İntraperitoneal LPS uygulanmasından sonra pulmoner epitel hücrelerdeki apopitozis sıklığını, Akciğer hasarında apopitotik ve antiapopitotik göstergeler (bax, kaspaz-3 ve bcl-2) üzerine LPS’in etkilerini, Erdostein ve asetilsisteinin koruyucu etkilerini araştırmak AMAÇ

  14. MATERYALVE METOD DENEYSEL PROTOKOL Sıçanlar, her biri 9 hayvandan oluşan 6 gruba ayrıldı. Bunlar: ■ Negatif kontrol grubu; intraperitoneal salin ve oral distile su verilen grup ■ Negatif kontrol grubu; intraperitoneal salin ve oral sodyum bikarbonat verilen grup ■ Pozitif kontrol grubu; intraperitoneal LPS ve oral distile su verilen grup ■ Pozitif kontrol grubu; intraperitoneal LPS ve oral sodyum bikarbonat verilen grup ■ İntraperitoneal LPS ve erdostein (150mg/kg) verilen grup ■ İntraperitoneal LPS ve asetilsistein (150mg/kg) verilen grup

  15. İLAÇLAR Erdostein, eş molar miktarda sodyum bikarbonat içeren distile suda çözülerek ve asetilsistein ise distile suda çözülerek oral olarak günde tek doz verildi. DENEYSEL PROTOKOL LPS (E.coli 055:B5; Sigma) 20 mg/kg vücut ağırlığı dozunda 1 ml salin içerisinde seyreltilerek intraperitoneal olarak uygulandı. Sıçanlar, LPS enjeksiyonundan 24 saat sonra öldürüldü ve torakotomi yapılıp akciğerler çıkarıldı. Akciğer dokusu, apopitozis, bcl-2, bax ve kaspaz 3 analizi için hazırlandı. KONTROL GRUBU İzotonik salin solüsyonu (LPS ile aynı hacimde) intraperitoneal olarak enjekte edildi. Ayrıca sodyum bikarbonat (erdostein dozu ile aynı molar miktarda) içeren distile su veya distile su (asetilsistein ile aynı miktarda) oral olarak tek doz verildi.

  16. APOPİTOZİS ANALİZİ Bronşiol ve alveol epitelindeki apopitozis düzeyi, In Situ Cell Death Detection kiti (Roche, Germany) kullanılarak TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick endlabelling) yöntemi ile belirlendi. Aynı kesitte sayılan 1000 hücre içerisindeki TUNEL-pozitif boyanan hücrelerin yüzdesi apopitozis indeksi (AI) olarak ifade edildi. İMMÜNHİSTOKİMYASAL ANALİZ Bronşiol ve alveol epitel hücrelerindeki lokal bcl-2 oluşum seviyesi anti-bcl-2 kiti (SantaCruz, USA), lokal bax oluşum seviyesi anti-bax kiti (Abcam, USA) ve endotel hücrelerindeki lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi anti-kaspaz 3 kiti (Neomarkers, USA) kullanılarak immünhistokimyasal olarak değerlendirildi. Sonuçlar, aynı kesitte sayılan 1000 hücre içerisindeki pozitif sitoplazmik boyanma gösteren hücrelerinin yüzdesi olarak ifade edildi.

  17. (A). APOPİTOZİS ANALİZİ BULGULARI BULGULAR ______________________________________ Tedavi grubu Apopitozis indeksi (%) ortalamaSD _________________________________________________________ Negatif kontrol 10.6  8.5 Pozitif kontrol 85.6 6.2 ______________________________________ İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (p=0.000) LPS’İN AKCİĞER EPİTEL HÜCRE APOPİTOZİSİ ÜZERİNE ETKİSİ

  18. Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu TUNEL yöntemi ile apopitozis analizi (X200)

  19. TEDAVİ GRUPLARININ AKCİĞER EPİTEL HÜCRE APOPİTOZİSİ ÜZERİNE ETKİSİ ________________________________________________________ Tedavi grubu Apopitozis indeksi (%) ortalamaSD ________________________________________________________ Negatif kontrol 10.6  8.5 Pozitif kontrol 84.1  7.0 Erdostein (150mg/kg) 19.4  9.8 Asetilsistein (150mg/kg) 36.1  4.2¶ ________________________________________________________ İstatistiksel analiz: negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (¶p<0.05) pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (p=0.000)

  20. (B). BCL-2 ANALİZİ BULGULARILPS’İN LOKAL BCL-2 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ ______________________________________________ Tedavi grubu Lokal bcl-2 oluşum seviyesi (%) OrtalamaSD __________________________________________________________ Negatif kontrol 21.1  3.3 Pozitif kontrol 8.8  3.5 ______________________________________________ İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı ( p=0.000)

  21. Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu LPS’in lokal bcl-2 oluşum seviyesi üzerine etkisi (x400)

  22. TEDAVİ GRUPLARININ LOKAL BCL-2 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ ________________________________________________________ Tedavi grubu Lokal bcl-2 oluşum seviyesi (%) ortalamaSD ________________________________________________________ Pozitif kontrol 8.8  3.5 Erdostein (150mg/kg) 43.8  12.2 Asetilsistein (150mg/kg) 45.6  5.3 ________________________________________________________ İstatistiksel analiz: pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı ( p=0.000)

  23. (D). BAX ANALİZİ BULGULARILPS’İN LOKAL BAX OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ __________________________________________________ Tedavi grubu Lokal bax oluşum seviyesi (%) ortalamaSD ________________________________________________________ Negatif kontrol 10.8  5.3 Pozitif kontrol 77.5  5.5_____________________________________________ İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (p=0.000)

  24. Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu Lps’in lokal bax oluşum seviyesi üzerine etkisi (x400)

  25. TEDAVİ GRUPLARININLOKAL BAX OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ ______________________________ Tedavi grubu Lokal bax oluşum seviyesi(%) ortalamaSD _____________________________________________________ Pozitif kontrol 77.5  5.5 Erdostein (150mg/kg) 48.8  7.9  Asetilsistein (150mg/kg) 42.8  2.6  _________________________________ İstatistiksel analiz: pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı ( p=0.000)

  26. (D). KASPAZ 3 ANALİZİ BULGULARI LPS’İN LOKAL KASPAZ 3 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ ________________________________________________________ Tedavi grubu Lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi (%) ortalamaSD _______________________________________________________________ Negatif kontrol 10.8  5.3 Pozitif kontrol 80.0  8.01  ________________________________________________________ İstatistiksel analiz: Negatif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı (p=0.000)

  27. Negatif kontrol grubu Pozitif kontrol grubu Lps’in lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi üzerine etkisi (x400)

  28. TEDAVİ GRUPLARININ LOKAL KASPAZ 3 OLUŞUM SEVİYESİ ÜZERİNE ETKİSİ __________________________________________________ Tedavi grubu Lokal kaspaz 3 oluşum seviyesi (%) ortalamaSD ________________________________________________________ Pozitif kontrol 80.0  8.01 Erdostein (150mg/kg) 51.3  6.9 Asetilsistein (150mg/kg) 43.9  3.3 ________________________________________________________ İstatistiksel analiz: pozitif kontrol grubundan istatistiksel olarak farklı ( p=0.000)

  29. SONUÇ Sonuç olarak, Erdostein ve asetilsistein tedavisi, sepsisin neden olduğu akciğer epitel hücre apopitozisi oranını önemli ölçüde azalttı. Asetilsisteinin apopitozis regülasyonu üzerine etkisinin erdosteinden daha zayıf olduğu bulundu. Erdostein ve asetilsistein, lokal bax ve kaspaz-3 oluşum seviyelerindeki artışı istatistiksel olarak önemli ölçüde azalttı ve lokal bcl-2 seviyesindeki azalışı önemli ölçüde artırdı.

More Related