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DNA 的粗提取与鉴定

DNA 的粗提取与鉴定. 一、实验原理. 1. 血细胞在蒸馏水中会渗透吸水而破裂，释放出内容物。. 2. 洗涤剂 能瓦解 细胞膜 ，但对 DNA 没有影响。. 3.DNA 在 物质的量浓度为 0.14 mol ／ L 的氯化钠溶液中的溶解度最低， 利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的 DNA 析出 。. 4. DNA 不溶于酒精溶液 ， 但细胞中的 某些物质则可以溶于酒精。. 5. DNA 遇 二苯胺 （沸水浴）会变成 蓝色 。. 二、实验设计. 1 、实验材料的选取. 选取原则 DNA 含量丰富 材料易得 提取简便. 鸡血细胞

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DNA 的粗提取与鉴定

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Presentation Transcript

  1. DNA的粗提取与鉴定

  2. 一、实验原理 1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水而破裂，释放出内容物。 2.洗涤剂能瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 3.DNA在物质的量浓度为0.14 mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 4. DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。 5.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色。

  3. 二、实验设计 1、实验材料的选取 • 选取原则 • DNA含量丰富 • 材料易得 • 提取简便 • 鸡血细胞 • 鸡血细胞核DNA含量丰富 • 材料易得 • 鸡血细胞极易吸水胀破

  4. 二、实验设计 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 • 若是动物细胞，如何获取DNA滤液？ • 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 在低浓度的溶液中红细胞会吸水胀破。

  5. 二、实验设计 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 • 若是植物细胞，如何获取DNA滤液？ • 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解。

  6. 二、实验设计 3、去除滤液中的杂质 • 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？ • 为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？ 可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。

  7. 二、实验设计 DNA＋二苯胺 蓝色物 4、DNA的析出与鉴定 • 析出： • 溶解： • 鉴定： 滤液+同体积冷却95%酒精白色丝状物 将白色丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液中 沸水5min

  8. 目的 加入物质 方法步骤 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 防止血凝固 2.提取细胞核物质 20 m1蒸馏水 加速血细胞破裂 2 mo1 /L的NaCl溶液 3.溶解核内的DNA 溶解DNA NaCl溶液稀释至0.14mol/L使DNA最大限度地释出 4.析出含DNA的粘稠物 加蒸馏水 使含DNA的黏稠物被留在纱布上 5.滤出含DNA的粘稠物

  9. 目的 加入物质 方法步骤 使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 2 mo1 /L的NaCI溶液 6.DNA的黏稠物再溶解 除去含DNA的滤液中的杂质 7.过滤含DNA的NaCl溶液 冷却的95 ％的酒精 8.提取杂质较少的DNA 提取DNA 有DNA则出现蓝色 二苯胺试剂 9.DNA的鉴定

  10. 目的 方法步骤 加入物质 ① 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2.提取细胞核物质 20 m1蒸馏水 ② 3.溶解核内的DNA ③ 2 mo1 /L的NaCl溶液 ④ 4.析出含DNA的粘稠物 蒸馏水 5.滤出含DNA的粘稠物 ⑤ 2 mo1 /L的NaCI溶液 6.DNA的黏稠物再溶解 ⑥ ⑦ 7.过滤含DNA的NaCl溶液 冷却的95 ％的酒精 ⑧ 8.提取杂质较少的DNA ⑨ 9.DNA的鉴定 二苯胺试剂

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