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G. Köhler, C. Milstein Monoclonal Antibodies

G. Köhler, C. Milstein Monoclonal Antibodies. Präsentation von Alina Donath. Monoklonale Polyklonale AK. Polyklonale Antikörper als Immunantwort des Körpers auf verschiedene Epitope eines Antigens monoklonale Antikörper Gerichtet gegen ein einziges Epitop auf einem Antigen.

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G. Köhler, C. Milstein Monoclonal Antibodies

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Presentation Transcript

  1. G. Köhler, C. MilsteinMonoclonal Antibodies Präsentation von Alina Donath

  2. Monoklonale Polyklonale AK • Polyklonale Antikörperals Immunantwort des Körpers auf verschiedene Epitope eines Antigens • monoklonale Antikörper Gerichtet gegen ein einziges Epitop auf einem Antigen Konzeptevorlesung

  3. Grunsätzliche Problematik in der Gewinnung von Antikörpern: • B-Zellen sind in Kultur nicht lange überlebensfähig • Jede Immunantwort fällt polyklonal aus Es gibt keine spezifischen Antikörper von B-Zellen in Kultur!

  4. Die Forscher Georges Köhler Cesar Milstein

  5. Die Idee Myeloma Myeloma Myelom B- Lymphocyte B- Lymphocyte B- Lymphocyt Unsterblichkeit Antikörper -Produktion Hybridoma Hybridom Unsterbliche Antikörper -Produktion

  6. Hybridisierung zweier Antikörper-produzierender Zell-Linien: Grundsätzliche Fragen: • Werden nach der Fusion noch AK produziert? • Werden die AK beider parentaler Linien sekretiert? • Werden die AK neu kombiniert oder unverändert exprimiert?

  7. Hybridisierung zweier Myelom-Zelllinien IEF zur Charakterisierung der sekretierten Antikörper a,b = parental, m = Mischung, c - h = Hybride

  8. Hybridisierung zwischen B-Zellen und Myelom-Zellen Durchführung: • Immunisierung von Mäusen mit SRBC(= Sheep Red Blood Cells) • Hybridisierung von B-Zellen mit den bereits charakterisierten Myelomzellen • Wachstum auf HAT-Selektivmediumnur Hybride aus Myelom- und B-Zellen sind überlebensfähig

  9. Hybridisierung zwischen B-Zellen und Myelom-Zellen • Screening der gebildeten Hybride auf die gesuchten anti-SRBC Antikörper: • Zugabe von SRBC als Immunogen • Kultivierung der erhaltenen Zell-Kolonien • spezifische Antikörper wurden durch einen Plaque-Assay detektiert

  10. Ergebnisse • Durch die Versuche von Köhler und Milstein war es tatsächlich gelungen, prädefinierte AK in stabilen Zellkulturen zu erhalten • Weiterentwicklung der Technologie zur Hybridom-Technik Nobelpreis für Medizin 1984

  11. Wie sieht es heute aus? Konzeptevorlesung

  12. Anwendungen • Forschung:Antikörper- Färbungen FACS ELIZA Western Blot • Medizin:Immunphänotypisierung Antikörper-Therapie

  13. Ausblick Muriner AK Chimärer AK Humaner AK Humanisierter AK Ziel: Therapeutische Anwendung von Humanen Antikörpern

  14. Zusammenfassung Das breite Spektrum, in dem heute monoklonale Antikörper angewendet werden, ist allein aufgrund der Hybridomtechnik von Köhler und Milstein möglich!

  15. Quellen Nature Vol. 256, August 7 1975, G. Köhler, C. Milstein: Continuos cultures of fused cells secreting antibody of predefined specifity Pillars of Immunology, David C. Margulies: Monoclonal Antibodies: Producing Magic Bullets by Somatic Cell Hybridization Konzeptevorlesung

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