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NeuroBook : Conversas entre neurónios

NeuroBook : Conversas entre neurónios. Estágio de Verão - Ciência Viva CNC. Catarina Fernandes Helga Afonso Mariana Santos Mónica Ferreira. Estímulo de morte celular. Quantificação de proteínas. Isolamento de neurónios de hipocampo de embriões de rato. Hipocampo.

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NeuroBook : Conversas entre neurónios

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Presentation Transcript

  1. NeuroBook: Conversas entre neurónios Estágio de Verão - Ciência Viva CNC Catarina Fernandes Helga Afonso Mariana Santos Mónica Ferreira

  2. Estímulo de morte celular

  3. Quantificação de proteínas

  4. Isolamento de neurónios de hipocampo de embriões de rato

  5. Hipocampo • O hipocampo é uma estrutura localizada nos lobos temporais do cérebro humano, considerada a principal sede da memória e importante componente do sistema límbico. • Esta estrutura denomina-se “hipocampo” devido à sua forma curva, que se assemelha a um cavalo-marinho (Grego: hippos = cavalo, kampi = curva).

  6. Funções do hipocampo • Esta estrutura é muito importante : • Para converter a memória a curto prazo em memória a longo prazo. • Pois permite ao mamífero comparar as condições de uma ameaça actual com experiências passadas semelhantes, permitindo-lhe, assim, escolher qual a melhor opção a ser tomada para garantir o seu bem-estar. • As lesões no hipocampo impedem a pessoa de construir novas memórias e a pessoa tem a sensação de viver num lugar estranho onde tudo o que experimenta simplesmente se desvanece, mesmo que as memórias mais antigas anteriores à lesão permaneçam intactas.

  7. Protocolo • Sacrificou-se o rato fêmea; • Retiraram-se os embriões do seu interior; • Extraímos os seus cérebros e de seguida os 2 hipocampos de cada cérebro; • Colocámos os hipocampos em soluções, que permitiu extrair os neurónios para depois os pôr em cultura.

  8. Imunocitoquímica em Cultura de Neurónios Cultura de neurónios com 8DIV

  9. Imunocitoquímica Conjuntos de técnicas que utilizam anticorpos para identificar macromoléculas, no nosso caso, para identificar as proteínas.

  10. Protocolo • Fixação; • Permeabilização; • Bloqueio; • Incubação com os anticorpos primários; • Incubação com os anticorpos secundárias; • Preparação das lâminas e lamelas; • Visualização ao microscópio de fluorescência.

  11. Marcámos a PSD-95 e a Geferina com os anti-corpos de fluorescência. Assim foi possível visualizarmos ao microscópio de fluorescência. A PSD é específica das sinapses glutamatérgicas (excitatórias) enquanto que a Geferina é específica de sinapses gabaérgicas (inibitórias).

  12. Evolução da PSD95 de neurónios do hipocampo 8DIV, 12 DIV e 15 DIV

  13. Evolução da Geferina de neurónios do hipocampo 8DIV, 12 DIV e 15 DIV

  14. PCRPolymeraseChainReaction

  15. Normalmente usado: • Laboratórios de investigação médica e biológica; • Detecções de doenças hereditárias; • Identificação de “impressões digitais” genéticas; • Construção de relações entre espécies; • Clonagem de genes; • Testes de paternidade; • Genotipagem.

  16. PCR consiste em três fases: Desnaturação, Annealing e Extensão

  17. Gráfico obtido a partir do termociclador.

  18. O produto do PCR pode ser visualizado após a electroforese em gel de agarose e o seu tamanho é estimado com padrões lineares de DNA. Electroforese-gel de agarose

  19. A nossa página no Facebook http://www.facebook.com/home.php?#!/pages/NeuroBook-Conversas-Entre-Neuronios/131331153568830

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