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IPNC Juillet 2006

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Presentation Transcript

    2. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 2 Neisseria gonorrhoeae

    3. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 3 Treatment 1940s = Penicillin effective treatment 1970s = Penicillin resistance develops secondary to acquisition of plasmid for penicillinase Since 1972, CDC has recommended treatment with third generation cephalosporin or fluoroquinolones (SD) Increase in chromosomally acquired multi-resistance to antibiotics In New Caledonia, N.gonorrhoeae were susceptible to penicillin Benzylpenicillin, metronidazole and azithromycin

    4. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 4 Mechanisms of antibiotic resistance Alteration of the target site Reduction of the affinity for the antibiotic Access of the antibiotic to the target site Reduced permeability of the cell envelope Active export of antibiotics Destruction of the antibiotic

    5. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 5 b-lactams action mode

    6. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 6 Mechanisms of penicillin resistance in N. Gonorrhoeae (1)

    7. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 7 Mechanisms of penicillin resistance in N.gonorrhoeae (2)

    8. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 8 Real-Time Multiplex PCR Assay

    9. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 9 Oligonucleotide sequences

    10. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 10 FRET based-system for the detection of ponA mutation (1)

    11. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 11 Tm and mutation detection

    12. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 12 Overlap of emission spectra from fluorescent dyes used in the LC System The degree of crosstalk is strongly influenced by: Temperature Coupling chemistry of the fluorescence dyes properties of the optical system

    13. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 13 Color compensation activation

    14. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 14 Experimental protocol (1)

    15. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 15 Experimental protocol (2)

    16. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 16 Partial sequence alignment

    17. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 17 Characteristics of N. gonorrhoeae strains used in the study

    18. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 18 Gene expression at mRNA level 2ème application de la PCR en temps réelle: Quantifier l’expression d’ ARN messager codant pour différents types de cytokines chez des hamsters infectés avec une souche virulente de lepto observer l’expression de gènes au niveau ARNm2ème application de la PCR en temps réelle: Quantifier l’expression d’ ARN messager codant pour différents types de cytokines chez des hamsters infectés avec une souche virulente de lepto observer l’expression de gènes au niveau ARNm

    19. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 19 Cytokines and immunity Regulatory proteins Inflammatory responses (TNFa vs IL-10) Immune and pathological pathways

    20. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 20 Syrian hamster (Mesocricetus auratus)

    21. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 21 Definition of used terms

    22. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 22 Absolute quantification

    23. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 23 Relative quantification

    24. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 24

    25. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 25 Standard Curve

    26. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 26 From blood to curves 1 to 2 ml of blood PBMC purification and in vitro culture Stimulation of PBMC (LPS, PMA-ionomycin) Total RNA extraction (High Pure RNA isolation kit, ROCHE) cDNA preparation (Transcriptor First Strand cDNA synthesis kit, ROCHE) LightCycler protocol (FastStart SYBR Green) Specificity : melting curves, gel electrophoresis cDNA dilutions (2 to 4x107 copies/µl) Standard curves

    27. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 27 Standard curves

    28. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 28 Set of target and reference genes

    29. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 29 Expression profile of TNF-alpha

    30. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 30

    31. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 31

    32. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 32 Expression profiles of g IFN and IL-12

    33. Présentation des activités de l’Institut Pasteur 33 From lymphocyte T to Th1

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