Mon stage au Centre Saint-Laurent

1. Mon stage au Centre Saint-Laurent Une présentation de Joëlle Grenier

2. Les fameux moules !!!

3. Écotoxicologie du programme LISAu Centre Saint-Laurent… • Programme de catégorisation et évaluation préalable Liste intérieure des substances • Substances de la liste sont des substances utilisées à des fins de fabrication commerciale et commercialisées au Canada entre le 1er janvier 1984 et le 31 décembre 1986 • Déterminer si les substances inscrites sur la liste intérieure (LIS) sont toxiques • Selon la loi , est « toxique » ou potentiellement « toxique » toute substance qui pénètre ou qui peut pénétrer dans l’environnement en une quantité ou concentration ou dans des conditions de nature à : • avoir, immédiatement ou à long terme, un effet nocif sur l’environnement ou sur la diversité biologique • mettre en danger l’environnement essentiel pour la vie • constituer un danger au Canada pour la vie ou la santé humaines.

4. La liste contient actuellement 23 000 substances • Substances sur la liste peuvent être: • produits chimiques organiques simples • Pigments • composés organométalliques • agents de surface • Polymères • éléments métalliques • sels métalliques et d’autres substances inorganiques • produits de la biotechnologie • « substances de composition inconnue ou variable, produits de réactions complexes ou matières biologiques » • Le centre Saint-Laurent a une trentaine de bactéries à tester

5. Mon environnement de travail chez Environnement Canada Mon bureau… Laboratoire de génotoxicité Laboratoire Écotoxicologie et SST

6. Mes collègues Andréane, collègue Sylvain, moniteur de stage

7. Mes tâches • Entretien quotidien des daphnies • Nourrir les hydres • Vérification de la mortalité des daphnies lors de tests de toxicité avec des bactéries • Élaboration de courbe standard de croissance de bactéries utilisées pour les tests de toxicité • Préparation des inoculums pour les tests de toxicité avec les bactéries • Préparation de milieux de culture solides et liquides

8. Préparation de milieu de culture Andréane coule des géloses sous la hotte à flux laminaire

9. Mes amis les daphnies ! Une de mes principales tâches: • Entretien quotidien des daphnies pour le suivi des cultures: • Vérification de la mortalité • Dénombrement des néonates • Lavage complet ou partiel des bocaux • Nourrir les daphnies (algues, YCT) • Mesure des paramètres physicochimiques

10. Suivi des cultures de daphnies

11. Tableau 1. Résultats du dénombrement des néonates du 23/04/07 pour le suivi des cultures de daphnies

12. Les hydres ont faim! • Nourrir les hydres: • Préparation du milieu salin (NaCl 10%) pour l’éclosion des œufs d’artémies (48h) • Récolte des artémies et 3 étapes de rinçage • Distribution des artémies aux hydres • Quelques heures après, rinçage du milieu souillé et ajout de nouveau milieu

13. Cultures d’hydres et installations pour les nourrir

14. Test de toxicité sur Daphnia avec des bactéries • Beaucoup de bactéries dans produits commerciaux, mais impacts inconnus sur l’environnement aquatique • Test de toxicité exposant les organismes à 1 million de cellules/mL • Organismes testés: • Daphnia: 21 jours • Lemna: 7 jours • Truites arc-en-ciel: 28 jours

15. Test de toxicité en cours avec M.Luteus sur les truites arc-en-ciel

16. Vérification de la mortalité et entretien quotidien • Pour un test: • 10 témoins • 10 exposés • Observation de l’état de la daphnie à chaque jour du test • Nourriture à chaque jour (par bocal de 100 mL): • 100 µL d’algues • 50 µL de YCT • Lundi, mercredi et vendredi : • Changement de milieu • Nouvel inoculum • Mesures des paramètres physicochimiques

17. Test de toxicité en cours avec M.Luteus sur Daphnia

18. Tableau 2. Vérification de la mortalité des daphnies du 09/05/07 lors du test de toxicité avec M. Luteus Légende: T=témoin, E=exposé, V=vivante, M=morte

19. Préparation des inoculums de bactéries • Principales étapes: • Mesure d’absorbance à 600nm à toutes les demi-heures jusqu’à l’atteinte d’une valeur cible • Arrêt de la croissance et préparation de l’inoculum • Centrifugation • Vidanger du surnageant • Resuspendre le culot dans de l’eau déchlorée autoclavée • Détermination du volume de l’inoculum par mesure d’absorbance à 600 nm • Courbe standard de croissance • Concentration de bactéries désirée: • 1x106 cellules/mL

20. Élaboration de courbes standards de croissance des bactéries utilisées pour les tests de toxicité • Repiquage de la culture nocturne dans un bouillon de 250 mL • Lecture d’absorbance à 600nm et à toutes les demi-heure qui suivent • Dilution sérielle et ensemencement de géloses à toutes les heures pour un futur dénombrement

21. Appareil à dénombrement de colonies Spectrophotomètre

23. À chaque heure on obtient un tableau de dénombrement de ce genre Pour l’élaboration du graphique, on choisit pour chaque heure la donnée la plus significative, c’est-à-dire, entre 30 et 200 colonies Dans notre exemple, on choisit:

25. Test des différentes courbes • Test des 5 courbes et de combinaison des 5 • Arrêt de la croissance lorsque l’absorbance a atteint la valeur cible (en plein milieu de la phase exponentielle) • Procédure de préparation d’un inoculum • Pour chaque courbe on calcul le volume requis pour l’inoculum à l’aide de son équation • Dilution sérielle et préparation de géloses pour un futur dénombrement • Lors du dénombrement, la meilleure courbe donne environ 100 colonies sur la gélose de la dilution 10-4 (donc 1 million de cellules) • On peut commencer les tests de toxicité avec la bactérie X

26. Conclusion • L’élaboration des courbes de croissance des bactéries est un point majeur dans l’avancement du programme LIS • Déterminer la toxicité des bactéries présentes sur la liste intérieure des substances • Le programme s’étend sur 2 ans (et peut-être même plus) et est à son début • Merci à Michel Larrivée, Sylvain Trottier, Andréane Lauzé et ENVIRONNEMENT CANADA