1 / 19

Modern Orvostudományi Technológiák a Semmelweis Egyetemen

Modern Orvostudományi Technológiák a Semmelweis Egyetemen. Terápiás modul Molekuláris medicina Balla András, Erdélyi László, Hunyady László Élettani Intézet 2011. november 15. G-protein kapcsolt receptorok aktivációs modelljeinek elemzése.

hasana
Download Presentation

Modern Orvostudományi Technológiák a Semmelweis Egyetemen

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Modern Orvostudományi Technológiák a Semmelweis Egyetemen Terápiás modul Molekuláris medicina Balla András, Erdélyi László, Hunyady László Élettani Intézet 2011. november 15.

  2. G-protein kapcsolt receptorok aktivációs modelljeinek elemzése

  3. A receptor aktiválódását követően a jelátviteli és a szabályozási mechanizmusok is aktiválódnak. Agonista β-arresztin G-fehérje JELÁTVITEL DESZENZITIZÁCIÓ INTERNALIZÁCIÓ

  4. A receptor mutációinak következményei. Endoplazmás retikulum

  5. Antagonista Antagonista Antagonista Antagonista Antagonista Antagonista Antagonista G-fehérje Endoplazmás retikulum INTERNALIZÁCIÓ JELÁTVITEL

  6. Sel.Ag. Sel.Ag. Sel.Ag. Sel.Ag. Sel.Ag. Sel.Ag. Sel.Ag. G-fehérje Endoplazmás retikulum INTERNALIZÁCIÓ JELÁTVITEL

  7. Elkülöníthető-e a G-fehérje és aβ-arresztinaktiválását létrehozó konformáció? Agonista β-arresztin G-fehérje JELÁTVITEL DESZENZITIZÁCIÓ INTERNALIZÁCIÓ

  8. Az AT1-receptor aktiválódásának hatásai. Stim ß-arrestin kötés G fehérje aktiválás Internalizáció

  9. SII-AngII Jelátvitel szelektív agonista: Sar1,Ile4,Ile8-Ang II (SII-AngII). β-arresztin G-fehérje JELÁTVITEL DESZENZITIZÁCIÓ INTERNALIZÁCIÓ

  10. Az AngII egyik peptid analógja (Sar1,Ile4,Ile8-Ang II) nem képes G-fehérjét aktiválni, de létrehozza a receptor internalizációját. Stim Stim ΔBRET Ratio Time (sec) G fehérje aktiválás ß-arrestin kötés Internalizáció

  11. Nefrogén diabetes insipidusXR öröklött forma 2-es típusú vazopresszin receptor és mutációi: Tünetek: polyuria polydypsia hyposthenuria Vízfogyasztás: ~ 10 l/nap Vazopresszin adásával NEM kezelhető frameshift missense mutáció deléció http://www.ndif.org/

  12. Személyre szabott terápia: a betegséget okozó mutáció azonosítása és karakterizálása M.G. beteg, a klinikai kép nefrogén diabetes inspidusra utal II. Sz. Belgyógyászati Klinika Dr. Tóth Miklós, Dr. Patócs Attila, Prof. Dr. Rácz Károly A mutációt azonosítottuk a genomból: Aszparigin-lizin csere a 2-es típusú vazopresszin receptor 321. aminosav pozíciójában (ritka,nem karakterizált mutáció) www.medsearch.com

  13. A funkcióvesztés mechanizmusa és terápiás lehetőségek • ER retenció • Megváltozott β-arresztin kötés és internalizáció • Csökkent cAMP generálás Célunk olyan farmakológiai chaperonok azonosítása, melyek segítik a recetor kihelyeződését a plazmamembránba, illetve szelektív agonistaként működve jelátvitelt indíthatnak el, de β-arresztint nem aktiválnak.

  14. Az N321K mutáció vizsgálata • A mutáció vizsgálatára alkalmas módszerek beállítása: • Receptor sejtfelszíni expresszió mérés fluoreszcens fehérjékkel • β-arresztin kötés vizsgálata • cAMP jel detektálására alkalmas módszer beállítása A cAMP szignál vizsgálata: Epac fehérje szenzort tartalmazó BRET szonda készítése és validálása

  15. EPAC-BRET bioszenzor működése REM Sluc VLVLE GEF cAMP mV VLVLE Sluc GEF REM mV Stim

  16. Az N321K mutáció vizsgálata A cAMP szignál vizsgálata:

  17. Az N321K mutáció vizsgálata A β-arresztin kötés vizsgálata: Fluoreszcensen jelölt β-arresztin detektálása konfokális mikroszkóppal a receptor stimulusa előtt és után N321K Vad típus AVP előtt AVP után

  18. Nem a plazmamembránban elhelyezkedő mutáns receptor • Fiziológiás koncentrációban hatástalan AVP • Károsodott β-arresztin kötés Következő lépés: olyan peptid- és nem-peptid vazopresszin receptor ligandok azonosítása, amelyek a károsodott receptor működését helyreállítják

  19. Köszönöm megtisztelő figyelmüket!

More Related