1 / 35

F 1 .F o -ATP synthasa

F 1 .F o -ATP synthasa. F 1 .F o -ATPasy „H + -translocating ATPases“ membrána Mtch, baktérií, tylakoidů E 1 .E 2 -ATPasy „Na + /K + - translocating ATPases“ eukaryotické plasmatické membrány A o A 1 -ATPasy archebaktérie – hybridy V a F 1 .F o -ATPas

ivy
Download Presentation

F 1 .F o -ATP synthasa

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. F1.Fo-ATP synthasa

  2. F1.Fo-ATPasy „H+ -translocating ATPases“ membrána Mtch, baktérií, tylakoidů E1.E2-ATPasy „Na+/K+ - translocating ATPases“ eukaryotické plasmatické membrány AoA1-ATPasy archebaktérie – hybridy V a F1.Fo-ATPas V-ATPasy protonové pumpy interních membrán (tonoplast, synaptické vesikly neuronů) P-ATPasyATP-depend. pumpy nabitých látek Skupiny ATPas

  3. Evoluční schéma ATPas

  4. 1937 - Herman Kalckar (DEN) – souvislost ATP synthasy a respirace 1961 - Ephraim Racker (USA) - isolace části F1 ATP synthasy 1961 - Peter Mitchell (UK) – chemiosmotická hypotéza 1964 - Paul D. Boyer – syntéza ATP strukturálními změnami v ATPase 1973 - Boyer – „Binding Change Mechanism„ (energeticky náročným krokem je uvolnění ATP z enzymu 1981 - John E. Walker – sekvence genu pro ATPsynthasu. 1994 - Walker a spol. – struktura F1-podjednotky 1996-1997 – prokázány rotace během syntézy ATP * chemicky (Richard Cross, USA) * spektroskopicky (Wolfgang Junge, Germany) * mikroskopicky (Masasuke Yoshida, Japan). ATP synthasa: Přehled historie

  5. Ohlédnutí za historií ATP synthasy … Boyer Racker Slater Mitchell

  6. ATPasa: Nobelova cena 1997 Paul Boyer – „binding change mechanism“ John Walker – krystalizace enzymu a struktura

  7. Model alternující vazby ATP

  8. ATPasa - mtch

  9. ATPasy - mtch

  10. ATP synthasa – E. coli • Fo podjednotka • (160Da) • řetězce a,b,c • F1 podjednotka • (370kDa) • řetězce , , , ,  Stechiometrie: a.b2.c9-12.3.3...

  11. ATP synthasa Model struktury ATPasy z E.coli

  12. ATP synthasa - MTCH Podobná struktura x souvislost různých podjednotek -řetězec mtch -řetězec E.coli

  13. ATPasy – c-řetězce v elektronovém mikroskopu ATPasa z rostliných thylakoidů

  14. ATPasa – enzymologie DCCD (dicyklohexylkarbodiimid) * vysoce specifická a účinná vazba na c-řetězec * blokace H+ vodivosti Fo * kovalentní vazba s konzervovaným Asp/Glu v transmembránovém helixu c-řetězce * vazba 1 molekuly DCCD blokuje kompletní enzym = kooperace a funkční závislos c-podjednotek

  15. ATP synthasa – důkaz rotace

  16. -kovalentní vazba vlákna aktinu s připevněným fluoroforem ATP synthasa – důkaz rotace

  17. ATP synthasa – důkaz rotace * -podjednotky přichyceny ke sklu His-tagem * po přídavku ATP otáčení ve směru hodinových ručiček

  18. ATP synthasa – vliv délky vlákna aktinu - odpor kladený viskozním prostředím buňky je úměrný druhé mocnině délky vlákna

  19. ATP synthasa – kroková rotace při nízké konc. ATP • ATP 20nM • při nízké konc. ATP probíha rotace po jednotlivých krocích • vazba pouze 1 molekuly • chybné kroky zpět = stochastický pohyb ATP 200 nM

  20. ATPasa – rotace s částicí zlata recorded 8000 fps playback 1/257 s • Připojení částice Au (cca 4 x větší než ATPasa): • rotace 8000 rpm • kroky po 120 , rychlost v jednom kroku cca 120000!

  21. ATPasa – model rotace • Kontrola 2 stavy: • vazba ATP • odstup Pi

  22. ATPasa – model rotace

  23. ATPasa – model Fo 33 Perspektivní pohled

  24. ATPasa – model Fo 33 Pohled z boku

  25. ATPasa – model Fo 33 Průřez podjednotkou

  26. ATPasa – model Fo 33 Pohled svrchu

  27. ATPasa – model Fo 33 Pohled svrchu

  28. ATPasa – detail aktivního místa Vazebné místo pro ATP na -řetězci

  29. ATPasa – detail aktivního místa Vazebné místo pro ATP na -řetězci (Molscript)

  30. Titul Boční pohled na 1 -podjednotku a 1 -podjednotku

  31. ATPasa – uspořádání c-podjednotek 3D zobrazení prstence c-jednotek

  32. ATPasa – animace pro model Fo

  33. ATPasa – animace pro model Fo

  34. „Inhibiční protein“ – blokování hydrolýzy ATP bez přít. p * anoxie = pokles pH matrix = vyšší afinita k enzymu „Záklapka“ – jednosměrnost pohybu -podjednotky u baktérií * přechod mezi 2 velmi rozdílnými konformace jenom díky otáčení -podjednotky Thioredoxin – zamezení hydrolýzy ATP v thylakoidech ve tmě * tma = nečinnost PS1 = není redukovaný feredoxin pro redukci thioredoxinu – tvorba disulfidického můstky a inaktivní formy ATPasy ATPasa – netermodynamická regulace

  35. Příště:MTCH a nemoc

More Related