Kolokvijum - 22.12.2012.

1. Kolokvijum - 22.12.2012. 9:00 h Grupe III1,III2, III3, III4, III5i IV5 – amfiteatar“Patologija” GrupeIV1, IV2, IV3 i IV4– amfiteatar“Silos” 10:00 h GrupeI1, I2, I3, I4, I5iII5 – amfiteatar“Patologija” Grupe II1, II2, II3 i II4 – amfiteatar“Silos” Obratite pažnju da se oznaka grupe odnosi na raspored na Imunologiji!!!

2. U zaglavlju testa... • OBAVEZNOpopuniti: • Ime i prezime • Broj indeksa • Grupa sa podgrupom • Redni broj u prozivniku • NE POPUNJAVATI deo sa kružićima koji služi za optičko čitanje testa

3. Gradivo za kolokvijum • Prvih 10 nedelja nastave • prvih 8 poglavlja iz udžbenika • 9. i 10. nedelja iz priručnika i sa prezentacija: • Odbrana od infekcija (predavanja) • Laboratorijske tehnike (vežbe)

4. Struktura testa • 10 pitanja sa 4 ponuđena odgovora • 1 poen za svaki tačan odgovor • samo 1 tačan odgovor, nema penala za pogrešan odgovor • tačan odgovor označiti bojenjem kružića • 4 rečenice sa po 2 popunjavanja • 1 poen za svaku u celini tačnu rečenicu • 2 eseja • 0-3 poena za svaki

5. ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE Imunoaglutinacija Imunoprecipitacija

6. Ag-At reakcije (opšte osobine) Antigen-antitelo (Ag-At) reakcije čine osnovu mnogih in vitro metoda koje se obavljaju u laboratorijskimuslovima u dijagnostičke ili istraživačke svrhe. Ispituje se prisustvo antigena ili antitela u odgovarajućem uzorku (serumu, likvoru, ćelijskoj kulturi...). - infektivni agens ili njegov deo (npr. HbsAg, p24 HIV...) - drugi molekuli (npr. citokini, hormoni, komponente C’, tumor markeri, proteini akutne faze ,Ig...) - ukupni Ig (pojedine klase) ili specifična At za određeni Ag Tradicionalno se zovu i serološke reakcije

7. Ag-At reakcije (opšte osobine) Mogu da budu: Rezultat: 1.Kvalitativne POZITIVAN NEGATIVAN 2.Kvantitativne Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml ili IU) Ukupna At - KONCENTRACIJA (npr. IgG 13,5 mg/ml) Specifična At - TITAR (npr. 1/64 ili 64) TITAR je mera količine specifičnih antitela i predstavlja vrednost (recipročnu)najvećeg razblaženja uzorka koji daje pozitivnu reakciju - pozitivna Kontrole Bez validnih kontrola test nema značaj - negativna

8. IMUNOAGLUTINACIJA

9. IMUNOAGLUTINACIJAje reakcija između korpuskularnog(nerastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela Najčešće se koristi za identifikaciju bakterija i krvnih grupa Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala aglutinacijom (slepljivanjem, zgomilavanjem)čestica Vidljivi aglutinat se javlja ako je odnosantitela i antigena približno jednak (optimalan odnosno ekvivalentni odnos)

10. EKVIVALENTAN (OPTIMALAN) ODNOS VIŠAK ANTIGENA VIŠAK ANTITELA Ag-At KOMPLEKSI: AGLUTINACIJA: REZULTAT: MALI NE POSTOJI NEPOUZDAN (LAŽNO NEGATIVAN) FENOMEN PROZONE VELIKI POSTOJI POUZDAN (POZITIVAN) MALI NE POSTOJI NEPOUZDAN (LAŽNO NEGATIVAN)

11. DIREKTNA (Ag je deo čestice) IMUNOAGLUTINACIJA INDIREKTNA pasivna (Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)

12. Primena (Primer) Identifikacija bakterija (enterobakterije) Detekcija Ag DIREKTNA (Ag je deo čestice) IMUNOAGLUTINACIJA

13. Direktna aglutinacija (identifikacija bakterija)

14. Detekcija At DIREKTNA (Ag je deo čestice) BAB test (At na brucelu) IMUNOAGLUTINACIJA

15. IMUNOAGLUTINACIJA Detekcija At (Ag vezan za nosač) Lateks RF test (reumatoidni faktor) INDIREKTNA pasivna (Ag ili At je pasivno vezano za česticu-nosač)

16. Indirektna aglutinacija Detekcija At (Ag vezan za nosač)

17. IMUNOAGLUTINACIJA INDIREKTNA pasivna (Ag ili At je pasivno vezano za česticu-nosač) Detekcija Ag (At vezano za nosač) HBsAg test (hepatitis B virus)

18. Indirektna aglutinacija Detekcija Ag (At vezano za nosač)

19. Detekcija At Primena (Primer) Identifikacija bakterija (enterobakterije) Detekcija Ag DIREKTNA (Ag je deo čestice) BAB test (At na brucelu) IMUNOAGLUTINACIJA Detekcija At (Ag vezan za nosač) Lateks RF test (reumatoidni faktor) INDIREKTNA pasivna (Ag je pasivno vezan za česticu-nosač) Detekcija Ag (At vezano za nosač) HBsAg test (hepatitis B virus)

20. IMUNOPRECIPITACIJA

21. IMUNOPRECIPITACIJAje reakcija između solubilnog(rastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela Najčešće se koristi za merenje količine proteina plazme i drugih telesnih tečnosti (imunoglobulina, komponenti komplementa itd.) Rezultat reakcije je precipitat(talog), tj. dolazi do izdvajanja antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog (optimalnog) odnosa koncentracija antitela i antigena.

22. Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u: tečnoj sredini slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta) polučvrstoj sredini (gelu) slobodnom difuzijom (talog se formira posle više dana) pomoću električne struje (talog se formira posle nekoliko sati)

23. PRIMER RING test (Kvalitativna) Askolijeva reakcija (antraks) U TEČNOJ SREDINI Nefelometrija (Kvantitativna) IMUNOPRECIPITACIJA U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

24. Interfacijalni (interfazni) test prstena – RING test (princip)

25. PRIMER RING test (Kvalitativna) Askolijeva reakcija (antraks) U TEČNOJ SREDINI Određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) Nefelometrija (Kvantitativna) IMUNOPRECIPITACIJA U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

26. Nefelometrija (princip)

27. PRIMER RING test (Kvalitativna) Askolijeva reakcija (antraks) U TEČNOJ SREDINI određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) Nefelometrija (Kvantitativna) IMUNOPRECIPITACIJA Dvostruka imunodifuzija (Kvalitativna) Elekova proba (difterija) U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU) RID test (Kvantitativna)

28. Dvostruka imunodifuzija u gelu – Elekova proba (princip)

29. PRIMER RING test (Kvalitativna) Askolijeva reakcija (antraks) U TEČNOJ SREDINI određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) Nefelometrija (Kvantitativna) IMUNOPRECIPITACIJA Dvostruka imunodifuzija (Kvalitativna) Elekova proba (difterija) U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU) Određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) RID test (Kvantitativna)

30. Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test (princip) At u gelu 2 Ag u rupice: 3 1 RID IgG 4 5

31. Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test (princip) Standardna (kalibraciona) kriva D2 (mm2) 3 2 1 4 5 Ag – koncentracija (mg/ml)

32. 1. Aglutinacija je a. nefelometrijski i RID testom 2. Fenomen prozone je b. direktna aglutinacija 3. Za krajnju identifikaciju nekih bakterija iz familije Entrobacteriaceae se koristi c. lažno negativna aglutinacija u prisustvu viška antitela 4. Lateks aglutinacija je d. tečnoj sredini ili gelu 5. Solubilan antigen ne može da se meri e. kvalitativna tehnika 6. Imunoprecipitacija može da se odigra u f. u tečnom medijumu 7. Ring test je primer imunoprecipitacije g. direktnom aglutinacijom Nefelometrija je h. kvantitativna tehnika 8. 9. Elekova proba je primer i. indirektna aglutinacija 10. C3 komponenta komplementa u krvi može da se meri j. imunoprecipitacije u gelu 1._____ e 2._____ c 3._____ b 4._____ i 5._____ g 6.____ d 7.____ f 8.____ h 9.____ j 10.____ a

33. Sledeća nedelja Predavanje: Odbrana od virusnih, gljivičnih i parazitarnih infekcija Seminar: Enzimski imunotest - ELISA (praktična primena) Imunofluorescencija (praktična primena)