Simposio Concenso de Hepatitis B 22-23 noviembre de 2002

1. Simposio Concenso de Hepatitis B 22-23 noviembre de 2002 El Virus de la Hepatitis B A.A.E.E.H.

2. • Virus de la Hepatitis B (HBV) - Clasificación • El descubrimiento del HBsAg por Blumber y Col. (1965). • Dane y Col (1970) detectaron el virus de la hepatitis B completo (HBV). • El sistema antígeno-anticuerpo (HBe Ag-AcHBe) relacionado con la infectividad fue descripto por Maquius y Espnark, en 1972. • Pertenece al género hepadnavirus, que se caracteriza por ser un virus DNA hepatotropo. • EL HBV es un virus complejo, contiene uno de los genómas más pequeños de todos los virus animales conocidos. • Posee un DNA pequeño parcialmente bicatenario con genes fuertemente solapados. • Presenta mecanismos inusuales de replicación de DNA viral que incluyen TRANSCRIPCION INVERSA a partir de RNA de mayor longitud que el DNA viral (Summer 1982). A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

3. DNA Genómico Antígeno de Superficie grande Antígeno de Superficie mediana Nucleocápside DNA Polimerasa Envoltura Raneyal, Mc Lachianp Primer Antígeno de Superficie pequeño • VIRUS DE LA HEPATITIS B • El HBV está formado por partículas esféricas de 42-47 nm de diámetro, rodeado de una envoltura proteolipídica de 7 nm de espesor que contienen tres formas de AgS (Dane y Col, 1970, Mason y Col, 1980). • • En el interior se observa un núcleo esférico “Core” electrodenso de 22-25 nm. que contiene: • *DNA viral. • *DNA polimerasa. • *Ag viral C (HBcAg). • *DNA primer: iniciador de replicacíon • • El Ag “e” (HBeAg) no forma parte de su estructura sino que se sintetiza a partir del gen C que codifica las proteínas del core. A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

4. Micrografía electrónica MHBs LHBs 16-25 nm partículas 22 nm de espesor SHBs VIRUS FILAMENTO ESFERA • Partículas virales • La concentración de partículas virales en el suero de pacientes infectados pueden exceder las 109 part/ml. Además de las partículas virales se encuentran en el suero otras formas particuladas (esferas y filamentos) llamadas partículas S, compuestas sólo por HBsAg en número superior a las de las partículas infecciosas. • Estas partículas contienen lípidos, carbohidratos y proteínas, pero no componentes del core del virión, y se las considera formas incompletas de la envoltura. A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

5. • Estructura del genóma viral • El genoma de los Hepadnavirus es extraordinariamnete compacto. • DNA circular parcialmente de doble cadena de 3200 nucleótidos. • Cadena larga o negativa de 3.2 Kb. No es un circulo cerrado • Cadena corta o positiva de longitud variable, 1700-2800 pb. • Los extremos 5´ de ambas cadenas de DNA no pueden ser fosforilados, hecho que condujo al descubrimiento de un polipéptido que actúa como Primer. • La longitud del genoma varía según el subtipo viral. • Las posiciones de las diferentes características del genoma se indican según numeración de Ono et. al. (1983). Se inicia en la posición correspondiente al corte con la enzima EcoRI. • En el núcleo del hepatocito se produce un intermediario cccDNA por acción de la polimerasa viral. A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

6. • Genóma del virus de la Hepatitis B • Posee 4 ORFs (C,S,P,X) fuertemente solapado, que se transcriben a 5 mRNA. • La síntesis de cada uno de los mRNA esta dirigido por su promotor correspondiente. • La actividad de los promotores esta regulada por los enhancers. A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

7. RNA Pre-S2/S RNA Pre-S1 Señal de encapsulación RNA X RNA Core (pregenómico) RNA Precore • Características de los genes (ORF) del HBV A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

8. • Estructura del Genóma Viral - Gen C • Situado en posición 1814-2458, presenta 2 codones de iniciación en fase • La secuencia corta situada entre dos codones de iniciación se denomina pre C o precore. • El gen precore/core se transcribe a 2 mRNA: -mRNA precore traduce la proteína HBeAg de 17000 Da. -mRNA Core traduce: - HBcAg de 22000 Da. - DNA polimerasa (proteína P). y actúa como RNA pregenómico. A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

9. POLIMERASA 185 HBcAg RNAcore Traducción RNApregenómico 1821 Transcripción Core 2307 Precore DNA Stop 2456 1814 Transcripción RNAprecore 1792 Traducción 291 185 Proteína precore 19 291 185 p22e Secreción 19 291 151 HBeAg • Proteínas codificadas por el Gen C (HBcAg y HBeAg) GEN PRECORE-CORE HBV A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

10. • Características y función de las proteínas del gen precore/core • HBcAg • • La proteína core HBcAg es blanco para la inmunolisis celular mediada por células T (Moreno 2000). • HBeAg • No interviene en la replicación viral, sin embargo su región se conserva en todos los Hepadnavirus • • Función inhibitoria – Mutación 1896: no produce HBeAg, incrementa replicación viral (Lambert 1993). • Otra mutaciones en el PBC alteran su producción y estarían implicadas en la cronicidad y daño hepatocelular. (mutación 1764) • • Modulación inmunológica: al compartir epítopes con HBcAg es reconocido por células T citotóxicas. • • Función inductora de tolerancia inmunológica “in útero” (Millich 1990).º A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

11. • Estructura del Genóma Viral – GEN S • Situado en posición 2854-835. • Presencia de tres codones de iniciación en fase. • Define tres regiones denominadas PreS1, PreS2 y S • Codifica los péptidos de envoltura del virión y partículas no infectivas. • La especificidad en las proteínas de superficie esta constituida en tres polipéptidos de la envoltura del HBV compuestos por formas glicosiladas y no glicosiladas. • 24000 Daltons - Región S (p24/gp37) --> SHBs --> Reside la especifidad antigénica (Subtipos). • 33000 Daltons - union pre S2-s (p33/gp36) --> MHBs --> Unión a receptor HSA. • 39000 Daltons - 3 regiones pre S1 - pre S2 - S (o sea ORF completo) (p39/gp42) --> LHBs --> Unión a hepatocito. A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

12. unión lectina hígado r Lys y Arg Unión hepatocito d a w Arg Inhibición secreción Sitio proteólisis Lys proteólisis …-122…137…146…149…160 unión HSA 113 translocación ret. endoplas. stop membrana 119 47 6-19 27-47 “loop” antigénico 1 subtipos 1 4 19-29 55 1 8-22 80-99 120-160 226 Gc Gm 226 a.a. SHBs P24-G27 Asn 4 281 a.a. GP33-36 MHBs 400 a.a. P39-GP42 LHBs N pre S1 pre S2 S • Características de las proteínas del Gen S A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

13. Primer Región espaciadora Transcriptasa Reversa/Polimerasa RNasa Proteína 304 1 178 336 680 838 P 3210/1 DNA 2455 2854 3211 155 833 1374 1623 P Enhl 2302 C PreS1 S X PreS2 • Estructura del Genóma Viral – GEN P * Situado en posición 2307-1623. * Codifica un polipeptido básico de 90.000, que posee 4 dominios con actividad: - Proteína terminal o primer. - Región espaciadora. - Transcriptasa reversa / DNA polimerasa. - RNasa. * Interviene en la encapsulación del RNA pregenómico para su posterior retrotranscripción. A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

14. Proteína Región rica en serina/prolina 21 50 Dominio regulador 57 72 126 141 143 1 13 30 48 78 88 103 154 5´ 3´ 21 50 61 91 101 154 60 110 Región conservada 76 139 Dominio transactivador 1374 P 1621 ADN 1814 1836 X DR2 Enh2 DR1 • Estructura del Genóma Viral – GEN X • Situado en posición 1374-1838. • Codifica un polipéptido de 145-154 aa (HBx). Proteína reguladora que actúa como activador transcripcional • Capacidad de inducción a carcinoma hepatocelular (Morearty y Col. 1985). A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

15. Genoma Viral encapsulación U5 1 3221 DR2 DR1 GC poli A Prom X Gen X DNA cebador Gen P Gen P Prom pre S2 Prom pre S1 Prom Precore-core pre S2 preS2 pre S1 S enh I precore Gen C loop antigénico subtipos Unión a hepatocito Unión HSA Atg Atg enh II Mutaciones DR1 - DR2: Secuencias fuertemente conservadas. Intevienen en la replicación. PROMOTORES: Iniciadores de la transcripción. Forman parte integral del gen. ENHANCERS(I y II): Activadores. RESPUESTA GLUCOCORTICOIDES(GC): Intencifica la expresión génica. POLI A: Terminación de transcriptos. REGION U5 ANALOGA A RETROVIRUS: Region altamente conservada. SEÑAL DE ENCAPSULACION: Importante estructura secundaria. Selección de mRNA pregenómico. • Elementos reguladores del genoma viral A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002

16. TRANS. TRAD. 4ORF 5mRNA 7 PROTEINAS PROMOTOR X Gen X mRNA X HB X Activador transcripcional LHB Morfología de la partícula mRNA preS1 PreS1 PreS1 Gen S Unión a hepatocito PreS2 MHB mRNA preS2/S PreS2 S SHB Subtipos virales mRNA precore HB e Antígeno soluble en suero Gen C Nucleocápside HBc mRNA core Polimerasa Retrotranscriptosa Precore-core RNasa Proteina P Primer Gen P REPLICACION VIRAL RNA pregenómico Resumen Transcripción/Traducción A.A.E.E.H. Simposio Concenso de Hepatitis B | noviembre 2002