J. Benito López Salguero

1. Srs2: The “Odd-Job Man” in DNA repairVictoria Marinia and LumirKrejcia,b,⁎aDepartment of Biology, Faculty of Medicine, Masaryk University, Brno CZ-625 00, Czech Republic.bNational Centre for Biomolecular Research, Faculty of Science, Masaryk University, Brno CZ-62500, CzechRepublic. J. Benito López Salguero

2. Recombinación Homóloga (HR) • Mantenimiento de la integridad del genoma • Replicación • Reparación de DSBs • Reparación de la horquilla de replicación • Helicasas • Srs2 de Saccharomyces cerevisiae • “Asegura que los trabajos se realicen cuando y donde se necesiten”

3. Propiedades Bioquímicas • SRS2 codifica una superfamilia de Helicasas DNA I • homologosRep, PcrA y UvrD • región C-terminal • interacciones proteína-proteína • blanco de modificaciones postraduccionales • Tiene actividad ATPasa dependiente de ssDNA • Kcat≥3000 desenrollamientos de DNA/min con polaridad 3-5´ • Srs2 se puede translocar en el ssDNA como un monómero • procesividadde casi 1600 nt • tasa de 300 nt/s

5. Regulación de HR • No interfiera con otras vías de reparación • intermediarios tóxicos • DNA dañado • bloquéo de la progresión de la horquilla de replicación • Varias vías

6. Vías de Eliminación de Intermediarios Indeseables • actividad helicasa de Srs2 • suprime HR desmantelando el filamento presinaptico de Rad51 • Mph1 • desarma D-loops producidos por Rad51 • BLM/Sgs1 junto con Top3 • resolución de dHJ

7. Actividad Antirecombinasa de Srs2 • sgs1 srs2 acumulan intermediarios tóxicos que no pueden resolverse en ausencia de helicasas • Srs2 desmantela el filamento presináptico formado por Rad 51 • mediante actividad translocasa dependiente de ATP

8. Mantenimiento de la Horquilla de Replicación • Un daño a un templete de DNA bloquea la progresión de la horquilla de replicación • Proteínas checkpointreducen la frecuencia de HR • evitando desestabilización de la horquilla de replicación e intermediarios tóxicos • Srs2 está implicado directamente en el checkpoint de la replicación

9. Red de Integridad del Genoma • Varias helicasas participan en los mecanismos de control de la recombinación y otros procesos de reparación

10. Reparación Post-replicativa (PRR) • Srs2 actúa como un switch molecular entre la PRR y HR • Sistema intricado de varias vías independientes • mecanismos libre de errores y propenso a errores

11. Srs2 Como Mecanismo de Control de Calidad • DSBs • Horquillas dañadas • Srs2 antagoniza con Rad52

13. Papeles Adicionales de Srs2 • Actividad recombinasa • también repara DSB por SDSA • Durante SDSA • facilita el desplazamiento de la cadena y/o desplazamiento de Rad51 de un ssDNA(no invasivo) en la estructura D-loop(previniendo un second-end capture) • La habilidad de Srs2 para remover Rad51 de ssDNA • puede requerirse en otras vías de reparación (BIR y SSA)

14. Regulación de Srs2 • Comunicación Srs2 con los checkpoints • Ayudan a elegir el método más apropiado para restaurar la horquilla de replicación estancada y otros tipos de daño • Modificaciones postraduccionales de Srs2 • Regulan la disponibilidad de substratos específicos de DNA que favorecen la recombinación homóloga u otras vías de reparación • Srs2 se expresa en bajos niveles • coordinada con genes de síntesis de DNA en la transición G1-S • inducida por UV en células G2 • Fosforilación • Después de la activación del checkpoint intra-fase S • Requiere las cinasas Dun1, Mec1 y Rad53

15. Gracias!!