Jefe de proyecto: Ma. Teresa O rta de Velásquez Participantes

1. Identificación de subproductos y posibles daños celulares en Helicobacter pylori por acción del cloro y el ozono en agua potable. Jefe de proyecto: Ma. Teresa Orta de Velásquez Participantes Académicos: M. en C. Isaura Yáñez Noguez, Dr. Ignacio Monje Ramírez, Fac. de medicina: Dra. Yolanda López Vidal, Dr. Gonzalo Castillo Becarios: Maestría. Beatriz Casasola Rodríguez Licenciatura. Priscila Ivette Román Román MariéAndreéPierdat Gallardo Salvador Rangel Guadalupe • Proyecto Interno: 9361 • Vigencia: 2010-2011

2. Helicobacter pylori Helicobacter pylories una bacteria asociada a gastritis crónica y adenocarcinoma. • Gram (-) • 2-6 flagelos unipolares • 2 formas morfológicas (cocoide, bacilar) • Forma colonias translucidas de 1 mm • Microaerofílica • (2-5% O2 y 5-10% CO2) el O2 es su aceptor final de electrones • Temperatura óptima 37 º C • Neutrófila con crecimiento óptimo pH: 5.5-8 • Requiere medios complejos, complementados con agar sangre y suplementos Dent y Skirrow • Es detectada al agregar trifeniltetrazolio (TTC) • Ureasa, catalasa y oxidasa (+) • Cataboliza glucosa solamente • Aminoácidos y urea, fuente de nitrógeno

3. Debido a su importancia, ha cobrado interés a nivel mundial: En 1994 (IARC) y (OMS), lo clasificaron como carcinógeno de clase I dentro de los agentes causales. 2005 Marshall y Warren obtuvieron el premio nobel en medicina por el descubrimiento de la implicación de la bacteria en úlceras pépticas y gástricas. *OMS 2008 México Mundial

4. 50% de la población mundial está infectada • 80% en países en desarrollo • Infectados con H. pylori • 20% desarrollará cáncer gástrico • 20% desarrollarán úlcera péptica.

5. Azevedoet al. 2007 proponen que la forma cocoide es la forma en la que la bacteria se encuentre en el medio ambiente

6. Detección • Debido a que la forma (VNC) es la que se encuentra presente en los sistemas acuáticos, se utilizan diversos métodos que no involucran el crecimiento de la bacteria. • Inmunoensayo enzimático • Prueba de actividad de ureasa • Hibridación fluorescente in situ FISH: (FluorescentIn SituHybridization) • PCR (polymerasechainreaction) en tiempo real • PCR Técnica cuantitativa • PCR Detecta en tiempo real la amplificación de nuestro genoma de interés.

7. Se ha detectado HELICOBACTER PYLORI en: • Agua superficial (Cutzamala). • Agua residual tratada usada para riego (Xochimilco). • Agua residual sin tratamiento (Gran Canal/Río de los Remedios).

8. Métodos más empleados para Desinfección • Ozono • Cloro • Hipoclorito y monocloramina (NH2Cl) • Económico y eficaz • Buenas propiedades residuales • 1.1 mg/L residual • Formación de trihalometanos en presencia de materia orgánica (vegetal o animal) - Bromoformo - Cloroformo • Alto potencial de oxidación • Rápida descomposición • 0.1-0.4 mg/L residual • Formación de subproductos en presencia de materia orgánica y bromuros. -Bromato (25 μg/L) -Bromoformo

9. Desinfección H. pylori ha mostrado resistencia a los niveles habituales de cloro, por lo que la bacteria puede permanecer viable el tiempo suficiente para llegar a la población. Buscar alternativas eficaces en los procesos de tratamiento de agua potable y de reuso. • El tratamiento con ozono es una tecnología factible de desinfección • (Thanomsub 2002). Usó cultivos aplicando altos tiempos de contacto. Daño en membrana

10. OBJETIVO • Establecer las dosis del ozono y cloro, así como tiempos de contacto necesarios para inactivar la bacteria H. pylori inoculada en una muestra sintética y en agua de pozo. • Objetivos específicos: • Cuantificar la densidad celular de H. pylori, para determinar la inactivación aplicando la técnica de PCR en tiempo real. • Determinar posibles alteraciones en el DNA de H. pyloriaplicando la técnica de PCR el tiempo real. • Determinar posibles alteraciones en la estructura celular de H. pylori por medio de microscopía electrónica. • Evaluar subproductos derivados de la desinfección con ozono . Helicobacter pylori

11. METODOLOGÍA 13 ml de agua 6x106 UFC de H. pylori 3 min 5 min 10 min

12. Resultados Determinación de la solubilidad del ozonoen agua destilada Para realizar los ensayos de desinfección fue necesario obtener una solución acuosa saturada de ozono, ya que no es posible ozonizar directamente las muestras sintéticas con H. pylori. Debido a que se trabaja con volúmenes muy pequeños de agua y las dosis de ozono son bajas.

13. Se realizaron diferentes ensayos, sin embargo no se observó crecimiento bacteriano en ninguna de las placas de agar. Probablemente la bacteria sufre lisis por choque osmótico al entrar en contacto con el agua destilada. • Se efectuó el mismo ensayo, sustituyendo el agua destilada por Solución Salina Isotónica para determinar tiempo de vida de la forma bacilar de H. pylori en ella, sin embargo tampoco se obtuvo crecimiento de H. pylori en ninguna de las placas.Se determinó un tiempo de vida corto de la forma bacilar de H. pylori en agua destilada. Debido a los resultados obtenidos se evaluó la posibilidad de trabajar con las formas cocoides, ya que estas son las que se encuentran en medios acuáticos como forma de resistencia de la forma bacilar de H. pylori. El Dr. Castillo de la Facultad de medicina recomendó promover las formas cocoides y realizar los ensayos de desinfección dentro de un periodo de 22 días posteriores.

14. RESULTADOS • Obtención de las formas cocoides Bacilar Cocoide

15. ACTIVIDADES SEGUNDO AÑO