300 likes | 1.43k Views
Kultur Haploid. Tan haploid sangat penting bagi pemulia tanaman: memperpendek masa pemuliaan Karena hanya ada 1 set kromosom, mudah mengidentifikasi mutasi resesif Double haploid = homozygote Anther untuk eksplan kultur. Faktor yg mempengaruhi kultur anther. Genotipe
E N D
Kultur Haploid • Tan haploid sangat penting bagi pemulia tanaman: memperpendek masa pemuliaan • Karena hanya ada 1 set kromosom, mudah mengidentifikasi mutasi resesif • Double haploid = homozygote • Anther untuk eksplan kultur
Faktor yg mempengaruhi kultur anther • Genotipe • Menentukan kesuksesan/kegagalan • Perlu mencoba berbagai cv saat mengembangkan protokol utk menghslkan tan haploid via kultur anter • Kondisi tanaman donor • Umur, kondisi fisiologis : pilih yg sehat dan kuat • General rule : gunakan ‘bud’ yg baru muncul
Tahap perkembangan mikrospora • Anther umumnya responsif pd tahap uninucleate • Saat menyiapkan protokol/prosedur, catat ukuran, warna, bentuk bunga, lalu disesuaikan dg tahap mikrospora yg tepat. Sehingga dikemudian hari, memudahkan pengambilan eksplan yg tepat
Perlakuan awal & inkubasi awal • Pd tembakau, kuncup diinkubasi pd 7-8oC selama 12 hr sebelum dikulturkan • Pd B. campestris, 35oC selama 1-3 hr • Media • Yg umum : media MS (Murashige & Skoog, 1962) dan N6 (Chu, 1978) • Kadang perlu ekstrak kentang, air kelapa, casein hydrolisate, sukrosa. • Media padat atau cair
Problem dlmkulturanter • Hasil rendah • Ketidakstabilan genetik. • Pd serealia, tan haploid selalu albino • Perlu memodifikasi media, tahap perkembangan mikrospora dan faktor lain
Prosedur umum kultur anther • Koleksi kuncup bunga • Keseluruhan inflorescence atau kuncup bunga dipanen dan dijaga kelembabannya sampai siap dikulturkan • Jika kuncup perlu pre-treatment, bungkus dg kertas tisu yg sdh diperciki air, lalu masukkan ke dlm plastik.
Desinfestation, excision & culture • Sterilisasi umum dg 5% NaOCl, 5-10’ • Anther lalu diambil, hati2 jgn sampai terluka. Hilangkan filamen • Tanam dlm media, biasanya pake petri dish • Penentuan tahap mikrospora • Ditentukan dg cara memencet anter dlm acetocarmine atau propiocarmine dan diamati di bwh mikroskop.
Penanganan plantlet haploid • Plantlet kecil akan muncul 4 – 8 mg setelah dikulturkan • Pisah2kan dan disubkultur ke media akar • Lalu dipindah ke pot kecil • Perlakuan colchicine untuk menghasilkan tan ‘double haploid’