160 likes | 636 Views
Kultur Haploid. Ir. Ida Ayu Astarini , M.Sc., Ph.D. Tan haploid sangat penting bagi pemulia tanaman : memperpendek masa pemuliaan Karena hanya ada 1 set kromosom , mudah mengidentifikasi mutasi resesif Double haploid = homozygote Anther untuk eksplan kultur.
E N D
Kultur Haploid Ir. Ida AyuAstarini, M.Sc., Ph.D
Tan haploid sangatpentingbagipemuliatanaman: memperpendekmasapemuliaan • Karenahanyaada 1 set kromosom, mudahmengidentifikasimutasiresesif • Double haploid = homozygote • Anther untukeksplankultur
Faktorygmempengaruhikultur anther • Genotipe • Menentukan kesuksesan/kegagalan • Perlu mencoba berbagai cv saat mengembangkan protokol utk menghslkan tan haploid via kultur anter • Kondisi tanaman donor • Umur, kondisi fisiologis : pilih yg sehat dan kuat • General rule : gunakan ‘bud’ yg baru muncul
Tahapperkembanganmikrospora • Anther umumnyaresponsif pd tahapuninucleate • Saatmenyiapkanprotokol/prosedur, catatukuran, warna, bentukbunga, laludisesuaikan dg tahapmikrosporaygtepat. Sehinggadikemudianhari, memudahkanpengambilaneksplanygtepat
Perlakuanawal & inkubasiawal • Pd tembakau, kuncupdiinkubasi pd 7-8oC selama 12 hr sebelumdikulturkan • Pd B. campestris, 35oC selama 1-3 hr • Media • Ygumum : media MS (Murashige & Skoog, 1962) dan N6 (Chu, 1978) • Kadangperluekstrakkentang, air kelapa, casein hydrolisate, sukrosa. • Media padatataucair
Problem dlm kultur anter • Hasil rendah • Ketidakstabilan genetik. • Pd serealia, tan haploid selalu albino • Perlu memodifikasi media, tahap perkembangan mikrospora dan faktor lain
Prosedur umum kultur anther • Koleksi kuncup bunga • Keseluruhan inflorescence atau kuncup bunga dipanen dan dijaga kelembabannya sampai siap dikulturkan • Jika kuncup perlu pre-treatment, bungkus dg kertas tisu yg sdh diperciki air, lalu masukkan ke dlm plastik.
Desinfestation, excision & culture • Sterilisasi umum dg 5% NaOCl, 5-10’ • Anther lalu diambil, hati2 jgn sampai terluka. Hilangkan filamen • Tanam dlm media, biasanya pake petri dish • Penentuan tahap mikrospora • Ditentukan dg cara memencet anter dlm acetocarmine atau propiocarmine dan diamati di bwh mikroskop.
Penanganan plantlet haploid • Plantlet kecil akan muncul 4 – 8 mg setelah dikulturkan • Pisah2kan dan disubkultur ke media akar • Lalu dipindah ke pot kecil • Perlakuan colchicine untuk menghasilkan tan ‘double haploid’