1 / 28

Histokompatibilní systém a prezentace antigenu

Histokompatibilní systém a prezentace antigenu. MHC. M ajor H istocompatibility C omplex (MHC)  Human Leukocyte Antigenes (HLA) u člověka - kóduje polymorfní glykoproteiny, které patří do imunoglobulinové skupiny - hrají důležitou roli při regulaci imunitní odpovědi organismu.

lassie
Download Presentation

Histokompatibilní systém a prezentace antigenu

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Histokompatibilní systém a prezentace antigenu

  2. MHC • Major Histocompatibility Complex (MHC)  Human Leukocyte Antigenes (HLA) u člověka - kóduje polymorfní glykoproteiny, které patří do imunoglobulinové skupiny - hrají důležitou roli při regulaci imunitní odpovědi organismu

  3. HLA geny, produkty a metodiky detekce DP DQ DR B C A chromosom 6 DNA TNF, geny komplementu DNA sérologie HLA II třída HLA I třída Buněčná membrána neshody Th,Tc Tc MLC, HTLp CML, CTLp

  4. STRUKTURA HLA ANTIGENŮ • I. třída – a řetězec – 45kDa, b2 mikroglobulin • II. třída – a a b řetězce, 30 kDa

  5. Pohled na HLA I. třídy „zhora“

  6. Každý jedinec má od rodičů 2 antigeny HLA-A, 2 - HLA-B, -DR atd. Kodominantní exprese HLA

  7. VÝSKYT HLA ANTIGENŮ • HLA antigeny I. třídy - A,B,C - na všech nukleárních buňkách • HLA antigeny II. třídy - DR, DQ, DP - na antigen-prezentujících buňkách – dendritické buňky, monocyty, makrofágy, B buňky

  8. Rozpoznání antigenu – MHC restrikce

  9. Prezentace antigenu – I. třída

  10. Prezentace antigenu – II. třída

  11. Nomenklatura

  12. Asociace s některými nemocemi

  13. HLA ANTIGENY • Pro transplantace orgánů typizujeme HLA antigeny A, B, (první třídy) a DR (druhé třídy) • Pro transplantace kmenových buněk – A, B, Cw, DR, DQ • Velmi rozdílné (polymorfní) - (přes 1000 HLA-B alel (varianta genu), více než 700 alel HLA-DR)

  14. Frekvence některých HLA antigenů I. tř. v české populaci • A*02 (49.1%), A*03 (11.9%), A*01 (36.4%), A*24 (12.1%) • B*07 (31.5%), B*44 (35.7%) B*08 (29.8%) • Cw*07 (44%), Cw *0602 (26%), Cw*03 a Cw*12 (obojí 20%)

  15. PROČ SE PROVÁDÍ HLA TYPIZACE? • Shoda v HLA antigenech mezi dárcem a příjemcem i přes velký pokrok v imunosupresivní léčbě je životně důležitá pro transplantaci kmenových buněk a má (stále) význam pro dlouhodobé přežití transplantovaných orgánů (ledviny, srdce, pankreas)

  16. HLA typizace • Sérologie - stále se používá pro typizaci antigenů I. třídy pro orgánové transplantace • Molekulárně biologické metody - pro typizaci antigenů I. a II. třídy pro orgánové transplantace a transplantace kmenových buněk

  17. Izolace lymfocytů

  18. Princip sérologie

  19. Odečet cytotoxického testu

  20. Limitace sérologie • Antiséra a monoklonální protilátky nepokrývají všechny HLA specificity • Potřeba živých buněk s výraznou povrchovou expresí HLA antigenů • Sérologická křížová-reaktivita (A2 a A28, B7 a B27, B5 a B53,…)

  21. Molekulárně genetické metody při HLA typizaci • PCR-SSP (polymerázová řetězová reakce se sekvenčně specifickými primery) - amplifikace určité sekvence specifickými primery • PCR-SSO (polymerázová řetězová reakce se sekvenčně specifickými oligonukleotidy) • - amplifikace celého úseku kódujícího příslušný antigen - rozlišení alel a následna hybridizace se značenýmisondami • Sekvenování HLA genů

  22. PCR – polymerase chain reaction • Selektivní amplifikace (množení) specifické cílové DNA • Nutná je předem informace o cílové sekvenci DNA • Primery – 15-25 nukleotidů

  23. První cyklus • Denaturace DNA – 93-95°C • Annealing primerů – 50°-70° • Syntéza DNA – 70-75°C • t° stabilní DNA-polymeráza (Taq polymeráza – Thermus aquaticus) • Deoxynukleozid- trifosfáty

  24. Další PCR cykly • Řetězová reakce, po 25 cyklech – 105 kopií cílové sekvence

  25. SSP(sequence-specific primers) • Použití primerů sekvenčně specifických pro určitou alelu • Separace a vizualizace PCR produktů v gelu (etidium bromid)

  26. SSOP(sequence-specific oligonucleotide probes) • Amplifikujeme celý gen ( HLA-A,-B-DR…) • Rozlišení alel následnou hybridizací se značenými sondami SSOP

  27. Histokompatibilita u orgánových transplantací • Ledviny – shoda HLA-A,B,DR, negativní crossmatch • Srdce/plíce –negativní crossmatch • Ledvina/pankreas - negativní crossmatch • Játra – crossmatch nemá význam • U transplantací kmenových buněk – většinou se připouští jedna neshoda na úrovni alel (záleží na TC)

  28. The Effect of HLA-Mismatches on Cadaver Kidney Graft Survival (UNOS 1994-1998) 100 90 80 70 60 50 40 40 83 79 76 74 30 HLA MM 0 1-2 3-4 5-6 20 18 15 11 Percent Survival n T1/2 Percent Graft Failures 20 4,688 5,674 16,677 7,533 16.0 11.1 9.7 8.7 10 0 0 1 2 3 0 1 2 3 Years Posttransplant

More Related