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1. MICROBIOLOGIA – AULA 6 Bacilos Gram-negativos curvos e fermentadores oxidase-positivos e Bacilos Gram-negativos exigentes • QUESTÕES PARA AS PROVAS; • CONTEÚDO DAS AULAS; • ATIVIDADES ON-LINE; BLOG: http://chicoteixeira.wordpress.comchico.m.teixeira TWITTER: @ChicoMTeixeira MSN: ft.martins@hotmail.com e-mail: ft_martins@yahoo.com

2. Bacilos curvos Antecedentes históricos; Campylobacter jejuni são bacilos curvos móveis e microaerofílicos descobertos em 1931 por Jones e colaboradores; Foram isolados do sangue de crianças com disenteria aguda por King em 1957; Até que em 1972 foram isolados das fezes de pacientes com enterite aguda; Campylobacter jejuni

3. Bacilos curvos Antecedentes históricos; Helicobacter pylori, anteriormente denominado C. pyloridis e, a seguir, C. pylori, foi descoberto por Warren e Marshall em 1982; Embora na literatura do início do século XX são encontrados relatos de microrganismos espiralados em amostras de biópsia de mucosa gástrica humana; Pode constituir a causa mais comum de infecção gastrintestinal humana e a causa mais frequente de gastrite; Helicobacter pylori

4. Classificação

5. Espécies de Campylobacter Necessitam de teor diminuído de oxigênio, ou seja, são microaerofílicas e necessitam de teor aumentado de dióxido de carbono, ou seja, são capnofílicas; São móveis e possuem um único flagelo polar sem bainha; Não realizam metabolismo fermentativo e nem oxidativo e obtêm energia pela utilização de aminoácidos e intermediários do ciclo de Krebs;

6. Espécies de Campylobacter Vivem numa ampla variedade de nichos ecológicos e meios ambientais; A maioria das espécies é encontrada em animais (gado bovino, suínos) e provoca infertilidade e aborto;

7. Campylobacter jejuni Importância clínica; Constitui o patógeno humano mais importante entre os microrganismos do gênero; Possui distribuição mundial, e nos países mais industrializados é isolado de amostras de fezes diarréicas com frequência duas a sete vezes maior quando comparado com Salmonella ou Shigella;

8. Campylobacter jejuni Importância clínica; A grande maioria das galinhas, perus e aves aquáticas é colonizada por C. jejuni; É também encontrado em animais domésticos, que podem ser portadores;

9. Campylobacter jejuni Importância clínica; A ingestão de leite cru, de aves parcialmente cozidas ou de água contaminada constitui fonte comum de infecções humanas; A enterite produzida caracteriza-se por dor abdominal com cólicas, diarreia sanguinolenta, calafrios e febre; Na maioria dos indivíduos os sintomas desaparecem de 3 a 7 dias;

10. Campylobacter jejuni Importância clínica; Porém, os pacientes convalescentes podem continuar excretando o microrganismo durante 2 semanas a 1 mês; Nos casos de doença grave, o paciente pode ser tratado com eritromicina oral; Enterite e síndromes diarreicas são as doenças mais comuns, porém surgiram outras:

11. Campylobacter jejuni Importância clínica; Meningites Artrite séptica Proctocolite secundária

12. Identificação Presuntiva A partir de amostras de fezes: É possível estabelecer um diagnóstico de enterite por Campylobacter quando se observa presença de formas gram-negativas curvas, em formato de S, em asa de gaivota ou espiraladas em amostras de fezes diarreicas coradas pelo método de Gram

13. Identificação Presuntiva A partir de amostras de fezes: Em alguns laboratórios, as amostras de fezes para a pesquisa de espécies de Campylobacter não são mais processadas, a não ser que se verifique a presença de leucócitos PMN, pois é pouco provável isolar o microrganismo em amostras de fezes com ausência de leucócitos; Pode-se considerar o exame de preparações a fresco ou de esfregaços corados de todas as amostras de fezes diarreicas à procura de leucócitos polimorfonucleares e presença de formas bacterianas sugestivas de Campylobacter

14. Isolamento laboratorial O isolamento bem sucedido de C. jejuni a partir de amostras de fezes depende de: • uso de meios seletivos de cultura Campy-Thio, Campy-BAP; • Incubação em temperatura elevada (42º C); • Atmosfera apropriada de incubação (5% de O2, 10% de CO2, 85% de N2);

15. Gênero Helicobacter Compreende 23 espécies formalmente validadas, são microaerófilos estritos, com morfologia espiralada ou helicoidal.; Muitas espécies exibem uma forte atividade de urease; As espécies incluídas no gênero Helicobacter possuem flagelos com bainha. Nenhuma espécie de Campylobacter tem flagelos com bainha;

16. Helycobacter pylori Importância clínica; É encontrado apenas nas células epiteliais secretoras de muco do estômago; Existem fortes evidências de que H. pylori está associado ao adenocarcinoma gástrico e linfoma não-Hodgkin gástrico; As evidências sugerem que H. pylori constitui o agente etiológico da gastrite antral crônica e é um importante fator na patogenia da doença ulcerosa péptica;

17. Identificação Presuntiva A partir de biópsias gástrica e duodenal: As colônias são pequenas, acinzentadas, aspecto de translúcidas e fracamente b-hemolíticas. A coloração pelo método de Gram revela bactérias gram-negativas, de coloração pálida e curvas, com morfologia característica em asa de gaivota e em U; Reações positivas para oxidase e catalase e reação extremamente rápida para urease;

18. Isolamento laboratorial Helycobacter pylori pode ser cultivada em meios não-seletivos contendo sangue, produzindo em 3 a 5 dias pequenas colônias acinzentadas e com aspecto translúcido; A incubação deve ser feita em temperatura de 35 a 37º C, embora algumas cepas cresçam em 42; Atmosfera apropriada de incubação (5% de O2, 10% de CO2, 85% de N2);

19. Gênero Vibrio As espécies de Vibrio são de interesse tanto histórico quanto contemporâneo. V. cholerae é o agente etiológico da cólera asiática humana; Ocorreram sete pandemias de cólera desde 1816-1817, a mais recente começou em 1961 na Indonésia; A maioria das infecções foi observada após a ingestão de frutos do mar contaminados e mal cozidos;

20. Gênero Vibrio Foram também relatadas infecções de feridas após traumatismo durante a natação ou trabalho realizado em águas infectadas ou em exposição a animais marinhos;

21. Taxonomia As cepas de Vibrio cholerae isoladas de casos clássicos de cólera pandêmica sofrem reação de aglutinação no denominado anti-soro 01; As cepas que não sofrem aglutinação com esse anti-soro são denominadas V. cholerae não-01 ou designadas com uma variedade de nomes de outras espécies de vibriões; A diferenciação precoce entre os dois grupos pode ser de considerável importância clínica;

22. Taxonomia As espécies que são isoladas de seres humanos e que causam doenças são divididas em dois grupos; Embora tenham sido identificadas 35 ou mais espécies distintas de Vibrio, todas elas, com exceção de 11, são microrganismos ambientais, denominados “espécies de vibriões marinhos”, que não foram associadas a infecções humanas; V. cholerae e vibriões não-cólera;

23. Cólera Diarreia secretória – consequência da excessiva estimulação do processo normal de secreção no intestino delgado com ou sem deficiência ao nível da reabsorção da água e eletrólitos; A secreção é superior à absorção; Depleção de sódio e perda de água + bicarbonato conduzindo a um pH neutro;

24. MICROBIOLOGIA – AULA 6 Bacilos Gram-negativos curvos e fermentadores oxidase-positivos e Bacilos Gram-negativos exigentes • QUESTÕES PARA AS PROVAS; • CONTEÚDO DAS AULAS; • ATIVIDADES ON-LINE; BLOG: http://chicoteixeira.wordpress.comchico.m.teixeira TWITTER: @ChicoMTeixeira MSN: ft.martins@hotmail.com e-mail: ft_martins@yahoo.com

25. Espécies de Haemophilus São bacilos gram-negativos pequenos e imóveis que necessitam de fatores presentes no sangue para o seu crescimento; O nome do gênero deriva de palavras gregas que significam “amantes do sangue”; Algumas espécies necessitam do fator X, que não é uma substância isolada, mas sim um grupo de compostos tetrapirrólicos termoestáveis;

26. Espécies de Haemophilus Esses compostos são utilizados na síntese de catalases, peroxidases e citocromos do sistema de transporte de elétrons; Também existe uma demanda pelo fator V, que é a NAD ou a NADP; O aquecimento suave para a adição de sangue ao ágar base na preparação de ágar chocolate acaba em lise dos eritrócitos e liberação dos fatores;

27. Espécies de Haemophilus Apesar de a maioria das espécies ser incapaz de crescer em ágar sangue de carneiro, pode-se observar crescimento de minúsculas colônias desses microrganismos ao redor de colônias de outros microrganismos hemolíticos em culturas mistas (p. ex., Staphylococcus aureus); A lise dos eritrócitos libera o fator X, enquanto o fator V é sintetizado e fornecido aos hemófilos pelos próprios estafilococos;

28. Espécies de Haemophilus Embora a maioria dos laboratórios confie no ágar chocolate para o isolamento destas espécies a partir de amostras clínicas, Haemophilus também crescem em ágar contendo 5% de sangue de cavalo ou de coelho; A hemólise observada nesses meios é útil para a identificação da espécie;

29. Taxonomia de Haemophilus O gênero Haemophilus inclui nove espécies encontradas em seres humanos e cinco espécies em animais;

30. Haemophilus influenzae Importância clínica; As espécies de Haemophilus fazem parte da microbiota normal da orofaringe e nasofaringe em mais de 85% dos adultos; Os isolados da orofaringe consistem, em sua maioria, em H. influenzae e H. parainfluenzae não-encapsulados, embora H. influenzae com cápsula possa ser encontrado como parte da microbiota normal;

31. Haemophilus influenzae Importância clínica; Na presença de doenças respiratórias crônicas;

32. Haemophilus influenzae Importância clínica; Porém, a cápsula permite ao microrganismo resistir à fagocitose e à destruição intracelular; O H. influenzae tanto encapsulado quanto não-encapsulado podem causar infecções graves;

33. Haemophilus influenzae Tratamento e Prevenção: Vacinas produzidas apenas com o antígeno capsular de H. influezae tipo b não eram efetivas por falharem na produção de anticorpos em crianças com menos de dois anos de idade, ou seja, o grupo de maior risco para essa doença grave; Antes da introdução de vacinas efetivas contra H. influenzae tipo b, esse microrganismo era responsável por cerca de 16000 casos de doença invasiva anualmente em crianças com até 5 anos; Durante o período neonatal a imunidade contra H. influenzae tipo b é adquirida por meio de anticorpos transplacentários que são eliminados dentro dos primeiros meses de vida; As infecções ocorriam, em sua maioria, em crianças de até 2 anos de idade devido à presença inadequada de anticorpos nessa faixa etária; Esses anticorpos reaparecem após exposição a microrganismos tipo b ou a outros antígenos microbianos que desencadeiam a formação de anticorpos de reação cruzada;

34. Haemophilus influenzae Tratamento e Prevenção: Assim, foram conduzidos estudos clínicos com quatro vacinas conjugadas de polissacarídeo + proteína; Os conjugados consistiram em polissacarídeos nativos conjugados com toxoide tetânico, outro toxoide (diftérico) e outras proteínas, e nesta última década relataram a eficácia de 95-100%, dependendo da dose e dos esquemas;

35. Outros microrganismos Francisella tularensis Brucella sp.

36. Espécies de Bordetella Os membros do gênero Bordetella consistem em pequenos cocobacilos gram-negativos no isolamento primário; São aeróbios obrigatórios, apresentam crescimento ótimo a 35 a 37ºC, não utilizam carboidratos e são inativos na maioria das provas bioquímicas; O gênero inclui espécies isoladas espécies isoladas de seres humanos e de outros animais;

37. Bordetella pertussis Importância clínica; B. pertussis causa a síndrome conhecida como coqueluche; A imunização parcial de crianças pode modificar o quadro clínico clássico; Depois de 1947, quando a vacina antidiftérica, antipertussis, antitetânica (DPT) foi licenciada e recomendada;

38. Coqueluche O ser humano é o único hospedeiro reconhecido de Bordetella pertussis; A coqueluche continua sendo uma doença endêmica de importância mundial, com mais de 350.000 mortes atribuídas à doença anualmente; A transmissão ocorre por contato direto com as gotículas de aerossol de indivíduos infectados e com tosse;

39. Muito Obrigado!!!