1 / 13

Endogenna transkrypcja zachodzi w 1-komórkowym zarodku myszy

Endogenna transkrypcja zachodzi w 1-komórkowym zarodku myszy. Rozwój embrionalny zazwyczaj zaczyna się okresem cichym transkrypcyjnie, kontrolowanym przez elementy pochodzenia matczynego Okres przejścia z matczynej do embrionalnej kontroli jest różny u różnych gatunków

louis-albert
Download Presentation

Endogenna transkrypcja zachodzi w 1-komórkowym zarodku myszy

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Endogenna transkrypcja zachodzi w 1-komórkowym zarodku myszy

  2. Rozwój embrionalny zazwyczaj zaczyna się okresem cichym transkrypcyjnie, kontrolowanym przez elementy pochodzenia matczynego • Okres przejścia z matczynej do embrionalnej kontroli jest różny u różnych gatunków • U myszy I transkrypcja była wykryta na poziomie 2 komórek • Traktowanie 1-komórkowych zarodków α-amanityną nie upośledzało ich rozwoju aż do późnego 2-komórkowego stadium • Synteza ojcowskich białek staje się wykrywalna na poziomie 2-komórek

  3. Przypuszczano, że 1-komórkowe zarodki są transkrypcyjnie nieczynne Cel eksperymentu: Wyznaczenie dokładnego czasu podjęcia aktywności transkrypcyjnej prze zarodek

  4. Materiały i metody • Samice myszy C57/CBA były superowulowane (5 UI PMSG i po 48h 5UI hCG) i pokrywane samcami C57/CBA) • Zapłodnione oocyty były pobrane 17 h po hCG, oczyszczone i umieszczone w hodowli • Cytoplazma zarodków w różnych stadiach była nastrzykiwana 100mM BrUTP • Po krótkiej hodowli zarodki były sprawdzane in situ pośrednią metodą immufluorescencyjną

  5. Schemat doświadczenia

  6. Po inkubacji z BrUTP intensywne punktowe oznakowanie obserwowane w jądrach zarodków we wczesnych i późnych stadiach 2- i 4-komórkowych • Sygnał reprezentował nowo syntetyzowane RNA • Zarodek jest aktywny transkrypcyjnie od stadium 2 komórek • BrUTP jest substratem dla RNA polimerazy II

  7. Zarodki z wyznakowanym BrU RNA: 2-kom./34h po hCG (A, B) i 4-kom./58h po hCG (C, D)

  8. Nastrzykiwano 1-komórkowe zarodki BrUTP • Brak znakowania we wczesnych stadiach zarodka 1-komórkowego • Znakowanie BrU późnym zarodku 1-komórkowym • Czasami znakowanie w II ciałku komórkowym • Brak znakowania przy jednoczesnym nastrzyknięciu α-amanityną i BrUTP • Znakowanie znoszone przy zastosowaniu RNazy A • Przy zastosowaniu DNazy I wolnej od RNaz znakowanie zachowane Endogenna transkrypcja zachodzi w późnych 1-komórkowych zarodkach

  9. Zarodki 1-komórkowe z wyznakowanym BrU RNA: 22 h po hCG (A, B) i 28 h po hCG (C, D)

  10. 10% zygot miało wyznakowane jedynie męskie przedjądrze • Nie otrzymano jednoznacznego czasu, w którym zachodzi transkrypcja w przedjądrzu męskim (max. częstość zjawiska – ok. 27h po hCG) • Duża rozbieżność wyników (25-29h po hCG) spowodowana asynchronią naturalnego zapłodnienia • Przedjądrza męskie zarodków z oboma przedjądrzami transkrypcyjnie pozytywnymi były większe niż u zarodków z tylko męskim przedjądrzem pozytywnym • Endogenna transkrypcja zachodzi najpierw w męskim przedjądrzu

  11. Zarodek po 27h po hCG z wyznakowanym BrU jedynie przedjądrzem męskim

  12. WNIOSKI • Endogenna transkrypcja zależna od polimerazy II zachodzi w póżnym 1-komórkowym zarodku, w późnej fazie S lub G2 • Endogenna transkrypcja ma miejsce najpierw w męskim przedjądrzu

  13. KONIEC

More Related