110 likes | 381 Views
Petunjuk Materi Isolasi DNA Laboratorium Biologi Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung 2014. CARA KERJA ISOLASI DNA. Bahan baku pisang Potong pisang 1-2 buah menjadi kecil-kecil Taruh pada blender serta campur dengan air sekitar 100 ml
E N D
Petunjuk Materi Isolasi DNA Laboratorium Biologi Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung 2014
CARA KERJA ISOLASI DNA • Bahan baku pisang • Potong pisang 1-2 buah menjadi kecil-kecil • Taruh pada blender serta campur dengan air sekitar 100 ml • Tambahkan NaCl 1 ml dan Blender sampai halus • Taruh hasil tersebut pada tabung conicel sampai 5 cc
5. Beri Larutan Lisis Buffer sekitar 750 mikro liter 6. Kocok dengan perlahan sekitar 1-3 menit 7. Diamkan sekitar 5-10 menit 8. Tambahkan 1 ml Proteinase K 9. Gojok perlahan-lahan sekitar 1-3 menit 10. Tambahkan etanol dingin 1/3 11. Amati hasil 12. Lakukan pembacaan pada spektofotometri
CARA KERJA ISOLASI DNA Bahan Baku buccal • Lakukan seperti Massage pada buccal • Kumurr dengan menggunakan air selama minimal 3 menit • Lalu tampung hasil air kumuran pada tabung conicel besar • Tambah NaCl 1 mL. Tambah Buffer lisis (3cc) Perbandingan 20 :3 5. Kocok secara perlahan selama 1-3 menit
6. Tunggu selama 5-10 menit 7. Tambah Proteinase 1 ml 8. Kocok secara perlahan selama 1-3 menit 9. Tambahkan etanol dingin 1/3 nya 10. Amati hasil 11. Lakukan pembacaan pada spektofotometri
Panjang gelombang untuk membaca DNA adalah 260 nanometer Panjang gelombang untuk membaca protein adalah 280 nanometer 260/280 rasio ketentuan 1,8 (N) >1,8 kontaminan RNA < 1,8 kontaminan protein
Bahan untuk isolasi DNA berasal dari : • Tumbuhan • Hewan contoh pada buccal • Bakteri Pada tumbuhan yang banyak mengandung DNA: • Bayam • Kacang polong • Pisang • Brokoli • Strawberry
Dinding sel (di pecah) membran (lisis) inti sel DNA dan protein histon protein histon akan di pecah oleh enzim proteinase K DNA akan di presipitasi oleh etanol dingin agar presible seperti benang Untuk memecah dinding sel bisa di lakukan • Di blender • Di tumbuk • Di simpan dengan suhu minus 70
Perbedaan isolasi DNA pada hewan dan tumbuhan adalah • Pada tumbuhan terdapat dinding sel jadi hari di pecah terlebih dahulu • Sedangkan pada hewan tidak ada dinding sel maka langsung di beri buffer lisis