Haltoxicitási teszt: prolongált 14 napos OECD No. 204

1. Vegyészmérnöki és Biomérnöki Kar Környezetmérnök Szak Haltoxicitási teszt: prolongált 14 napos OECD No. 204 Készítette: Nagy Renáta A Környezettoxikológia c. tárgyhoz

2. A teszt Feladat: vízhez adott vegyianyag toxicitásának vizsgálata. A teszthez édesvízi halfajokat kell alkalmazni. A mérés végpontja a halak pusztulása. NOEC értéket kell meghatározni. A teszt időtartama: 14 nap (meghosszabbítható: 1-2 héttel) Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

3. A vizsgált vegyianyag tulajdonságai Tulajdonságok: • vízben való oldhatóság • gőznyomás • kémia szerkezet • anyag tisztaság • mennyiségi meghatározásra szolgáló elemzés módszer • kémiai stabilitás • oktanol-víz megoszlási hányados Ezek a használt módszer kiválasztásához szükséges információk. Módszer lehet: fél-statikus vagy átfolyásos módszer. Vizsgálat időtartama alatt biztosítani kell a vegyi anyag állandó koncentrációját. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

4. A teszthez ajánlott fajok

5. A teszthez ajánlott néhány faj (1) Pimephales promelas Cyprinus carpio Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

6. A teszthez ajánlott néhány faj (2) Oryzias latipes Poecilia reticulata Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

7. Alkalmazott halak A teszthez egy vagy több faj is használható. Laboratóriumban vagy halgazdaságban tenyésztett halakat kell használni. Fontos a származás ismerete. Betegség- és parazita-mentes körülmények között kell nevelni őket, annak érdekében, hogy a kísérleti állat egészséges legyen. Ezt folyamatosan ellenőrizni kell. A teszthez alkalmazott halaknak a világ minden részén rendelkezésre kell állni. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

8. Alkalmazott halak Kiválasztás szempontjai: • egész évben könnyen beszerezhető • könnyen fenntartható • kedvező gazdasági, biológiai, ökológiai tényezők • jó egészségi állapot • rendellenességtől mentes Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

9. Állatok előkészítése a tesztre A halakat 12-15 nappal a vizsgálat megkezdése előtt be kell szerezni. A teszt előtt legalább 7 napig a teszthez használt minőségű vízben kell tartani. Bármilyen zavaró tényezőt, ami megváltoztathatja a halak viselkedését,meg kell szüntetni. Használhatunk ivóvizet ( ha szükséges klórmentes), jó minőségű természetes vizet vagy művizet. A vízkeménységnek 50-250 CaCO3 mg/ liter között kell leni, pH esetében 6,0-8,5 közötti érték ajánlott. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

10. Előkészítés körülményei • fény: 12-16 óra naponta  • hőmérséklet: az adott fajnak megfelelő   • oxigén koncentráció: legalább a levegő telítettségi értékének a 80%-a  • etetés: naponta egyszer  • halálozás: • több, mint 10%: a teljes tétel elutasítása • 5 és 10% közötti: akklimatizációt folytatni kell még hét napig • kevesebb, mint 5%: tétel elfogadása Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

11. Teszt típusok Fél-statikus vizsgálat (semi-static test): az oldat áramlása nélküli vizsgálat. A vizsgálat során a hosszabb időszakok (pl.: 24 óra) után ki kell cserélni az oldatokat. Átfolyásos vizsgálat (flow-through test): A vizsgálat során a vizet folyamatosan cseréljük a vizsgálati kamrákban. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

12. Teszthez használt berendezések Fontosabb eszközök: • hőmérséklet mérő • pH mérő • oxigén-koncentráció mérő • vízkeménység meghatározására szolgáló berendezés • megfelelő készülék a hőmérséklet szabályozásához A berendezések és a használt eszközök kémiailag semleges anyagból készülnek. A teszt során a pH-t, oldott oxigént és a hőmérséklet legalább hetente kétszer kell mérni. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

13. Hígítási sor készítése Megfelelő töménységű törzsoldat készítünk. Ebből hígítással elkészítjük a méréshez szükséges koncentrációkat. Vízben rosszul oldódó vegyi anyag esetén az oldódást segíthetjük mechanikai diszperzióval, szerves oldószerrel, emulgeálószerrel vagy diszpergálószerrel. A segédanyagok koncentrációja a vizsgálati oldatban nem haladhatja meg a 100 mg/l-t. Bármilyen segédanyag használata esetén, a kontroll halakat is ki kell tenni a segédanyag ugyanolyan koncentrációjának, mint amelyet a vizsgálati sorozatokban alkalmaztunk. A vizsgálatok során nem szüksége a pH-érték beállítása. Azonban ha bizonyítani lehet, hogy a pH-nak jelentős hatása van a teszt eredményére, akkor ajánlatos a pH beállítása után megismételni a mérést. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

14. Teszt körülmények • időtartam: 14 nap (növelhető 1-2 héttel) • kapacitás: • fél-statikus vizsgálatok maximális terhelés 1,0 g hal / liter • átfolyásos rendszer esetében magasabb terhelés is elfogadható • állatok száma: legalább 10   • etetés: • naponta többször: (a takarmánygabona mennyisége nem haladhatja meg a halak által azonnal elfogyasztott mennyiséget) • naponta: állandó mennyiséggel • tisztítás: • átfolyásos vizsgálatot: tartály belső felületét legalább hetente kétszer • fél-statikus vizsgálat: a vizsgálati tartály cseréje meghatározott időközönként Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

15. Teszt körülmények (2) • víz: használhatunk ivóvizet ( ha szükséges klórmentes), jó minőségű természetes vizet vagy kezelt vizet. A vízkeménység 50-250 CaCO3 mg/ liter között, pH 6,0-8,5 között ajánlott. A hígításhoz analitikai tisztaságú ionmentes vagy desztillált vizet kell használni, aminek a vezetőképessége maximum 10 μS/cm. • fény: napi 12-16 óra   • hőmérséklet: az adott fajnak megfelelő állandó hőmérséklet ± 2 ° C  • oxigén koncentráció: legalább a levegő telítettségi értékének a 60%-a  Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

16. Vizsgálat érvényességének feltételei: A kontrollcsoportban a halálozás nem haladhatja meg a 10%-t a vizsgálat végéig. Állandó feltételeket kell biztosítani a vizsgálat végéig. Bizonyíték kell, hogy a vegyi anyag koncentrációja kielégítően fenntartható a vizsgálat végéig. A vegyi anyag koncentrációja a kezdeti koncentráció 80%-án belüli értéken kell tartani. Az oldott oxigén koncentrációja nagyobbnak kell lenni, mint a levegőtelítettségi érték 60%-a. Fél-statikus teszt esetében lehet levegőztetést is alkalmazni, ha ez nem befolyásolja a teszt eredményét. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

17. Megfigyelések Megfigyelt adatok: • pusztulás: a hal élettelen, ha érintésre nem reagál (naponta ellenőrizni kell) • egyéb elváltozások: • méretbeli elváltozás (tömeg, méret) • eltérő úszó mozgás • eltérő válaszreakció a külső ingerekre • táplálékfelvétel csökkenése/megszűnése Vizsgálat kezdete előtt fel kell jegyezni a halak méretét és tömegét. A teszt befejezésekor kell mérni a túlélők hosszát és tömegét, a mérés során nem szükséges. Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

18. Kiértékelés Vizsgálat során feljegyzésre kerülő adatok: • halált vagy egyéb hatást okozó koncentrációk grafikus ábrázolása az idő függvényében • halak viselkedés változása • vizsgálat során bekövetkezett események, amik befolyásolhatják az eredményt • bármilyen eltérés az vizsgálati útmutatótól Kiértékelés: NOEC (No Observed Effects Concentration): az a legnagyobb vegyianyag koncentráció, amelynek még nincs megfigyelhető hatása egy élőlény (tesztorganizmus) hosszú távú kitettsége esetén Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

19. Köszönöm a figyelmet!

20. Irodalomjegyzék • http://puck.sourceoecd.org/vl=2443331/cl=13/nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/1607310x/v1n2/s5/p1 • http://oberon.sourceoecd.org/vl=19145829/cl=19/nw=1/rpsv/ij/oecdjournals/1607310x/v1n2/s4/p1 Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt

21. Képek hivatkozásai: • http://www.aquarium-fish.info/speciesProfile/Brachydanio/rerio • http://www.florida-bass-fishing.com/cart-fish%20drunk.gif • http://dragon.unideb.hu/~kltegimn/kepek/tanar/bio/hal.gif • http://blog.glennz.com/wp-content/uploads/2008/05/endangered_species.jpg • http://www.haziallat.hu/egyedi-esetek/hal-izu-viz-cicaknak-/1754/1/hal-izu-viz-cicaknak-_1.jpg • http://www.nwkniterati.com/movabletype/archives/MossyCottage/fish.gif • http://www.mblaquaculture.com/assets/images/content/photo_Pimephales_promelas_Fathead_minnow_510px.jpg • http://www.naturephoto-cz.eu/pic/ceteri/cyprinus-carpio-20524.jpg • http://www.fbas.co.uk/Oryzias%20latipes%20%28female%29.jpg • http://www.vustah.cz/en/laboratories/zlatelab/images/poecilia_reticulata.jpg Hal, prolongált 14 napos toxicitási teszt