1 / 19

Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce

Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce. Jan Hrach, Veronika Mašková. Osnova. Teoretický úvod Proteiny Krystalizace Difrakce Vlastní práce Závěr. Proteiny. s ložené z aminokyselin základ živých organismů funkce zásobní k atalytická (enzymy) r egulační (hormony)

mizell
Download Presentation

Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce Jan Hrach, Veronika Mašková

  2. Osnova • Teoretický úvod • Proteiny • Krystalizace • Difrakce • Vlastní práce • Závěr

  3. Proteiny • složené z aminokyselin • základ živých organismů • funkce • zásobní • katalytická (enzymy) • regulační (hormony) • obranná • transportní (hemoglobin) • stavební • 1967 vyřešena první struktura enzymu lysozym

  4. Krystalizace • difuzní metody • metoda visící kapky • metoda sedící kapky • v krystalizační kapce je menší koncentrace roztoku než v rezervoáru  difúze par z kapky do rezervoáru  růst koncentrace roztoku v kapce A – krycí víčko B – krystalizační kapka C – rezervoár D – matečný roztok

  5.  Růst krystalu

  6.  potvrzení krystalu proteinu • metody • destruktivní • absorpce barviva • dehydratace • drcení • nedestruktivní • polarizace • fluorescence pod UV zářením • rentgenová difrakce

  7. Difrakce j k w Difraktometr na FZÚ AV v Cukrovarnické ulici

  8. Vlastní práce Cíle • krystalizace proteinu • sběr difrakčních dat • řešení struktury proteinu

  9. 1. Krystalizace lysozym c = 120 mg/ml NaCl c = 1M octan sodný c = 0,1M polzethylen glykol 30%

  10. Fázový diagram

  11. protein 120 mg/ml 90 mg/ml 60 mg/ml 30 mg/ml 10 mg/ml 0,2M 0,5M NaCl 0,1M 1M 2M 3,6M

  12. Potvrzení krystalu proteinu

  13. Lovení a mražení krystalů velikost smyčky: 400 μm

  14. 2. Difrakce

  15. Difrakční snímek více krystalů

  16. 3. Vyřešená struktura proteinu

  17. Závěr • Vypěstovali jsme krystaly proteinu a ověřili fázový diagram. • Nasbírali jsme soubor difrakčních dat • Vyřešili jsme strukturu lysozymu

  18. Poděkování • Ing. Monika Kučeráková (FÚ AV ČR) • Ing. Jan Stránský (ÚMCH) • Leona Švecová (KIPL FJFI) • organizátoři Týdne vědy

  19. Děkujeme za pozornost!

More Related