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Resultados Inducción y Restricción Equipo 3

Bioquímica Experimental Grupo 1. Resultados Inducción y Restricción Equipo 3. Inducción. Recordando…. Recordando…. La proteína tiene un peso molecular aproximado de: 32 kDa si tiene el péptido señal de la proteína ompA 29 kDa sin péptido señal. Lo que esperabamos ….

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Resultados Inducción y Restricción Equipo 3

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Presentation Transcript

  1. Bioquímica Experimental Grupo 1 Resultados Inducción y Restricción Equipo 3

  2. Inducción

  3. Recordando….

  4. Recordando…. • La proteína tiene un peso molecular aproximado de: • 32 kDa si tiene el péptido señal de la proteína ompA • 29 kDa sin péptido señal.

  5. Lo que esperabamos…. 1. Aumento gradual en la intensidad de la banda de la proteína expresada dado que cada mesa utilizó diferentes concentraciones de inductor. 2. La concentración de proteína expresada será mayor conforme aumenta el tiempo trascurrido después de la inducción con el IPTG.

  6. Lo que esperabamos…. 3. Las bandas pertenecientes a las proteínas de las células también se verán más intensas debido al crecimiento celular, sin embargo no serán tan intensas como la de la proteína inducida.

  7. Lo que esperábamos…. Tiempo de inducción 0 0.5 1.0 1.5 Std Teñido con la solución de Coomasie 0.12% azul de coomasie R250 50% Metanol 10% ácido acético Desteñido con: 45% Metanol 10% ácido acético

  8. Lo que obtuvimos…. Equipo 1 y 2 Equipo 3 y 4

  9. Lo que obtuvimos…. Equipo 5 y 6 Equipo 7

  10. Que observamos.. A pesar de que se utilizaron 3 concentraciones distintas de inductor las bandas señaladas con la flecha aparentan tener la misma intensidad lo que indicaría que se obtuvieron cantidades iguales de proteína inducida. Se obtuvo, de acuerdo con el estándar, la proteína en un peso molecular cercano al esperado.

  11. Restricción de plásmido Pet-TEM

  12. Pásmido + inserto1 Pásmido + inserto2 Marcador de PM Plásmido Inserto 1 Inserto 2

  13. Recordando… 66500 pb 5310 pb

  14. Estándar de peso molecular

  15. 1 2 3 4 5 6 Gel de muestra Topoisomero alto peso molecular Vector recombinante linearizado 1 Std 2 Sin restringir 3 BamHI 4 BamHI+NdeI 5 NdeI(30 min)+ BamHI (OVN) 6 NdeI (OVN) OVN toda la noche Vector vacío Banda inserto RNA y/o proteínas de bajo peso

  16. Resultados 1 2 3 4 • 1. Plasmido sin restringir • 2. restringido con una enzima • 3. restringido con las dos enzimas • 4. estándar Plásmido sin restringir ADN restringido con una enzima Bandas esperadas RNA y/o proteínas de bajo peso

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