BACTERIOLOGY

1. BACTERIOLOGY باکتریولوژی

2. باکتریولوژیBACTERIOLOGY 1a. با درنظر داشت اهمیت کلینکی، طرزالعمل ها درباره انتقال نمونه های باکتریولوژیک و جمع آوری آنها بطور قدم به قدم با دقت حداقل 70% مشخص گردد. قوانین عمومی درباره تجمع نمونه (1) (2) انواع نمونه ها (3) انتقال نمونه 1a. Considering the clinical significance, determine step-by-step procedures about bacteriological specimen shipment and specimen collection procedures with a minimum of 70% accuracy. (1) General Rules for Specimen Collection (2) Types of Specimens (3) Specimen Shipment

3. BACTERIOLOGY 1b.. با در نظر داشت اهمیت کلینیکی ، طرزالعمل های که برای نشو ونمو وشناسائی کشت هوازی ها، میکروفلیک ها وغیر هوازی ها ضرورت اند، با دقت حد اقل 70 فیصد مشخص گردد. (1)آشنائی با کشت (2) ضروریا ت تغذی و محیطی (3) تلقیج نمونه ها (4) چک نمودن پلیت جهت تجدید (5) مشاهده مکروسکوپیک 1b. Consider the clinical significance, determine step-by-step procedures necessary for the growth and identification of aerobic, microaerophilic, and anaerobic cultures with a minimum of 70% accuracy. (1) Introduction to Culturing (2) Nutritional and Environmental Requirements (3) Inoculation of Specimens (4) Check Plate for Isolation (5) Macroscopic Observation

4. قوانین عمومی برای جمع آوری نمونه ها General Rules for Specimen Collection • وسایل محافظوی شخصی و تدابیر احتیاطی معیاری • جمع آوری نمونه قبل از شروع تداوی با انتی بیوتیک ها. • اخذ نمونه از ساحه انتان • استعمال قطی های معقم و کلچر • متیقن باشید تا نمونه به اندازه کافی اخذ شده باشد. • ممکن خلاصه تاریخچه ضرورت باشد • PPE and standard precautions • Collect before antimicrobial treatment (antibiotics) begins • Collect from site of infection • Use sterile container and culture ASAP • Ensure adequate specimen is collected • Brief clinical history may be needed

5. انواع نمونه Types of Specimens • کشت خون تعقیم، تعقیم، تعقیم • پاکاری با الکول 70 فیصد و ترکیبات آیودین • قبل ازشروع تداوی با انتی بیوتیک • جمع آوری در فواصل زمانی • تعقیب طرزالعمل های تدریسی • BLOOD CULTURES • Sterility, Sterility, Sterility • Cleanse with 70% alcohol AND an iodine compound • Before antibiotic treatment begins • Collected at timed intervals • Follow operating instructions procedures (OI)

6. کشت مواد غایطه یا معقدیStool or Rectal Cultures • موادغایطه • مریض مواد غایطه خود را دریک قطی پاک، منفذ دار وسرپوش دار جمع آوری نماید. • نمونه گرفته شده باید با آب، ادرار، یا مواد اجنبی ملوث نگردد. • هرگاه نمونه را دفعتاً معاینه نمیکردید، آنرا در یک محل خاص محافظه نماید • کلچر های معقدی • معمولا نمونه باید توسط سوب اخذ گردد • Stool • Patient collects in a clean, porous container with lid • Not contaminated with water, urine, or foreign material • Place in preservative if not examined immediately • Rectal Cultures • Usually collected by provider on swabs

7. نمونه های ادرارUrine Specimens • قطی معقم • اخذ نمونه از قسمت وسطی جریا ن ادرار و از ادرار صبح ترجیح داده میشود. • نمونه توسط کتیتر • با داخل نمودن تیوب در مثانه اخذ گردد. • نباید با فلورای نارمل معقم گردد. • Sterile container • Clean Catch Mid Stream (CCMS) specimen is preferred and collected first thing in the morning • Catheter specimen • Tube inserted into the bladder • Should be sterile with no normal flora

8. ادامه اخذ نمونه ادرارUrine specimens Cont. • اخذ نمونه از ناحیه فوق عانه • با داخل نمودن سوزن به مثانه صورت میگیرد. • معقم باشد. • اخذ نمونه های ادراربشکل غیرمنظم • غیرمعقم است • به مقادیر زیاد سبب ملوث شدن قلورای نارمل میشود • خط گذاری جهت شمارش هرچی زردتر کالونی اجرا گردد • Suprapubic Specimen • A needle is inserted into the bladder • Considered sterile • Random urine specimens • Not sterile • Usually not cultured • Large amounts of contaminating normal flora • Streak for colony count ASAP

9. نمونه های طرق تناسلیGenital Tract Specimens • Usually collected on a urethral swab • Normally requires special media • Should be cultured ASAP • معمولا با سواب های احلیلی گرفته میشود • بطور نارمل به وسط خاص ضرورت است • هرچی زودتر باید کشت شود.

10. اخذ نمونه از طرق تنفسیRespiratory Tract Specimens • اخذ نمونه از گلو • درهنگام اخذ این نوع نمونه جلوگیری شود تا نمونه از دندانها، زبان، و کومه ها گرفته نشود • سواب های انفی بلعومی • عبارت از یک سیم نازک همراه پنبه درنهایت بوده که مستقیماً درمنخرهای انف داخل میشود. • تقشع • ظرف که دارای دهنه کلان بوده و معقم باشد • تقشع ازنواحی عمیق قسمت های پائنتر ریه ها اخذ گردد • موجودیت حجرات سفید خون را به تلوین تائید نماید • اول اخذ نمونه ها درصبح ترجیح داده میشود. • Throat specimens • Avoid teeth, tongue, and cheeks • Nasopharyngeal (NP) swab • Thin wire with cotton tip inserted through the nostrils • Sputum • Sterile wide mouth jar • From deep in the lower lungs (not spit) • Confirm with stain for WBCs • First morning specimen is preferred

11. به ادامه سلاید نمونه های طرق تنفسیRespiratory tract Specimens Cont. • شستشوی قصبی • اسپیریشن جنجروی یا شزنی • بیوپسی ریه • بسیار مهم است تا بطوردرست پروسیس گردد • تکرار نمونه ها به معنی تکرار عملیه جراحی • Bronchial washings • Translaryngeal/transtracheal aspirations • Lung biopsy • Very important to process correctly • Repeat specimens mean repeat surgery

12. مایع دماغی شوکی CSFCerebrospinal Fluid (CSF) • نمونه درسه تیوب توسط داکتر گرفته میشود • نمونه جهت معاینات میکروسکوپیک درتیوب #1انداخته میشود. • فلورای نارمل که کمتر ملوث اند درتیوب نمبریک گرفته میشود. • سنترفیوج جهت حصول ترسب • نگهداری سوپرنتانت برای سیرولوژی یا دیگر بخش های لابراتور • کشت نمودن در وسط زرعیه به طور آنی • Three tubes collected by Doctor • Micro gets tube #2 • There is less contaminating skin flora than in Tube #1 • Centrifuge to obtain sediment • Keep supernatant for serology or other lab sections • Culture on media immediately

13. اخذ نمونه ها از جرحه و اکزوداتWound Specimens andExudates • انتقال نمونه به لابراتوار • توسط یک سواب • درپلیت های وسط زرعیه • یا در یک تیوب معقم • معمولا کشت میگیردد بطور • هوازی ها وغیرهوازی ها • که مربوط به محل و عمق جرحه میباشد. • Transported to the lab • On a swab • On media plates • Or in a sterile tube • Usually cultured • Aerobically And Anaerobically • Depending on wound site and depth

14. نمونه های گوناگونMiscellaneous Specimens • نمونه های جراحی و اوتوپسی • نمونه های جراحی عیننا مانند کلچر های جروحات تهيه میشود. • نمونه های اوتوپسی دارای پرابلم اند • غیر معقم اند • بسیار ملوث اند • نمونه ها از چشم، گوش، جيب ها،دندانها • توسط سواب ها گرفته شود • كشت آن به اساس طرزالعمل هاي تدريسي صورت گیرد • Surgery/Autopsy Specimens • Surgery specimens processed the same as wounds cultures • Autopsy specimens are a problem • Not sterile • Many contaminates • Eye, Ear, Sinus, Teeth • Collected on swabs • Culture according to OIs

15. انتقال نمونهSpecimen Shipment • ميتود های انتقال • نظامي • توسط شخص يا امبولانس • ملكي • توسط شخص- انتقال محلي • توسط پوست ايالات متحده،FedEx يا UPS • Methods of Transport • Military • Courier or Ambulance • Public • Courier – local delivery • U.S. Mail, FedEx, or UPS

16. نمونه هاي باكتريولوژيكBacteriological Specimens • نمونه هاي واقعي • كشت – دروسط زرعيه جامد يا بروت(و • وسط زرعيه انتقالي – كري بلير براي كشت مواد غايطه • قطي ها همراه با نمونه ها بايد مهرگردد. • واكس يا پارا فلم (para film) براي بسته يا مهرنمودن تيوب هاي سرپوش دار استفاده ميشود. • Actual specimen • Transport media – Cary-Blair for Stool cultures • Containers with specimens must be sealed • Wax or Para film are used to seal screw-capped tubes

17. طرزالعمل ها براي انتقالShipment Procedures • اكثراً اشتباهات درانتقال نمونه ها ي اتفاق ميافتد كه نمونه داراي مشخصه مناسب نباشد. • اخذ مجموع از نمونه هاي لابراتوري و ضروريات براي انتقال آنها • بسته بندي بايد شامل موارد ذيل باشد • مواد جاذب • يخ خشك يا مرطوب • قطی مقاوم درمقابل لیک شدن • کتاب ثبت و پیگردی • مقاوم بودن قسمت خارجی قطی محفظه ها • انتقال درست و لیبل گذاری از نظر خطرات بیولوژیکی • Most errors occur in shipping specimens without proper identification • Receiving lab sets specimen collection and shipping requirements • Packaging must include • Absorbent material • Wet or Dry Ice • Leak proof container • Tracking log • Sturdy outer container • Proper shipping and Biohazard labels

18. باكتريولوژيBACTERIOLOGY 1b. با درنظر داشت اهميت كلينكي، طرزالعمل هاي که براي نشو ونمو و شناسائی كلچر هوازي ها، ميكروهيروفيلك و غيرهوازي ها ضرورت اند بطور قدم به قدم با دقت 70% مشخص گردد. 1b. Consider the clinical significance, determine step-by-step procedures necessary for the growth and indentification of aerobic, microaerophilic, and anaerobic cultures with a minimum of 70% accuracy.

19. آشنائي با كشت نمودنIntroduction To Culturing • اهداف كشت يا كلچر • اماده گي براي كشت هاي ابتدائي • حصول كالوني هاي تجديد شده • انكشاف زرع خالص • مفاد كشت • تشخيص • تست نمودن بطور معقم • تست انتي بيوتيك • Goals of culturing • Prepare primary cultures • Obtain isolated colonies • Grow pure cultures • Purpose of culturing • Identification • Sterility testing • Antibiotic testing

20. اصطلاحات وتعريف هاTerms and Definitions • كشت – عبارت از نشو ونماي باكتري ها دريك وسط مغذي است. • Inoculation- انتقال نمونه مريض توسط وسط میباشد • كولوني- عبارت از نشو ونموي باكتري دريك كتله قابل ديد ميباشد. • وسط- عبارت از موادي است كه براي نشو ونموي باكتري ها بكارميرود. كه بشكل جامد، نيمه جامد وبروت ميباشد. • Culturing – growing bacteria on nutrient media • Inoculation – transfer of patient specimen onto media • Colony – Growth of a single bacterium into a visible mass • Media – substances used to grow bacteria. Solid, Semi-solid, or Broth

21. به ادامه سلاید اصطلاحاتTerms Cont. • کلچریا کشت ابتدائی – کلچری است که بطور مستقیم از نمونه کلینیکی در وسط زرعیه به طور مستقیم کشت میشود. • وسط تلقیحی ابتدائی: اوساط اساسی اند که برای تهیه کلچر ابتدائی استفاده میشود. • کلچر فرعی – هرکلچر که ازکلچر قبلی تهیه شده • کالونی های تجدید شده و نشو و نمای خالص را سبب میشود • نشو و نمو را افزایش میدهد. • کلچر خالص- فقط سبب نشو ونمو یک نوع باکتری میشود • کلچر مختلط – سبب نشو و نموی بیشتر از یک نوع باکتری میشود. • Primary culture – cultured directly from the clinical specimen onto the media • Primary inoculation media – initial media used to make the primary culture • Subculture – any culture made from a previous culture • Obtain isolated colonies and pure growth • Obtain increased growth • Pure culture – only one species of bacteria growing • Mixed culture – more than one species of bacteria growing

22. ضروریات محیطی وتغذیNutritional and Environmental Requirements • کاربن • اوتوتروف ها • – مرکبات ساده را مورد استفاده قرار میدهد مانند کاربن دای اکساید برای منابع کاربن • هیتروتروف ها • - مرکبات مغلق را مورد استفاده قرارمیدهد مانند کاربوهایدریت ها برای منابع کاربن ها. • Carbon • Autotrophs • – use simple compounds such as CO2 for carbon sources • Heterotrophs • - Use complex compounds such as carbohydrates for carbon sources CO2

23. ضروریات محیطی وتغذی Nutritional and Environmental Requirements اوکسیجن • هوازی – اوکسیجن در اتموسفیر به اندازه نارمل موجود است • میکروفیلیک – اوکسیجن نسبت به حالت نارمل به مقدارکاهش یافته میباشد. “ کاهش فشار اوکسیجن“ • انکوبیتورمیکروفیلک – کاربن دای اکساید را به جای اوکسیجن بیجا شده پمپ نموده تا زمانیکه فشار کاربن دای اکساید 20% گردد. Oxygen • Aerobic – Oxygen is present in normal atmospheric amounts • Microaerophilic – Oxygen is present in reduced amounts. “reduced oxygen tension” • Microaerophilic incubator – CO2 pumped in to displace O2until 20% CO2 tension is achieved

24. ادامه سلاید میکروهیروفیلکMicroaerophilic Cont. • مرتبان شمع دار- زمانی استفاده میشود که انکوبیتور موجود نباشد. • گاز نمدار درقسمت تحتانی مرتبان بخاطر رطوب گذاشته شود. • یک شمع روشن شده درقسمت فوقانی کلچرها گذاشته میشود • سرمرتبان توسط سرپوش آن بسته شده ودریک انکوبیتورعادی گذاشته شود. • قسمیکه شمع برای یک مدت طولانی میسوزد اما تمام اوکسیجن در داخل مرتبان شرایط میکروهیروفیلیک را به وجود نمیاورد. • Candle Jar - used if no microaerophilic incubator is available • Damp gauze placed in bottom of jar for moisture • Cultures are stacked on top of the gauze • A lit candle is placed on top of the cultures • The lid is sealed and the jar is placed in a regular incubator • As the candle burns it will use most, but not all, of the oxygen inside the jar creating the microaerophilic conditions

25. ادامه سلاید میکروهیروفیلکMicroaerophilic Cont. • تخنیک کت ستریک • فقط برای کلچر گلو استفاده میشود • سواب مریض برای تلقیح نمودن Blood agar plate استفاده ميشود. • بعد از استريكنگ يا نوار گذاري جهت تجديد، لوپ درداخل وسط درچندين ساحه آن جهت تلقيح شديد فشرده ميشود. • Cutting the media forces some bacteria into the media • ارگانیزم های که در قسمت کت یا خط موجود است به اکسیجن کمترنسبت به آنهای که در سطح قراردارند، معروض اند • Cut Streak technique • For throat cultures only • Patient Swab is used to inoculate Blood Agar Plate (BAP) • After streaking for isolation, the loop is pressed into the media in several areas of the heavy inoculum • Cutting the media forces some bacteria into the media • Organisms within the cuts will be subject to less oxygen than on the surface

26. ادامه سلاید میکروهیروفیلیکMicroaerophilic Cont. • ادامه کت ستریک • گروپ A استرپتوکوک بیتا، که آفات استرپتوک گلو را سبب میشود، باعث تولید هیمولیزین غیرثابت میشود. • میتود کت استریک هیمولیز غیرثابت اوکسیجنی را نشان داده و درمشخص نمودن انتانات گروپ A بیتا سترپتوکوک کمک مینماید. • باکتری درسطح وسط زرعیه بیتا هیمولایز ضعیف را نشان میدهد وآنهائی که درکت ستریک نشوونما نموده بیتا هیمولایز واضح تر را نشان خواهد داد. • Cut Streak Cont. • Beta Strep Group A, (BSGA), which causes Strep Throat, produces oxygen labile hemolysins • The cut streak method will demonstrate this oxygen labile hemolysis and aid in the identification of BSGA • Bacteria on the media surface will show weak Beta hemolysis and those growing in the cut streaks will show more definite Beta hemolysis

27. غیرهوازی ها Anaerobic • عدم موجودیت اوکسیجن • محیط خاص • 85 فیصد نایتروجن، 10 فیصد هایدروجن، 5 فیصد کاربن دای اکساید • میتود ها • انکوبیتور غیرهوازی ها/ بکس دست کش ها • بالون گاز • انکوبیتورهای غیرهوازی • استرپ های ریزارین یا میتلین بلو برای موجودیت اوکسیجن استفاده میشود. • رنگ گلابی یا آبی = موجودیت اوکسیجن • رنگ سفید = عدم موجودیت اوکسیجن • The absence of oxygen • Typical environment • 85% nitrogen, 10% hydrogen, 5% carbon dioxide • Methods • Anaerobic incubator/glove box • Gas pack • Anaerobic indicators • Resazurin or Methylene blue strips are used to indicate the presence of oxygen • Pink or Blue = oxygen • White = no oxygen oxygen

28. ادامه سلاید ضروریا ت اوکسیجنOxygen Requirements Cont. • اجباری • باکتری فقط دریک شرایط اتموسفیری نشو ونما می نماید(بطور مثال غیرهوازی های اجباری تنها درشرایط خاص فقدان اوکسیجن نشوونما مینمایند) • اختیاری • باکتری توانائی آن را دارا اند تا در شرایط مختلفه اتموسفیری تطابق نمایند( مثلا غیر هوازی های اختیاری درشرایط غیرهوازی یا میکروهیروفیلک نشو ونما مینمایند) • Obligate • Bacteria will only grow in one atmospheric condition (i.e., obligate anaerobes will only grow in the strict absence of oxygen) • Facultative • Bacteria have the ability to adapt to different atmospheric conditions (i.e., Facultative anaerobes will grow in anaerobic, or microaerophilic conditions)

29. Temperature درجه حرارت • اکثر باکتری ها بین 0 – 65درجه حرارت نشوونما مینمایند. • اکثر پتوجن های انسان بین35-37 درجه حرارت را ترجیح میدهند • Psychrophilic(سایکروفیلیک) • (دوست دارنده سردی) باکتری های اند که 0- 20 درجه سانتی گیرد را ترجیح میدهند • Mesophilic میزوفیلیک • آن باکتری های که 25 – 45 درجه حرارت را ترجیح میدهند. • Thermophilicترموفیلیک • آن باکتری های که 45-65 درجه حرارت را ترجیح میدهند. • Most bacteria will grow between 0-65° C • Most human pathogens prefer 35-37° C • Psychrophilic • (cold loving) bacteria which prefer a temperature between 0-20° C • Mesophilic • Bacteria which prefer a range of 20-45° C • Thermophilic • Bacteria which prefer a range of 45-65° C

30. pH I like pH = 7.0 • فعالیت های انزایمی باکتری ها توسط PH کنترول واداره میشود. • PH مناسب برای نشوونمای باکتری ها دروسط زرعیه مهم است. • اکثر باکتری ها PH 6.0-8.0 را ترجیح میدهند • Within bacteria enzymatic activity is controlled and governed by pH • Proper pH levels are crucial to the growth of bacteria on our culture media • Most bacteria prefer a pH range of 6.0-8.0

31. رطوبتMoisture • ازمحیط بوجود میاید • یک کتلست برای عکس العمل های بیوشمی و انزایمی میباشد • منحیث محلل برای غذا میباشد • ناقل برای برطرف نمودن مواد اضافی از کالونی ها میباشد • Taken from the environment • Catalyst for biochemical and enzymatic reactions • Used as a solvent for food • Carries waste away from the colony • زمان • اکثر کلچر های عادی از طرف شب برای مدت (18-24) نگهداری میشود. • این باید زمینه را برای نشوونمای کافی در روند آشنائی مساعد میسازد. • Time • Most routine cultures are incubated overnight (18-24) • This will yield enough growth for the identification process

32. نمونه هاي تلقيحيInoculation of Specimens • تلقيح – عبارت ازانتقال نمونه فزيكي از يك منبع به منبع ديگر ميباشد تا كشت دروسط زرعيه شروع گردد. • نوار براي تجديد • عبارت از هنر جدا سازي و رقيق نمود ن ارگانيزم ها از يك جمعيت مخلوط در يك وسط جامد ميباشد. • هرگاه نوار گذاري(Streaking) بطور درست اجرأ گردد، كالوني هاي انفرادي بطور مكمل ازيك ديگر جدا ميشوند. • Inoculation – physically placing organisms from one source to another to start a culture on media • Streaking for isolation • The art of separating and diluting organisms from a mixed population across a solid media plate • If done correctly individual colonies will be completely separated from one another

33. طرزالعمل Procedure • Inoculation • Use aseptic techniques • Check plate for excess moisture which can cause swarming overgrowth • Label around the bottom edge of the plate • Use a swab (specimen or cotton tipped swab) to inoculate one fourth of the plate • Use a back and forth rolling motion • تلقيح • تخنيك هاي اسپتيك بكار ميرود • چك نمودن صفحه يا ساحه براي موجوديت رطوبت بيشتر كه ميتواند سبب نشوونموي بيشتر گردد. • ليبل گذاري صفحه(پليت) درقسمت كناره تحتاني آن. • استفاده از يك سواب ( نمونه يا سواب پنبه دار) جهت تلقيح نمودن يك برچارم پليت. • استفاده از حركت هاي جنبشي بطور دورئي

34. به ادامه سلايد طرزالعملProcedure Cont. • اطمينان حاصل گردد كه تلقيح به طورمكمل اجرا شده و تمام سواب مورد استفاده قرار گرفته است • لوپ را سوختانده، گذاشته شود تا سرد شود،يا از لوپ يك بارمصرف استفاده گردد، كناره تلقيح ابتدائي لمس گردد و بعد 5 الی 6 بار کش نمایید • دوباره دیگر نیز سه صفحه را همراه با تلقیح ابتدایی تکرار کرده • Ensure initial inoculum is completely covered and the entire swab was used • Incinerate a loop, let cool, or use a disposable loop, touch the corner of initial inoculum and drag it back and forth 5 or 6 times across the next on forth of the plate • Repeat twice more creating three planes plus the initial inoculum • Finish with a fishtail towards the center

35. كشت فرعيSub-culturing • يك لوپ فرعي براي دريافت كالوني هاي تجديد شده استفاده ميشود. • يك سواب ممكن مطابق وسط استعمال گردد تا تلقيح آن صورت گيرد. • جهت اجراي طرزالعمل هاي تجديدي با استفاده از نواريا خطوط ، كالوني ها نواربندي گردد. • ازملوثيت آن توسط كالوني هاي ديگر جلوگيري گردد. • هدف اينست كه زمينه براي نشو ونماي بيشتر يك كلچر خالص فراهم گردد • A sterile loop is used to pick up an isolated colony • A stab or swab may be used depending on media to be inoculated • Streak colony out on media using the streak for isolation procedure • Avoid contamination from other colonies • The goal is to obtain increased growth of a pure culture

36. ميتود قطع نوار( كت استريك)Cut Streak method • Provides microaerophilic conditions in an aerobic environment • Performed on throat cultures plated on BAP • Demonstrates the presence of oxygen labile hemolysins produced by BSGA • ايجاد شرايط ميكروفيليك دريك محيط غيرهوازي • اجراي كلچر گلو در Blood Agar Plate • نشان دادن هيمولايزين هاي اوكسيجن دار ناثابت كه توسط گروپ A استرپتوكوك بيتا ايجاد ميشود.

37. شمارش كالوني ها درنوار يا استريكColony Count Streak • نمونه از قسمت وسطي جريان ادرار صبحانه گرفته ميشود • بايد ادراركه درجريا ن يك ساعت جمع آوري گرديده يا دريخچال نگهداري ميشود، اجرا ميگردد. • از لوپ های درجه دار معین كه يك كالوني را دريك هزار ملي ليتر ( 1/1000ml) انتقال ميدهد استفاده ميشود. • اين لوپ يك كالوني كه مساوي به يك هزار حجرات باكتريائي دريك ملي ليتر ادرار است استفاده ميشود. • مثال 50 كالوني = 50000 باكتري دريك ملي ليتر • Performed on clean catch mid-stream urine specimens (CCMS) first morning specimen • Must be performed within one hour of collection or refrigerated • A calibrated loop is used which delivers 1/1000ml • The loop allows for a correlation of one colony = 1,000 bacterial cells per milliliter of urine • Example; 50 colonies = 50,000 bacteria/ml Calibrated to 1/1000ml

38. طرزالعمل شمارش کالونیColony Count procedure • A sterile calibrated loop is dipped in the urine specimen • A single line is inoculated onto the center of the BAP plate • The loop is placed back into the urine and the MAC plate is inoculated as well • Without reheating the loop start at the top of the plate and streak in a back and forth motion down the plate (always streak BAP first) • لوپ درجه دار معقم را در نمونه ادرار مغطوس سازید • یک خط واحد را در مرکز صفحه BAP ترسیم نماید • لوپ را دوباره در ادرار غوطه ور سازید و صفحه MAC را همچنان تلقیح نماید • بدون اینکه لوپ دوباره گرم شود از قسمت فوقانی صفحه شروع نموده خط اندازی را با یک حرکت پس وپیش بردن به طرف پائین ادامه دهید.( همیشه خط اندازی یا ستریک را اول BAP اجرا نماید)

39. Interpretation • نشوونمای هر کالونی نماینده گی ازموجودیت 10000 بکتری فی ملی لیتر در ادرار میکند • < 10000 بکتری فی ملی لیتر ، (< 10 کالونی ها ) از نظر کلینیکی مهم نیست • کوچکترومساوی به 10000 باکتری فی ملی لیتر ، (کوچک ومساوی10 کالونی ها) از نظر کلینیکی مهم است • کوچک و مساوی به 100000 باکتری فی ملی لیتر( <100 کالونی ) دلالت به انتانات طرق بولی میکند( UTI ) • Each colony growing represents 1,000 bacteria per ml of urine • <10,000 bacteria/ml, (<10 colonies), is not clinical significant • > 10,000 bacteria/ml, (> 10 colonies), is clinically significant • > 100,000 bacteria /ml, (> 100 colonies), is indicative of a urinary tract infection (UTI)

40. وسط زرعیهCulture Media • وسط زرعیه – مایع/ غذائی ، جامد یا نیمه جامد. فورمول برای کشت مایکروارگانیزم ها سه کته گوری را دارا اند. • هدف عمومی --- یک ترکیب غنی را دارد. • برای پتوجن های متنوع استفاده گردد • با فکتورهای خاص نشوو نما بیشتر میتواند غنی تر شود Media – fluid/broth, solid, or semi-solid formulation for cultivation of microorganisms; three categories • General purpose – has a rich composition • Used for a variety of pathogens • Can be further enriched with special growth factors

41. مثال های وسط زرعیه که به منظور عمومی بکارمیرودExamples of General Purpose Media • ترای پتیکاز سوی بروت (TSB) • ترای پیتیکاز سوی هگر (TSA) • منحیث اساس یا قاعده برای BAP استفاده میشود • بلت اگر پلیتس(Blood agar plates) • خون 5- 10 فیصد گوسفند را منحیت یک ماده غنی کننده اضافه نماید. • چاکلیت هگرChocolate agar • کرویا ت سرخ لایز شده و ایزو وتل X ماده غنی کننده استند. • انفوژن قلب ومغز(BHI) • میولر هنتون(MH) • Trypticase soy broth (TSB) • Trypticase soy agar (TSA) • Used as a base for Blood agar plates • Blood agar plates (BAP) • 5-10% sheep's blood is added as an enrichment • Chocolate agar (Choc) • Lysed RBCs and Isovitale X are enrichments • Brain-heart infusion (BHI) • Mueller-Hinton (MH)

42. وسط زرعیه انتخابیSelective Media • برای نشو ونموی اورگانیزم های معین استفاده میشود. --- جهت افزایش نشوونموی ارگانیزم های مورد نظر مواد مغذی خاص را دروسط اضافه نماید. --- همچنان با علاوه نمودن مواد، از نشونما بکتری های غیرمتوقع جلوگیری میشود. • Allows only certain organisms to grow • Specific nutrients added to enhance the growth of desired organisms • Substances may also be added to prevent or inhibit the growth of unwanted bacteria

43. مثال های وسط زرعیه انتخابیExamples of Selective Media • وسط زرعیه سلمونیلا شگیلا هگر -- فقط برای این اورگانیزم ها انتخابی میباشد • وسط زرعیه borth گرام منفی -- برای بکتری های گرام منفی استفاده میشود • وسط زرعیه Sabouraud’s agar حاوی دکستروز - برای نشونما دو فامیل فنگسی یعنی yeasts و molts استعمال میشود • وسط زرعیه Lowenstein-Jensen • برای جدا ساختن فامیل مایکوبکتری ها استعمال میشود spp • Salmonella Shigella agar (SS) • Selective for only these organisms • Gram negative broth (GN) • Selective for gram negative bacteria • Sabouraud’s dextrose agar • Used to grow yeasts and molds • Lowenstein-Jensen medium • Used to isolate Mycobacterium spp.

44. وسط زرعیه تفریق پذیریا تفاضلیDifferential Media • به اساس نیازمندی های تغذی و وظایف خاص از هم جدا ساخته شده • مثال -- وسط زرعیه متحرک • این وسط توانائی حرکت اورگانیزم ها را نشان میدهد طوریکه ازخط تلقیح دور میشوند. --- وسط زرعیه Triple sugar iron این وسط زرعیه توانائی وعدم توانائی مایکرواورگانیزم را درتخمر لکتور ، سکروز یا دیکستروز نشان میدهد. • Separates species based on specific actions or nutritional requirements • Examples • Motility agar • Demonstrates the ability of the organism to move away from the line of inoculation • Triple sugar iron (TSI) • Demonstrates ability or inability of an organism to ferment Lactose, Sucrose, or Dextrose

45. ادامه سلاید وسط زرعیه تفاضلیDifferential Media Cont. • وسط زرعیه تایوگلایکولیت غذائی(مایع) - یک وسط زرعیه broth مایع بیشتر انواع باکتری ها را در قسمت نشونما تقویت مینماید. - باکتری ها را به اساس نیازمندی های اکسیجن از هم تفکیک مینماید. • بکتری های هوازی در قسمت نزدیک به ناحیه فوقانی تیوب نشونما میکند • مایکروایروفیلیک بکتری درمرکز تیوب نشونما میکند • بکتری غیرهوازی فقط درقسمت تحتانی تیوب نشونما خواهد کرد • Thioglycollate broth • A liquid broth that supports the growth of many species • Differentiates bacteria based on oxygen requirements • Aerobic bacteria grow near the top of the tube • Microaerophilic bacteria grow in the center of the tube • Anaerobic bacteria will grow only in the bottom of the tube

46. وسط زرعیه تفاضلی/ انتخابیDifferential/Selective Media • وسط زرعیه که هم تفاضلی وهم انتخابی اند • مثال ها • وسط زرعیه مک کون کی اگر • فقط باکتری های گرام منفی نشو ونما مینماید • باکتری ها را به اساس تخمر لکتوز تفکیک مینماید • تخمردهنده های لکتوز- گلابی • تخمردهنده های بدون لکتوز – بدون رنگ • Media that is both differential and selective • Examples • MacConkey agar (MAC) • Grows only gram negative bacilli (Selective) • Differentiates bacteria based on lactose fermentation • Lactose fermentors (LFs) – Pink • Non-lactose fermentors (NLFs) - colorless

47. به ادامه سلاید وسط زرعیه تفاضلی/ انتخابیDifferential/Selective MediaCon. • Eosin methylene blue agar (EMB) • Selectively grows gram negative bacilli • Uses methylene blue dye to differentiate • Lactose fermentors – Blue • Non-lactose fermentors - Colorless • وسط زرعیه ایوزین میتایلین بلو اگر(EMB) • بطور انتخابی برای نشوونمای باکتریا های گرام نگتیف استفاده میشود. • میتایلین بلو جهت تفکیک نمودن استفاده میشود. • تخمر دهنده های لکتوز – آبی • تخمردهنده های غیر لکتوز- بدون رنگ

48. وسط زرعیه که به منظورخاص به کارمیرودSpecial Purpose Media • این اوساط به منظور آزمایش نمودن موجودیت وعدم موجودیت یک انزایم خاص به کار میرود. • اندیکاتور ها ( شاخص ها) رنگ های متفاوت را به اساس تغیرPH نشان میدهند. • سبستریت های استفاده شده انزایم های خاص اند • Tests for the presence/absence of a specific enzyme • Color indicators show distinct colors due to pH changes • Substrates used are enzyme specific

49. به ادامه سلاید وسط زرعیه که به هدف خاص به کارمیرود Special Purpose Cont. • هرگاه یک اورگانیزم باعث تولید یک انزایم خاص گردد، سبسترات منحیث یک منبع غذائی استفاده میشود. • عکس العمل انزایم واسبسترات باعث تغیر PH در وسط که تغیر رنگ را سبب میشود، میگردد. • چندین تست میتواند که بالای این اوساط اجرا گردد زیرا درتشخیص انواع باکتری های خاص کمک کننده است . • If an organism produces a specific enzyme, the substrate will be used as a food source • The enzyme/substrate reaction causes a pH change within the media which causes the color change • Multiple tests can be set up in “panels” or profiles to assist in the identification of specific bacterial species

50. مثال های وسط زرعیه که به هدف خاص بکارمیرودExamples of Special Purpose Media • Phenylalanine deaminase • Detects presence of the enzyme phenylalanine deaminase by turning dark green upon addition of a 10% ferric chloride reagent • Urea • Detects the presence of the enzyme urease which turns the media a hot pink color • Phenylalanine deaminase • با اضافه نمودن فیریک کلوراید ریجنت 10% دروسط وتغیر رنگ آن به شکل سبزتیره نشاندهنده موجودیت انزایم فینال النین است. • Urea • یوریا موجودیت انزایم یوریاز را با تغیر رنگ وسط به یک رنگ گلابی تیز مشخص مینماید.