Le dossier de validation des méthodes

1. Le dossier de validation des méthodes Cas pratiques et pistes de réflexion

2. 1) Présentation de l’analyse • Description de la méthode : • Analyte : • Définir l’élément analysé et son origine Ex: Chromosomes de lymphocytes • Principe : • Description générale de la méthode : Ex: culture cellulaire, obtention de métaphase, marquage… • Mesure : • Description de la technique d’exploitation des résultats : Ex: comptage et analyse des chromosomes. • Marquage CE et codage C.N.Q. : • A définir selon les réactifs utilisés. www.biomnis.com

3. 1) Présentation de l’analyse • Mise en œuvre : • Opérateurs: • Personnes ayant réalisé les tests et analysé les résultats (vérifier les qualifications et habilitations de ces personnes). • Procédures de référence : • Procédure générale de validation (référence et mise à disposition) • Procédure générale de gestion de la portée flexible (référence et mise à disposition) • Période d’évaluation : • Déterminer la période sur laquelle les résultats ont été collectés. • Autorisation et date de mise en service : • A partir de quelle date la méthode a-t-elle été utilisée et qui en a autorisé son utilisation (Vérifier la qualification et l’habilitation à la date désignée). www.biomnis.com

4. 2) Maitrise des risques Ex: condition prédéfinies dans le catalogue d'analyse, mise en place de procédure de vérification à la réception… Définir la nature de l’échantillon, la quantité nécessaire, son conditionnement… Type d’échantillon primaire Prétraitement de l’échantillon Selon les procédures techniques mises en place Formation du personnel à ces procédures (traçabilité de ces formations) Mise en place de procédures pour définir les modalités de formation, d’habilitation et de maintien d’habilitation du personnel Main d’oeuvre Formation du personnel (traçabilité de la démarche) Enumérer les procédures mises en place dans le laboratoire concernant ces points. Conditions ambiantes requises températures de transport, de réalisation technique, etc. www.biomnis.com

5. 2) Maitrise des risques Mise en place de procédures définissant les réactifs utilisés dans la méthode et de procédure expliquant la gestion de ces derniers (contrôle et tests de lots, condition de stockage, etc.) Les réactifs utilisés doivent être conformes à ce qui est annoncé dans les procédures techniques (lot, marquage CE, durée d’utilisation, etc.) Référence du réactif Ce point n’est pas applicable car il n’y a pas d’étalon de référence existant dans le domaine de la cytogénétique _ Matériau de référence Pour chaque point défini, indiquer la procédure à respecter pour maitriser le risque (ex: procédure d’utilisation et d’entretien des hottes, procédure de maintenance des incubateurs, suivi métrologique, etc.) Définir toutes les étapes critiques pour la méthodes et, pour chacune de ces étapes, les équipements entrant en jeu (ex: température d’incubateur, stérilité sous les hottes, identification des lames…) Equipements www.biomnis.com

6. 3) Evaluation des performances de la méthode • Comparaison de méthodes • Méthodes utilisées : Il conviendra de comparer, sur un nombre prédéterminé d’échantillons (Cf. procédure générale de validation des méthodes), les résultats obtenus avec la méthode aux résultats obtenus avec des méthodes dites de références.Les méthodes utilisées peuvent être : • De même nature que la votre mais sur un échantillon d’origine différente. Ex: Résultat de caryotype sur liquide amniotique comparé au résultat de caryotype sur villosité choriale. • De nature différentes mais sur un échantillon de même origine. Ex: Résultats de FISH sur noyaux non cultivés de liquide amniotique comparés aux résultats du caryotype (pour les anomalies de nombre). • Exploitation des résultats La comparaison de méthode devra prouver qu’il y a bien corrélation entre les résultats obtenus à partir de votre méthode et ceux obtenus à partir des méthodes de références. Il conviendra de comparer des résultats intra et inter laboratoires et de ne pas oublier de présenter une corrélation pour des résultats aussi bien normaux que pour des résultats avec anomalies. ATTENTION: Toute absence de corrélation entre deux résultats devra être clairement justifiée (bibliographie, explication clinique, etc.) www.biomnis.com

7. 3) Evaluation des performances de la méthode • Spécificité et sensibilité diagnostique • Paramètres utilisés : En référence au SH-GTA-04 § 9.2.2 l’étude se base sur les points suivants : • résultats obtenus lors de la comparaison de méthode (Présence ou absence d’anomalie correctement démontré par la méthode). • résultats obtenus lors de l’étude des CQE et CQI. • Conclusion : La méthode est considérée comme spécifique et sensible si les deux points ci-dessus sont maitrisés. L’études des CQE et des CQI permet de prouver que la spécificité et la sensibilité diagnostique de la méthode est durable et qu’elle est contrôlée dans le temps. www.biomnis.com

8. 3) Evaluation des performances de la méthode • Contamination • Inter-échantillons L’étude doit porter sur les possibles contaminations entre échantillon à toutes les étapes de la méthode (Mise en culture, technique, étalement, etc.). Pour les étapes effectuées sur automate, un test de non contamination doit être réalisé. ATTENTION une contamination peut être découverte mais doit être argumentée : • Sur automate : déterminer un seuil limite sous lequel la contamination peut être considéré comme négligeable et vérifier périodiquement que ce seuil n’est pas dépassé en renouvelant le test de contamination. • Si elle est possible à des étapes manuelles : définir toutes les modalités mises en place pour éviter que cette contamination ait lieu (ex: procédures de formation, vérifications et contrôles, etc.) • Inter-réactifs L’étude doit porter sur les possibles contaminations entre réactifs à toutes les étapes de la méthode. Pour les techniques sur automate, il n’y a pas de contamination possible si les réactifs passent par des canules différentes (cas le plus courant en cytogénétique) et pour les techniques manuelles, il faudra prouver que la formation du personnel et la mise en place d’un système de contrôle permettent d’éviter ce type de contamination. www.biomnis.com

9. 3) Evaluation des performances de la méthode • Robustesse • Mise en œuvre des tests: Après avoir déterminé les paramètres sensiblespour la méthode (Ex: température de dénaturation, hygrométrie lors de l’étalement, etc.), il convient de mettre en place une série de tests qui simuleront une variation de ces paramètres. Ainsi, il faudra : • Réaliser des tests en quantité suffisante pour chacun des paramètres sensibles en faisant varier le paramètre testé. (Ex: un même échantillon étalé à des hygrométries différentes, marqué à des températures de dénaturation différentes, etc.) • Comparer les résultats obtenus à partir de chaque échantillon pour toutes les variations testées. • Exploitation des résultats Les résultats obtenus devront prouver que même dans le cas d’une variation d’un des paramètres sensibles, la qualité des résultats obtenus n’est pas altérée. NB: Pour évaluer la qualité des résultats, il faudra avoirpréalablement défini au sein d’une procédure ce qui est considéré comme un résultat de bonne qualité (Ex: niveau de résolution, nombre de cellules…). www.biomnis.com

10. 3) Evaluation des performances de la méthode • Stabilité • Mise en œuvre des tests: Après avoir déterminé les réactifs sensiblespour la méthode (Ex: milieu de culture, colcemid, choc hypotonique, etc.), et défini une durée d’utilisation pour chacun d’entre eux (cette durée doit clairement apparaitre dans les procédures), Il faut mettre en place des tests pour prouver par exemple : • Que la pousse d’un échantillon reste identique qu’elle que soit la date d’ouverture de la bouteille de milieu de culture. • Que la date d’ouverture d’un flacon de colcemid n’influence pas la qualité de la technique obtenue. • Que les résultats techniques obtenus sont de qualité équivalente qu’elle que soit l’ancienneté de la préparation de choc hypotonique utilisée. • Etc.… • Exploitation des résultats : Les résultats obtenus devront prouver que dans le cadre d’une utilisation « normale » d’un réactif (lot vérifié, date de péremption non dépassée, conditions de stockage respectées etc.), les réactifs considérés comme sensibles pour la méthode restent stables et n’influent pas sur la qualité et la fiabilité des résultats. www.biomnis.com

11. 4) Contrôle qualité • Contrôle Qualité Externe • Comparaisons Inter laboratoires Indiquer les procédures mises en place avec des laboratoires extérieurs pour réaliser ces comparaisons ; la nature des tests comparatifs, la quantité et la périodicité de ces derniers. • Organismes indépendants Indiquer les adhésions aux programmes de contrôles qualité externes existants (ACLF, UK-NEQAS,…) et la périodicité des évaluations. • Contrôle Qualité Interne • Mise en œuvre L’absence d’étalon de référence dans le domaine de la cytogénétique ne permettant pas de réaliser des contrôles internes « classiques » (comparaisons tests/témoins), il faut réfléchir à un système spécifique à l’analyse effectuée dans votre laboratoire. Indiquer les procédures mises en place pour la réalisation de ces CQI. • Exploitation des résultats Les CQI mis en place doivent être suivis et analysés tout au long de l’année afin de garantir un niveau optimal des performances de la méthode. Toute anomalie détectée par l’analyse de ces CQI doit faire l’objet d’une étude approfondie afin de rétablir au plus vite ce niveau de performance. www.biomnis.com