1 / 14

Kantasolut ja Soluterapia

Kantasolut ja Soluterapia. Mika Pietilä Luentosarja TKK, 11-26.02.2010. In vitro Soluviljely. In vitro Soluviljely. In vitro Soluviljely. In vitro = Elimistön ulkopuolella, Koeputkessa, laboratoriossa kasvatetut solut/tehtävät kokeet In vivo = Elimistön sisällä tehtävät kokeet.

ryder
Download Presentation

Kantasolut ja Soluterapia

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Kantasolut ja Soluterapia Mika Pietilä Luentosarja TKK, 11-26.02.2010

  2. In vitro Soluviljely

  3. In vitro Soluviljely

  4. In vitro Soluviljely • In vitro = Elimistön ulkopuolella, Koeputkessa, laboratoriossa kasvatetut solut/tehtävät kokeet • In vivo = Elimistön sisällä tehtävät kokeet

  5. Kudos/Soluviljely: Yleistä • 1900-luvun alussa ensimmäiset kasvatukset • Eläinten kudoksia • Etuja verrattuna eläinmalleihin (in vivo): • Tarkka ympäristön kontrollointi • pH, O2, CO2 • Näyte homogeeninen (yleensä) ja karakterisoitu • Halvempaa ja automatisoitavissa • Heikkouksia: • Pieni solumäärä -> scale up • Tyypillisessä elimessä noin 100 – 1500 miljardia solua • In vitro tuotettavissa 10 miljoonasta – muutamaan miljardiin • Vaikea mimikoida In vivo olosuhteita  erilainen solujen käyttäytyminen

  6. Kudos/soluviljely: Yleistä • Primääriviljelmät = solut/elin/elimenosa joka eristetty suoraan eläimestä/ihmisestä • Ensimmäisen jaon jälkeen (passage)  primäärisolulinja • Kasvunopeus hidas, rajallinen kasvu • Senescence (Hayflick limit) • Fibroblastit, T-solut, kantasolut ym. kasvavat hyvin • Sydänlihassolut pysyvät elossa muutamasta tunnista päivään

  7. Kudos/soluviljely: Yleistä • Solulinja = jatkuvasti jakautuva solulinja, jonka elinikä on rajaton • Peräisin kasvainkudoksesta • Immortalisoidusta primäärisolulinjasta • Säteilyn, kemiallisten mutageenien tai virusten avulla transformoitu • HeLa solut • Yleisesti käytetty solulinja ympäri maailmaa • 1953 kloonattu solulinja, 31-v naisen kohdunkaulan syövästä

  8. Soluviljelyn Perustarvikkeet • Kasvatusalustat • Petrimaljat, T-pullot, kuoppalevyt etc. • Alusta pinnoitetaan ECM molekyylillä • Solujen tarttuminen • Myös solujen toiminta • Fibronektiini, Kollageeni, gelatiini ym. • Feeder Solut (esim. hESC solujen sydänerilaistuminen, hiiren endoteelisolut) • Medium • Tarjoaa ravinteet ja muut tarvittavat tekijät soluille • Seerumi (fetal calf, fetal bovine) • Sisältää kasvutekijät, mieraalit, hormoonit ym. • Sisältö ja pitoisuudet vaihtelee suuresti eri loteissa

  9. Soluviljelyn Perustarvikkeet • Soluviljelyinkubaattori • Lämpötila (+37oC) • pCO2 (5%) • pO2 (riippuu solutyypistä) • Soluviljelylaminaari/tilat • Mahdollistaa steriilin työskentelyn • Tutkimustaso, GMP • Muut tarvikkeet • Valomikroskooppi, pipetit, suojapuku/hanskat, sterilointiaine (80 % EtOH) ym.

  10. Soluviljelyn Perustarvikkeet Kasvatusmediumin pääkomponentit:

  11. Soluviljelyn Perustarvikkeet Seerumin pääkomponentit: Yleensä välttämätön solujen kasvulle, mutta joissain tilanteissa haitallinen - Esim häiritsee joitain altistuskokeita (kasvutekijät, sytokiinit) - Voi sitoa/inhiboida lisättyjä tekijöitä

  12. Solujen jako = Passage • Viikoittainen rutiini • Solut jakautuessaan täyttävät kasvualustan • Ei tilaa kasvulle • Contact inhibition • Siirrettävä uusille alustoille • Kasvatetaan solumäärää

  13. Solujen jako = Passage Trypsiini (EDTA) • Confluency = kuinka tiiviissä solu ovat • 70 % confluency • Yleisesti käytössä oleva raja • Määritetään silmämääräisesti • Kasvualustan pinta-alasta 70 % soluja Inaktivoidaan trypsiini mediumilla (seerumi) Lasketaan solut (Burkerin Kammio) Jako uusiin kasvatusalustoihin

  14. Solujen jako = Passage 70 % Confluency 90-100 % Confluency • Solut liian tiiviissä  solun toiminta voi muuttua • PODXL ja CD49f tärkeitä hMSC toiminnassa • Invaasio, migraatio, erilaistuminen • Expressio solun pinnalla muuttuu solu-solu kontaktien yleistyessä • Lee et al. 2009 Positive Positive Positive Positive

More Related