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Cecilia Forcato - Gabriela Camicia Carolina Gemma - Alejandra de Almeida

La hiperacetilación de las histonas y la remodelación de los nucleosomas por NURF actúan sinérgicamente facilitando la transcripción de la cromatina. Cecilia Forcato - Gabriela Camicia Carolina Gemma - Alejandra de Almeida. El ordenamiento del DNA en cromatina.

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Presentation Transcript

  1. La hiperacetilación de las histonas y la remodelación de los nucleosomas por NURF actúan sinérgicamente facilitando la transcripción de la cromatina Cecilia Forcato - Gabriela Camicia Carolina Gemma - Alejandra de Almeida

  2. El ordenamiento del DNA en cromatina Genera barreras para la transcripción Estrategias para desestabilizar la cromatina: • Enzimas que modifican histonas covalentemente alterando residuos en las “colitas” (fosforilación, acetilación, metilación) • Complejos remodeladores de la cromatina dependientes de ATP, que facilitan la movilidad de los nucleosomas

  3. Dinámica de la Cromatina • Cromatina acetilada: es más accesible, más activa transcripcionalmente • Cromatina desacetilada: reprimida para la transcripción

  4. Las “colitas” de las Histonas como reguladores de procesos celulares • Las colitas N-terminales son sitios para numerosas modificaciones post-translacionales • Modificaciones en H3 o H4 facilitan o gatillan ciertos eventos

  5. Compuesto por 11-15 polipéptidos distintos SWI/SNF2 Compuesto por 2-5 subunidades. ISWI Hidrólisis de ATP Movimiento de nucleosomas Complejos Remodeladores de la cromatina

  6. Hasta el momento: • La acetilación de histonas facilita la transcripción de templados in vitro • NURF asiste a la activación de la transcripción de templado de cromatina por GAL4 in vitro Objetivo: Analizar la acción combinada de NURF y la acetilación de histonas en la activación de la transcripción in vitro.

  7. Promotor E4 Proteína de Fusión Sitio de unión a GAL4 Protocolo Experimental

  8. La hiperacetilación de las histonas puede actuar sinérgicamente con NURF • La remodelación nucleosomal ATP dependiente es un paso obligatorio para el promotor E4.

  9. ¿Cuál es el rol que desempeña la acetilación de las histonas en la facilitación de la transcripción de la cromatina?

  10. ¿Es el p300 el responsable del sinergismo o hay proteínas HAT contaminantes?

  11. La hiperacetilación de las histonas opera en forma sinérgica con NURF en la transcripción de la cromatina mediada por GAL4-VP16. • P300 es el complejo enzimático responsable de la acetilación de las histonas en la activación in vitro del sistema en estudio.

  12. ¿Afecta la hiperacetilación de las histonas la remodelación de los nucleosomas?

  13. NURF moviliza los nucleosomas hacia zonas distantes de los sitios de union de GAL4. • La hiperacetilación de las histonas no puede sustituir la acción de NURF de movilización de nucleosomas. • La combinación de la hiperacetilación de las histonas con el remodelamiento de la cromatina por NURF no incrementa la digestión por MNasa. • La hiperacetilación de una histona (H3) puede ser suficiente para crear un sinergismo con NURF para facilitar la activación por GAL4-VP16.

  14. ¿La remodelación por NURF y la hiperacetilación de las histonas facilitan la reiniciación?

  15. NURF y la hiperacetilación de las histonas facilitan la iniciación y la reiniciación de la transcripción.

  16. El reclutamiento del aparato transcripcional por GAL4-VP16 podria estar asistido por 3 procesos: 1) El posicionamiento de los nucleosomas es mediado por el DBD de GAL4 y catalizado por NURF. 2) La hiperacetilación de histonas permite el desarmado de una estructura de mayor orden de los nucleosomas. 3) El aumento en la unión de TFIID a los nucleosomas hiperacetilados.

  17. Conclusiones: • La acción remodeladora de NURF y la hiperacetilación de las histonas actuan sinergicamente en la activación de la transcripción in vitro. • La acción remodeladora de NURF es un paso obligatorio en la activación de la transcripción. • La hiperacetilación de una histona es suficiente para la activación sinergica con NURF. • NURF y la hiperacetilación de las histonas facilitan la iniciación y la reiniciación de la transcripción.

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