1 / 15

Principiul metodei :

Detectia alimentelor iradiate folosid metoda cometei EN 13784/2001 Foodstaff – DNA comet assay for the detection of irradiated foodstaff – screenig method.

urbana
Download Presentation

Principiul metodei :

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Detectia alimentelor iradiate folosid metoda cometeiEN 13784/2001 Foodstaff – DNA comet assay for the detection of irradiated foodstaff – screenig method

  2. Obiectiv general: asigurarea in tara a expertizei necesare pentru abordarea tematicii alimentelor iradiate.Obiectiv particular: realizarea unei proceduri pentru detectia alimentelor iradiate pe baza analizei prezentei ruperilor la nivelul macromoleculelor de ADN.

  3. Principiul metodei: Alimente (seminte, fructe, carne, etc.) iradiere Fragmentarea lanturilor de ADN • Alti factori care pot induce fragmentarea AND-ului: • Conservarea (termic, uscare) • Tratamente chimice

  4. Principiul metodei: Celule inglobate 1% agaroza depusa pe o lama de miscroscop Liza celulara: Triton X-100 Nucleoid Incubare in tampon alcalin sau neutru: Electroforeza Fragmentele de ADN migreaza formand coada cometei Neutralizare, colorare, vizualizare % ADN in coada se coreleaza cu numarul de ruperi in lantul de ADN

  5. Etapele procedurii: • separarea celulelor din proba de analizat (rezulta o suspensie care contine celule si resturi de tesut) • dupa sedimentarea particulelor mari (10-20 min) un volum adecvat din supernatant se amesteca cu agaroza (cu temperatura scazuta de topire) si se depune sub forma unui film pe suprafata unei lame de microscop • dupa solidificarea agarozei, lama se introduce timp de 30 min intr-o solutie de liza (contine Triton 100) care degradeaza membrana celulara si o face permeabila la fragmentele de ADN • lama este supusa actiunii unui camp electric (1-2 V/cm, 1 min pentru cometa neutra sau 0.5 V/cm, 30 min pentru cometa alcalina) care produce electroforeza fragmentelor de ADN • ADN-ul din proba este marcat fluorescent (cu bromura de etidiu) si celulele sunt observate la un microscop cu epifluorescenta (Olympus BX51) iar imaginile sunt inregistrate cu un sistem de achizitie digital.

  6. Rezultate experimentale: Control Iradiat Vita:

  7. Rezultate experimentale: Control 1 kGy 2 kGy Porumb:

  8. Rezultate experimentale: Control 1 kGy 2 kGy Porumb: Grau:

  9. Prelucrarea datelor:

  10. Prelucrarea datelor: Parametrii cometei: Fractia de ADN in coada: DNA = AriaP1/(AriaP1+AriaP2) Lungimea cozii (pixeli): Lungime = XcP2 – XcP1 Momentul cozii: DNA * Lungime

  11. Prelucrarea datelor: Perfectionarea tehnicii cometei pentru analiza semintelor de cereale iradiate

  12. Prelucrarea datelor: Perfectionarea tehnicii cometei pentru analiza semintelor de cereale iradiate

  13. Concordanta cu metoda bazata pe RES:

  14. Concordanta cu metoda bazata pe RES:

  15. Concluzii: • Metoda cometei se dovedeste sensibila la efectele iradierii in cazul probelor de alimente iradiate (carne, seminte) analizate • Protocolul bazat pe electroforeza in mediu neutra da rezultate comparabile celor din literatura de specialitate • Rezultatele prezentate sunt in concordanta cu cele obtinute prin tehnica RES

More Related