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FLASHS D ’ACTUALITÉ EN BIOPATHOLOGIE MÉDICALE. F.Leclercq, M.Beauloye 16 mars 2005

FLASHS D ’ACTUALITÉ EN BIOPATHOLOGIE MÉDICALE. F.Leclercq, M.Beauloye 16 mars 2005. La phase préanalytique en bactériologie. Les hépatites virales. Augmentation modérée des transaminases. Élévation isolée de la Gamma GT. PREANALYTIQUE EN BACTERIOLOGIE. PRESCRIPTION

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FLASHS D ’ACTUALITÉ EN BIOPATHOLOGIE MÉDICALE. F.Leclercq, M.Beauloye 16 mars 2005

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  1. FLASHS D ’ACTUALITÉ EN BIOPATHOLOGIE MÉDICALE. F.Leclercq, M.Beauloye 16 mars 2005

  2. La phase préanalytique en bactériologie. • Les hépatites virales. • Augmentation modérée des transaminases. • Élévation isolée de la Gamma GT.

  3. PREANALYTIQUE EN BACTERIOLOGIE

  4. PRESCRIPTION COLLECTE DES ECHANTILLONS CONSERVATION-DELAI-TRANSPORT NON CONFORMITES

  5. PRODUITS ENVISAGES • URINES • FROTTIS DE GORGE • EXPECTORATIONS • FROTTIS VAGINAUX-URETHRAUX • SELLES • FROTTIS DIVERS • SANG • PRELEVEMENTS PARTICULIERS

  6. PRESCRITION EN GENERAL • RENSEIGNEMENTS ADMINISTRATIF • IDENTITE DU PATIENT • DATE DE NAISSANCE • SEXE • ADRESSE • RENSEIGNEMENTS MUTUELLES • RENSEIGNENTS CLINIQUES EVENTUELS • ANALYSES DEMANDEES EN FONCTION DU PRODUIT • PRECISION DE L’ ORIGINE DES PRODUITS

  7. URINES PRESCRITION • Pas de problèmes particuliers • Renseignements cliniques éventuels: cf.prise d ’antibiotiques

  8. URINES :COLLECTES DES ECHANTILLONS • Prélèvement directement dans un pot propre • Conseiller une toilette avant le prélèvement • Volume minimum 10 ml • Prélèvement pédiatrique: • pochette spéciale disponible au laboratoire • à usage mixte • propreté des zones pubiennes et périanales • enlever la pochette dès que l ’enfant à uriner • déposer la pochette fermée dans un grand pot à urine

  9. URINES :CONSERVATION-DELAI-TRANSPORT • Délai laboratoire: endéans les 5Haprès le prélèvement • Au delà mettre les urines à T° :2-8°C • URINES:NON CONFORMITES • Prolifération bactérienne suite à une conservation inadéquate • Contamination possible par la flore vaginale et anale • Eviter si possible le moment des règles ( surtout pour le sédiment) • Les urines de 24H sont impropres pour la culture et le sédiment urinaire

  10. FROTTIS DE GORGE :PRESCRIPTION • Signaler l ’origine du frottis • Recherche directe de AG strepto A si suspecté • FROTTIS DE GORGE :COLLECTE DES • ECHANTILLONS • Utilisation des écouvillons en Dacron + milieu de transport • Frotter les amygdales - éviter le contact avec la cavité buccale • Mettre rapidement le frottis dans le milieu de transport • Prélèvement d ’un écouvillon supplémentaire si recherche • de Strepto A (écouvillon sec ,en Dacron)

  11. FROTTIS DE GORGE :CONSERVATION-DELAI-TRANSPORT • Dans le milieu de transport conservation des germes • pendant 48H • Conservation des frottis à T° ambiante (+/- 20°C) • Acheminement au laboratoire endéans les 4H • FROTTIS DE GORGE : NON CONFORMITES • Contamination par la flore buccale • Frottis sec ne convient pas pour la culture • Si conservation au froid :destruction des souches • thermosensibles • Si recherche AG Streto A :un seul frottis peut donner un • résultat faussement négatif par épuisement du matériel • bactérien • Si date de péremption dépassée • Si frottis autre que Dacron :altération de certaines souches

  12. EXPECTORATION : PRESCRIPTION • Indiquer si recherche complémentaire: • BK • Mycose • Levure • EXPECTORATION : COLLECTE DES ECHANTILLONS • Prélèvement dans un pot stérile • Récupération des expectorations vraies • Eviter le crachat de simple salive

  13. EXPECTORATION CONSERVATION-DELAI-TRANSPORT • Acheminement endéans les 4h • Conservation à T° ambiante ( 20°C) • Si recherche de BK seul conservation possible jusqu ’à 48H • EXPECTORATION :NONCONFORMITES • Si le produit est d ’origine uniquement salivaire • Si conservation au froid destruction des souches thermosensibles

  14. FROTTIS PUS -DIVERS-LIQIDES DE PONCTION • PRESCRIPTION • Indiquer clairement l ’origine du prélèvement • Noter les recherches en anaérobie:valable surtout pour les origines :suivantes: oreille- sinus -œil-abcès- plaies -liquides

  15. FROTTIS PUS -DIVERS-LIQIDES DE PONCTION • COLLECTE DES ECHANTILLONS • Frottis :utilisation des frottis en Dacron + milieu de transport • Liquide :pot stérile ,seringue de prélèvement • Remettre rapidement le frottis après le prélèvement dans le milieu de transport pour augmenter les chances de survie des germes • Utiliser uniquement les frottis avec milieu de transport avec étranglement surtout si de recherche de germes en anaérobie • Au prélèvement :se confiner à la zone infectée • Si recherche d ’AG HSV:prélèvement d ’un frottis sec complémentaire :frottis Nez profond

  16. FROTTIS PUS -DIVERS-LIQIDES DE PONCTION • CONSERVATION-DELAI -TRANSPORT • Acheminement endéans les 4H surtout si germes anaérobies • Conservation T° ambiante (20 °C) • FROTTIS PUS -DIVERS-LIQIDES DE PONCTION • NON CONFORMITES • Contamination par la flore locale :ex.la peau dans cas de frottis de peau • Frottis sec impropre à la culture • Conservation au froid • Si milieu non adéquat pour la recherche des anaérobies • Frottis non en dacron • Date de péremption dépassée

  17. FROTTIS PUS VAGINAUX-URETHRAUX • PRESCRIPTION • Indiquer clairement l’originedu prélèvement • Noter les recherches spécifiques : levures - chlamydia et gono AG • FROTTIS VAGINAUX - URETHRAUX • COLLECTE DES ECHANTILLONS • Frottis : utilisation des frottis en Dacron + milieu de transport • Remettre rapidement le frottis après le prélèvement dans le • milieu de transport pour augmenter les chances de survie des • germes • Si recherche d ’AG Strepto B ,AG Herpes:prélèvement • d ’un frottis sec complémentaire pour chacun • Prélèvement spéciaux pour recherche Gono et Chlamydia • par PCR

  18. FROTTIS VAGINAUX - URETHRAUX • CONSERVATION-DELAI -TRANSPORT • Acheminement endéans les 4Hsurtout si germes anaérobies • Conservation T° ambiante (20 °C) • FROTTIS VAGINAUX - URETHRAUX • NON CONFORMITES • Frottissecimpropre à la culture • Conservation au froid • Frottis non en dacron • Date de péremption dépassée • Prélèvement inadéquat pour la recherche Chlamydia -Gono PCR AG Herpes • Si recherche AG Streto B :un seul frottis peut donner un résultat • faussement négatif par épuisement du matériel bactérien

  19. HEMOCULTURE: PRESCRIPTION • En cas de suspicion de septicémie • HEMOCULTURE : COLLECTE DES ECHANTILLONS • Prélèvement sur flacons spéciaux disponibles sur demande • Prélèvement de 20 cc de sang à la seringue • Ne pas dévisser les bouchons- nettoyer les bouchons à l ’alcool avant d ’injecter le sang dans le flacon • Injecter directement 8 - 10 cc de sang dans chaque flacon • Si prélèvement difficile prendre en priorité le flacon avec le milieu • Schadler (bouchon rouge) • Prélever lors du pic de T°

  20. HEMOCULTURE : CONSERVATION-DELAI -TRANSPORT • Acheminement le plus rapidement possible au laboratoire • Conservation T° ambiante (20 °C) • HEMOCULTURE : NON CONFORMITES • Conservation au froid

  21. SELLES :PRESCRIPTION • Préciser si : • recherche des parasites • recherche de sang • recherche des rotavirus et adénovirus pour enfant < 2ans • SELLES : COLLECTE DES ECHANTILLONS • Prélèvement dans un pot propre et si possible stérile • si récolte de parasites visibles :éviter la dessication • Si récolte pour oxyures selon le « scotch test » ,éviter le papier collant • translucide

  22. SELLES . CONSERVATION-DELAI-TRANSPORT • délai :endéans les 4H au laboratoire • Conservation à T° 2- 8 °C ,surtout en été • SELLES . NON CONFORMITE • Pour la recherche des parasites ,il faut des selles fraîches • La recherche du sang est liée à un régime

  23. PRELEVEMENTS SPECIAUX • 1.Sang dans les selles: • Eviter 3 jours avant l ’analyse :viande rouge crue ou saignante, • Excès d ’alcool,ac.acétylsalicilique ,anti -inflammatoire non stéroïde, • corticostéroïdes,ac.ascorbique • 2.chlamydia gonocoque par PCR: • Prélèvement sur écouvillon spéciaux + milieu de transport particulier • A demander au laboratoire • Mode d ’emploi accompagne le kit de prélèvement • 3. Recherche d ’AG :Herpes,Strepto A et B,HSV • Sur frottis sec en Dacron • Eviter tout milieu de transport (excepté pour les strepto)

  24. Recherche de Mycose • Récolte dans un pot stérile pour tout prélèvement • Délai : acheminement au laboratoire endéans les 4H • Conservation à T° de 2-8 °C pour tous les prélèvements sauf pour les • recherche sur peau et phanères (T° ambiante)

  25. HEPATITES VIRALES MARQUEURS SEROLOGIQUES

  26. MARQUEURS SEROLOGIQUES VIRUS DE L ’HEPATITE A VIRUS DE L ‘HEPATITE B VIRUS DE L ’HEPATITE C VIRUS DE L ’HEPATITE E VIRUS DE L ’HEPATITE D

  27. LE VIRUS DE L ’HEPATITE A (VHA) • STRUCTURE DU VHA:Virus à ARN sans enveloppe lipidique • EPIDEMIOLOGIE: • Réservoir du virus est l ’homme • Maladie cosmopolite • Infection avant 20 ans ,plus tardive dans les pays industrialisés • Transmission par voie féco-orale(ingestion aliments ou eau souillés) • Transmission sexuelle ou sanguine possible mais rare. • Incubation 2-6 semaines • Maladie souvent asymptomatique -gravité augmente avec âge • Hépatite de type aiguë -jamais de forme chronique • MARQUEURS SEROLOGIQUES: • Ac. anti-VHA IGM:sur sérum • Ac.anti-VHA IGG:sur sérum

  28. STRUCTURE DU VHB:Virus à ADN avec enveloppe lipidique • EPIDEMIOLOGIE: • Réservoir du virus est l ’homme • Maladie cosmopolite très répandue (1 million de morts par an) • forte prévalence en Chine ,en Asie du sud-est,en Afrique noire • Transmission par v. parentérale(transfusion,toxicomanie,hémodialyse), • par voie sexuelle(en pays à faible endémie),par voie foeto-maternelle • (en pays à forte endémie) • Incubation de 40 à120 jours • Responsable d’hép. de type aiguë inapparente dans 80-90% des cas , • 0.1% évolue vers une hépatite fulminate. • Passage à l ’hép.chronique dans 5% chez l ’adulte, 30%chez le jeune • enfant et 90% chez le nouveau-né..Evolutionvers portage de  AG HVB • (4/10),hép.chronique persistante(3/10)ou hép.chronique active (3/10) LE VIRUS DE L ’HEPATITE B (VHA)

  29. MARQUEURS SEROLOGIQUES: • Recherche du DNA VHB par PCR: sur sérum • AG HBS, AGHBE :sur sérum • Ac CORE igM et igG, ac.HBE ,ac. HBS :sur sérum

  30. STRUCTURE DU VHA: • Virus à ARN avec enveloppe lipidique • Variabilité génétique:6 génotypes(classés par chiffre)et sous types (classé par lettre) ex. génotype 1b • EPIDEMIOLOGIE: • Réservoir du virus est l ’homme • Maladie cosmopolite ,prévalence augmente du nord au sud • Transmission par voie sanguine (transfusion,toxicomanie,hémodialyse), • par voie sexuelle(faible:5%),par voie foeto-maternelle (reste rare:<6%) • transmission nosocomiale lors de soins invasifs • Incubation de 4 à 12 semaines • Maladie souvent asymptomatique(80%) • Evolution vers une hépatite chronique est fréquente(60-80% des cas) • les formes sévères ne sont pas rares LE VIRUS DE L ’HEPATITE C (VHC)

  31. MARQUEURS SEROLOGIQUES: • Recherche de l ’AG. VHC par PCR :sur sérum congelé • Ac. anti-VHC :sur sérum

  32. LE VIRUS DE L ’HEPATITE E (VHE) • STRUCTURE DU VHE:Virus à ARN sans enveloppe lipidique • EPIDEMIOLOGIE: • Réservoir du virus est le porc pendant les périodes interépidémiques • Maladie cosmopolites mais surtout endémique des zones tropicales • peu courante dans les pays industrialisés. • Transmission par voie féco-orale(ingestion aliments ou eau souillés) • Transmission foetomaternelle récemment décrite • Incubation de 4 à 6 semaines • Hépatite de type aiguë-plus grave chez la femme enceinte - • évolution de type hépatite fulminante dans 0.5 à 2% des cas • jamais de forme chronique

  33. MARQUEURS SEROLOGIQUES: • Recherche de l  ’AG. VHE possible par PCR:sur sérum • Ac. anti-VHE IGM:sur sérum • Ac.anti-VHE IGG:sur sérum

  34. LE VIRUS DE L ’HEPATITE D (VHD) • STRUCTURE DU VHA • Virus à ARN de type défectif(il ne peut se repliquer en l ’absence virus VHB) • Infection par VHD possible si présence du virusVHB • EPIDEMIOLOGIE: • Réservoir du virus est l ’homme • Maladie cosmopolite( le bassin méditerranéen,Asie centrale,Afrique • noire,Amérique du Sud et Europe de l ’Est.) • Transmission cf VHB • Incubation de 3 à 7 semaines • Coinfection avec VHB ressemble à une Hép.B aiguë classique (forme • sévère rare) • Surinfection : passage à la chronicité et aux formes sévères

  35. MARQUEURS SEROLOGIQUES: • Recherche de l ’AG.VHD par PCR :sur sérum • Ac. HVD igM et igG :sur sérum

  36. LE VIRUS DE L ’HEPATITE G (VHG) • STRUCTURE DU VHG:Virus à ARN • EPIDEMIOLOGIE: • Maladie cosmopolite • Transmission par voie sanguine ,sexuelle ,foeto-maternelle • Population à risque:transfusés,hémodialysés,hémophiles,toxicomanes • Incubation +/- 1 mois • Maladie souvent asymptomatique,pathogénicité hépatique faible. • Co-infection avec le virus VHC (sans affection sur l ’évolution) • MARQUEURS SEROLOGIQUES • Recherche l ’AG VHG. par PCR :sur sérum • Ac.anti-VHG IGG :sur sérum

  37. HEPATITE VIRALE à VHA • 1.De type aiguë: • Incubation :2- 6 semaines • Marqueurs biologiques: • GOT ,GPT >/= 1000UI/ML • Ph.ALC. Nl ou augmentées • Neutropénie ,lymphocytose possible • Marqueurs sérologiques • Ac. anti VHA IGM:détectées entre 0 et 3 mois • Ac.anti VHA IGG :détection possible dès les signes cliniques • persistent à vie et signent l ’immunité • Evolution :suivi sérologique non nécessaire ,suivi biologique utile

  38. HEPATITE AIGUË A VHA

  39. HEPATITE VIRALE à VHC • 1.De type aiguë: • Incubation :4 - 12 semaines • Marqueurs biologiques: • élévation des GOT ,GPT soit: fluctuantes ou augmentées et retour • à la normale ou élevées en plateau sans fluctuation • gamma GT souvent élevées • Marqueurs sérologiques • Détection du ARN viral VHC par PCR dans le sérum • Ac.anti VHC :détection entre 4 - 8 semaines et pls mois après • le début de l ’ infection (signes biologiques)

  40. HEPATITE AIGUË A VHC

  41. Remarque: • Devant une sérologie négative ,procéder à une nouvelle recherche • 1 à 2 mois plus tard • En cas de sérologie positive ,seule la négativité persistante de • ARNviral et des GPT normales confirment la guérison • Replication virale < seuil de détection est toujours possible • 2.De type chronique: • Marqueurs biologiques:suivre les GOT,GPT, Gamma GT • Marqueurs sérologiques : ARN viralqualitatif et Ac. anti VHC • Marqueurs sérologiques avant traitement: • ARN viralquantitatif et Génotypage ARN viral

  42. HEPATITE VIRALE à VHB • 1.De type aiguë: • Incubation : 40 à 120 jours • Marqueurs biologiques:GOT ,GPT élevées( 5x la normale) • GPT/GOT >1 • Ph.ALC.et bilirubine Nl ou augmentées • temps de thrombine marqueur de sévérité • Marqueurs sérologiques • Primo infection :présence de AGBS,AGBE,Ac. core IGM et IGG • Phase de convalescence: • suivi de AGBS,AGBE, ac. Core • apparition des ac . HBE suite à la disparition de AGBE • apparition des ac . HBS (+/- 6 mois) si disparition de AGBS

  43. HEPATITE AIGUË A VHB

  44. 2.De type chronique: • Si persistance de AGBS > 6 mois, suivre les marqueurs • 2.1.Hépatite chronique non active: • AGBS : positif ,AGBE:négatif ,ac.Core :positif , ac.HBE :positif ac.HBS : négatif • ADN HBV < 100000 copies/ML • Tests hépatiques non perturbés • 2.2 .Hépatite chronique active: (replication virale) • AGBS : positif ,AGBE :positif ,ac.Core :positif , ac.HBE : négatif • ac.HBS : négatif • ADN HBV> 100000 copies/ML

  45. 2.3.Hépatite chronique active: mutant pré core ,replication virale • AGBS: positif ,AGBE:négatif ,ac.Core :positif , ac.HBE : positif • ac.HBS : négatif • ADN HBV> 100000 copies/ML • Tests hépatiques perturbés

  46. HEPATITE CHRONIQUE A VHB

  47. HEPATITE VIRALE à VHE • 1.De type aiguë: • Incubation :4 - 6 semaines • Marqueurs biologiques: • élévation des GOT ,GPT • Marqueurs sérologiques • Ac. anti VHE IGM:détectées entre 0 et 3 mois ( parfois 5 mois) • Ac.anti VHA IGG :détection 1 mois après le début de l ’infection • persistent à vie et signent l ’immunité • Détection du ARN viral VHE dans les selles

  48. LE MÉDECIN FACE À UNE ÉLÉVATION MODÉRÉE DES TRANSAMINASES

  49. ALANINE AMINOTRANSFÉRASE • TRANSAMINASE GLUTAMO- PYRUVIQUE • ALT ou ALAT ou TGP • Foie, rein, cœur, muscle squelettique. • ASPARTATE AMINOTRANSFÉRASE • TRANSAMINASE GLUTAMO-OXALOACETIQUE • AST ou ASAT ou TGO • Myocarde, foie, muscle squelettique, rein, pancréas, rate, poumons, érythrocytes, leucocytes.

  50. SCHÉMA DÉCISIONNEL

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