Чанышева Р.Ф. аспирант, ассистент кафедры эпидемиологии

1. ГБОУ ВПО «НИЖЕГОРОДСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯМИНЗДРАВА РОССИИ»НИИ Профилактической медициныКафедра эпидемиологии О стафилококковых бактериофагах в лечении и профилактике инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП) Чанышева Р.Ф. аспирант, ассистент кафедры эпидемиологии 27 марта 2014 г. Н. Новгород

2. Проблема ИСМП, вызванных Staphylococcus spp. • Широкая распространенность стафилококков в человеческой популяции • Значительное видовое разнообразие Staphylococcus spp. • Доминирование в структуре возбудителей ИСМП • ГСИ новорожденных и родильниц • ИОХВ пациентов хирургических стационаров; • инфекции, связанные c имплантацией медицинских устройств • инфекции кожи и мягких тканей первичных хирургических пациентов АПО • Высокая распространенность устойчивости к антимикробным препаратам (АМП)

3. Бактериофаги (БФ)Преимущества препаратов бактериофагов • безвредность • высокая эффективность • строгая специфичность действия • возможность сочетания с другими лекарственными препаратами (в том числе с антимикробными) • эффективность в отношении штаммов, обладающих устойчивостью к антимикробным препаратам (антибиотики, дезинфектанты, кожные антисептики)

4. СТАФИЛОКОККОВЫЕ БАКТЕРИОФАГИФакторы, ограничивающие практическое применение стафилококковых БФ: • обеспечивают горизонтальный и вертикальный перенос генов • фактор возникновения штаммов, обладающих патогенным потенциалом

5. Стафилококковые фаги Фаги, гомологичные S.aureus¹ Фаги, гомологичные CoNS¹ ¹ - Deghorain M., Van Melderen L., The Staphylococci Phages Family: An Overview. Viruses. 2012.December. 4(12). P. 3316–3335.

6. Применение стафилококкового БФв условиях АПУ(Благонравова А.С. с соавт., Н.Новгород, 2005 г.) • Фаготерапия пациентов с ГСИ в поликлинических условиях (контролируемый эпидемиологический эксперимент) • Доминирование Staphylococcus spp. в этиологии ГСИ - «Бактериофаг стафилококковый жидкий» («Имбио») без предварительной этиологической расшифровки • Оценивались: обсемененность ран, антибиотикотерапия

7. Результаты фаготерапии в контролируемом эпидемиологическом эксперименте продление курса

8. Применение стафилококкового БФ в родильном домев условиях эпиднеблагополучия,вызванного MSSA-PVL(Иванова Н.Ю., Копассовская О.В., 2009 г.) Характеристика эпидемической ситуации

9. Важный принцип эффективной фаготерапии – применение высоковирулентных препаратов БФ, вызывающих полный лизис бактерий

10. Результаты территориального мониторинга фагочувствительностиStaphylococcus spp.,2009-2011 гг. • 289штаммовStaphylocoсcusspp.: 239штаммов – S.aureus 50 штаммов – CoNS • 6 ЛПО г. Н.Новгорода и Нижегородской обл. : 2 ЦРБ, родильный дом, 2 медицинских центра, детский стационар • Препараты БФ: • «Бактериофаг стафилококковый жидкий» (Стаф-БФ) • «Интести-бактериофаг» (Интести-БФ) • «Пиобактериофаг комбинированный» (Пио-БФ)

11. Результаты территориального мониторинга фагочувствительностиStaphylococcusspp.,2009-2011 гг. Рис.1 ФагочувствительностьStaphylococcus spp. к препаратам БФ, % Рис.2 Доля устойчивых штаммов Staphylococcus spp. кпрепаратам БФ

12. Результаты территориального мониторинга фагочувствительностиStaphylococcusspp.,2009-2011 гг. • Таблица. Чувствительность к препаратам БФ клинических штаммов Staphylocoсcusspp. ЛПО г. Н.Новгорода и Нижегородской области. *- показатели S. aureusvsCoNSстатистически достоверны (р=0,01) ˟ - показатели достоверно превышают долю чувствительных штаммов CoNS (р=0,01)

13. Результаты территориального мониторинга фагочувствительностиStaphylococcusspp.,2009-2011 гг. 75,2 % Перекрестная устойчивость Staphylococcus spp.к коммерческим препаратам БФ Доля штаммов Staphylococcus spp., устойчивых к действию одного и более препарата БФ

14. Низкая чувствительность CoNS Выделение специфического бактериофага на основе штаммов коагулазонегативных стафилококков – возбудителей ИСМП, циркулирующих в медицинских организациях г. Н.Новгорода

15. Этапы исследования • Создание рабочей коллекции штаммов CoNS Лечебно-профилактическая эффективность БФ зависит от того, в какой мере его структура соответствует этиологической структуре заболеваний конкретной территории, на которой он применяется. Критерии отбора • Штаммы CoNS – возбудители ИСМП; • Характеристика штамма: устойчивость к антимикробным препаратам, наличие гена mecA; • Специфика лечебно-диагностического процесса • Выделение и накопление фаговых частиц. • Изучение морфологии выделенного бактериофага.

16. Материалы и методы • 6 ЛПО г. Н.Новгорода : кардиохирургический стационар, крупные взрослые и детские многопрофильные больницы, родильные дома • Лабораторная база :отдел лабораторных исследований НИИ ПМ НижГМА, институт микробиологии им. С.Н. Виноградского РАН • 26 штаммов CoNS : 18 штаммов S.epidermidis, 6 – S. saprophyticusи по одному штамму S. haemolyticusиS. lugdunensis Методы • Оценка морфологических и фенотипических характеристик CoNSв соответствие с Приказом № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях ЛПУ». • Биохимическая идентификация CoNS (тест-системы ПБДС, «СТАФИтест16», «BBL Crystal») • Определение антибиотикочувствительностидиско-диффузионным методом в соответствие с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». • Метод агаровых слоев Грациа • Электронно-микроскопическое исследование методом негативного контрастирования 2% р-ромуранилацетата при увеличении в 60-120 тыс. раз

17. Схема эксперимента по выделению БФ, активного в отношении CoNS Штаммы CoNS Набор изучаемых свойств БФ Изучение морфологии НК Обнаружение БФ (метод Грациа) Изучение ультраструктуры фаговых частиц Негативные колонии (НК) с признаками вторичного роста НК без признаков вторичного роста «чистая» линия БФ Пересев на МХА (метод Грациа) Пересев на МПБ НК без признаков вторичного роста Пересев на МХА (метод Грациа)

18. Результаты исследованияХарактеристика выделенного бактериофага:морфология негативных колоний Продуцент фага: штамм S.epidermidis(№166), MSSE, клинический материал – раневое отделяемое. Пациент кардиохирургического стационара, 66 лет

19. Результаты исследованияХарактеристика выделенного бактериофага:морфология фаговых частиц • IV морфологическая группа – «Фаги с длинным несокращающимся отростком» (А.С.Тихоненко): • Многогранная удлиненная головка гексагональной формы, 55х30 нм • Длинный несокращающийся отросток, 70±5 нм Рис. Морфология фаговых частиц, ×120 000

20. Выводы • высокая этиологическая значимость Staphylococcus spp. • распространенность устойчивости к АМП Стафилококковые бактериофаги являются эффективным и востребованным средством борьбы и профилактики с инфекциями стафилококковой этиологии

21. Выводы

22. Благодарю за внимание!