LAS BACTERIAS COMO PATOGENOS

1. LAS BACTERIAS COMOPATOGENOS DIAGNOSTICOMICROBIOLOGICO

2. ¿QUE SON LAS BACTERIAS? Células pro-cariotas

3. Característica Procariota Eucariota Núcleo Sin membrana nuclear, Membrana nuclear, cromosoma único circular uno o más pares de cromosomas ADN extracromosómico Puede estar presente en Presente en plásmidos organelas Organelas No contiene Mitocondrias y citoplasmáticas cloroplastos Membrana Sitio de síntesis de componentes Barrera permeable citoplasmática de la pared y del ADN. Barrera selectiva permeable selectiva Pared celular Capa rígida de peptidoglicano No tiene pared de peptidoglicano Esteroles Ausentes Presentes Ribosomas 70 S en el citoplasma 80 S en el REP División Fisión binaria Mitosis Tamaño 0,2 a 10 µm Mayor a 7 µm Diferencias entre células procariotas y eucariotas

5. Cell Wall Teichoic acid Membrane Lipoteichoic acid Peptidoglycan Cytoplasmic membrane Gram-Positive

6. Proteína de membrana externa Antígeno somático ¨O¨ Porinas Lípido A Membrana externa Fosfolípidos Pared celular de mureína Lipoproteína Mureína Periplasma Proteína de Membrana interna Membrana citoplasmática Fosfolípidos Gram-Negative

7. Membrana citoplasmática • Bi-capa lipídica, rica en proteínas • Unida al cromosoma, participa en: • La duplicación del material genético • Síntesis y reparación del ADN • Síntesis de los polímeros de la pared celular • Síntesis de los componentes celulares • Contiene el sistema de transporte de electrones (cadena respiratoria) • Barrera permeable selectiva a sustancias externas y participa de la excreción de sustancias internas

8. coco cocobacilo bacilo bacilo en forma de clava vibrión bacilo fusiforme espirilo Morfología bacteriana

9. diplococo tetrada cadena (estreptococos) bacilos en empalizada (Haemophilus) bacilos formando caracteres chinos (Corynebacterium) racimo (estafilococos) Agrupación bacteriana

10. BACTERIA GRAM POSITIVA BACTERIA GRAM NEGATIVA Fijación de las células sobre portaobjetos Coloración Primaria: Cristal violeta Mordiente: Lugol (Sol. de Yodo) Decoloración: Alcohol - Acetona Coloración de contraste: Safranina o Fucsina Células de color violeta Células de color violeta Células de color violeta Células de color violeta Células de color violeta Células incoloras Células de color violeta Células de color rojo Coloración de Gram

12. Coloración Acido-Resistente de Ziehl-Neelsen Bacterias AAR Bacterias no AAR Fijación de las células sobre portaobjetos Coloración Primaria: Fucsina básica Calentar suavemente Decoloración: Alcohol - Acido Coloración de contraste: Azul de metileno

15. Crecimiento bacteriano • Metabolismo - Reacciones de abastecimiento - Biosíntesis - Polimerización  Del ADN: Replicación  Del ARN: Transcripción  Síntesis de las Proteínas: Traducción - Ensamblado • Regulación - Control de la actividad enzimática - Control de la expresión génica • División celular - Fisión Binaria

16. Genética bacteriana • Genoma bacteriano - Replicación - Transcripción - Traducción • Plásmidos - Replicación • Transposones - Replicación - Movilización • Bacteriófagos - Lisis - Lisogenia

17. Variación genética • Mutación - Espontánea - Cairnsiana - Inducida

18. Transformación • Transducción • Conjugación Bacteriophage Infects + + Chromosomal DNA fragments from donor bacterium Donor bacterium Phage contains some bacterial DNA Donor bacterium (F+) Recipient bacterium (F-) Competent recipient Contact by sex pili DNA uptake + Donor DNA transferred on replication Recipient bacterium Cells separate Recombination Phage containing bacterial DNA infects another cell; Injects ¨donor¨ DNA Recipient bacterium Transformed bacterial cell Recombination Recombination Transduced recipient Recombinant recipient (F+)

19. Tipo de Bacteria Característica Ejemplos Aerobia Necesitan oxígeno Mycobacterium (estricta) No fermentan tuberculosis Anaerobia Muere con oxígeno, Clostridium (estricta) fermenta y se multiplica perfringens si no hay oxígeno Facultativa Respira con oxígeno, Escherichiacoli fermenta si no hay oxígeno Aerotolerante Fermenta con o sin oxígeno Streptococcus pyogenes Microaerofílica Crece mejor con poco Campylobacter oxígeno jejuni Clasificación de las bacterias por su comportamiento frente al oxígeno

20. Anaerobe Microaerophile Aerobe Facultative

21. Crecimiento bacteriano en Medio de Cultivo • Cultivo puro • Colonias 1 UFC ...................1 colonia • Densidad de un cultivo • Tiempo medio de generación • Temperatura óptima - Bacterias psicrófilas - Bacterias mesófilas - Bacterias termófilas

23. Cultivos a partir de muestras clínicas

24. Aislamiento a partir de una Muestra Clínica

25. Interacción de las bacterias con el húesped • Flora Normal - Colonización - Simbiosis - Protección • Patógenos Factores de virulencia......Infección......Enfermedad - Adhesinas - Cápsulas - Toxinas - Dosis infectante • Patógenos oportunistas - Situación predisponente

26. Nariz Corynebacterium spp Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Garganta Streptococcus spp Branhamella catarrhalis Corynebacterium spp Haemophilus spp Neisseria spp Mycoplasma spp Colon Bacteroides fragilis Escherichia coli Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Enterobacter spp Klebsiella spp Lactobacillus spp Streptococcus spp Candida albicans Clostridum spp Genitales masculinos Streptococcus spp Mycobacterium spp Escherichia coli Bacteroides spp Boca Streptococcus spp Fusobacterium spp Actinomyces spp Leptotrichia spp Veillonella spp Piel Staphylococcus epidermidis Propionibacterium acnes Pityrosporum ovale Vagina Lactobacillus spp Candida albicans Gardnerella vaginalis Flora Normal de las Mucosas

27. Acción patógena bacteriana • Adherencia - Adhesinas - Fimbrias - Proteínas • Locomoción • Invasión • Sideróforos • Producción de Toxinas - Exotoxinas - Endotoxinas • Estrategias contra las defensas del huésped - Evasión del complemento - Interferencia de la fagocitosis  Inactivación fago-lisosoma  Resistencia a las enzimas  Inhibición de la oxidación  Escape de la vacuola - Variación antigénica - Destrucción de anticuerpos

28. Mecanismos de Resistencia del Huésped • Primera Línea de Defensa: • Barreras Anatómicas • Piel intacta, Cilias, Mucus, Peristaltismo, Reflejos de la tos y deglución, Flujo urinario e intestinal, Flora normal de las Mucosas. • Factores fisiológicos • pH bajo, Baja tensión de Oxígeno, Inhibidores químicos, Enzimas. • Segunda Línea de Defensa: • Defensa Humoral Inespecífica • Complemento, Lactoferrina, Transferrina • Fagocitosis por los PMN y Macrófagos fijos • Drenaje Linfático, Inflamación, Fiebre. • Defensa Humoral Específica • Anticuerpos, Inmunidad celular

29. Infección y Enfermedad • Infección - La bacteria accede y se establece • Enfermedad - Respuesta del huésped a la infección

30. DINÁMICA Reservorio ambiental Reservorio zoonótico Reservorio humano ENCUENTRO ENCUENTRO PENETRACIÓN ESTABLECIMIENTO MULTIPLICACIÓN DISEMINACIÓN Evasión de Las defensas DAÑO • Curación del paciente • Muerte del paciente • Portación DESENLACE Signos Síntomas Interacción huésped-bacteria

31. Diagnóstico de la infección bacteriana Diagnóstico presuntivo • Evaluación Clínica • Evaluación epidemiológica

32. DIAGNOSTICO DE LA INFECCION BACTERIANA • DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: • Sospecha clinica • Anamnesis • DIAGNOSTICO ETIOLOGICO: Muestras Clínicas • Directo: • Aislamiento e Identificación • IFD • Polisacáridos de cápsula • Secuencias de ADN • Indirecto: • Anticuerpos específicos • Variación de Título de AC en muestras pareadas

33. Diagnóstico de la infección bacteriana Diagnóstico de certeza (Diagnóstico bacteriológico) • Directo - Aislamiento en cultivo e identificación - Identificación microscópica inequívoca - Presencia de un componente bacteriano específico:  Polisacárido  Acido nucleico • Indirecto - Presencia de Anticuerpos específicos - Aumento del Título de Anticuerpos (seroconversión)

34. Cultivo e Identificación • Muestra clínica adecuada • Toma de muestra correcta • Transporte de la muestra - Aerobios - Anaerobios • Observación microscópica directa - Examen en fresco - Tinción de Gram - Tinción de Ziehl-Neelsen (AAR) - Tinciones especiales - Inmunofluorescencia directa • Cultivo - Medios de enriquecimiento - Medios de aislamiento - Medios de identificación

35. Bacterias patógenas • Cocos piogenos Gram positivos - Streptococcus spp: S. pyogenes, S. agalactiae, S. pneumoniae, etc. - Staphylococcus spp: S. aureus, S. epidermidis, etc. Gram negativos - Neisseria spp: N. meningitidis, N. gonorrhoeae, etc. - Branhamella catharralis • Bacilos gram positivos Corynebacterium spp Listeria monocytogenes Bacillus spp Clostridium spp, Bacilos anaerobios no-esporulados

36. Bacterias patógenas • Bacilos gram negativos  ¨Fastidiosos¨ - Haemophilus spp - Brucella spp Enterobacterias - Oportunistas - Patógenos entéricos  Bacilos gram (-) no fermentadores - Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumanii, etc. Vibrio spp

37. Bacterias patógenas • Actinomycetales Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium. Otros no T. Nocardia spp, Actinomyces spp • Chlamydia spp • Micoplasma y Ureaplasma • Riquetsias Bartonella spp Coxiellaburnetti, etc. • Espiroquetas Borrelia Leptospira Treponema

38. Huésped con infección bacteriana PERSONAL DE ENFERMERÍA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Obtención Procesamiento MUESTRAS CLÍNICAS MICROORGANISMOS QUE CAUSAN ENFERMEDAD TRATAMIENTO ANTIMICROBIANO

39. MUESTRAS CLINICAS PARA ESTUDIO MICROBIOLOGICO • MUESTRAS DIRECTAS: Provienen de sitios normalmente estériles • Por Punción • Por aspiración de Líquidos de Cavidades • Biopsias • MUESTRAS INDIRECTAS: Muestras emitidas: Contienen el Agente Etiológico y componentes de la Flora Normal • Cultivos cuantitativos • Cultivos Selectivos

40. CULTIVO DE ORINA • RECOLECCION DE LA MUESTRA • Niños y Adultos que controlan esfinteres: Chorro Medio • Mujeres. Higiene de Genitales y Tampón • Hombres: Higiene y Retracción del prepucio • Niños y Adultos que no controlan esfínteres: Nunca utilizar Bolsitas Colectoras. • Al acecho: Cooperación de la Madre o Personal de Enfermería • Cateterización con sonda nueva: • En Resultados controvertidos • Vejiga Neurogénica • Punción suprapúbica: Muestra Directa • Bacilos G. Negativos: Cualquier Número • Cocos G. Positivos: Rto: >100 UFCml

41. CULTIVO DE ORINA • RECOLECCION DE LA MUESTRA (Continuación) • Enfermos con Sonda vesical • Punción proximal de sonda • Recolección con sonda estéril en el recambio • MUESTRAS DISTINTAS AL CHORRO MEDIO • Primer Chorro miccional: Para investigar Chlamydia spp y Mycoplasma-Ureaplasma :solo en casos extremos de no cooperación. • Orina para investigar Mycobacterias • CONSERVACION DE LA MUESTRA • Refrigerar de inmediato: Chorro Medio, Puncion de Sonda, Orina por Cateterismo, Orina para Micobacterias. • No Refigerar y Remitir de inmediato: Punción Suprapúbica, Primer Chorro Miccional

42. MUESTRAS DE VIA AEREA SUPERIOR • EXUDADO DE FAUCES • Investigación de S. pyogenes( S.G.A.) • Cultivo • Investigación de Antigeno de S.G.A. • Cultivo de N. gonorrhoeae • EXUDADO NASAL • Solo para Cultivos de Vigilancia • PUNCIÓN-ASPIRACION DE SENOS PARANASALES Y OIDO MEDIO • Diagnostico de Sinusitis • Otitis Media

43. MUESTRAS DE VIA AEREA INFERIOR • MUESTRAS NO FBC • ESPUTO: Valoración por microscopía • Expectoración profunda • Esputo inducido • ASPIRADO TRAQUEAL: Solo en pacientes donde es peligroso obtener muestra por FBC • Cuantificación del Cultivo • MINIBAL • MUESTRAS POR FBC • LAVADO BRONQUIAL: Para Hongos y BAAR • BAL: Cuantificación Para Diagnóstico de NAR • CEPILLO ENVAINADO • BIOPSIA DE PULMON: Muestra Directa

44. HEMOCULTIVO • ¿CUÁNDO? • Antes de la administración de ATBS • En todo paciente con Fiebre( >38°C) o Hipotermia (<36°C) • En presencia de Leucocitosis (PMN >12000mm3) o Leucopenia (PMN< 4000mm3) con desviación a la izquierda • Signos diferentes en Edad avanzada y HID • Antes del pico febril

45. HEMOCULTIVO • ¿COMO? • Toma de muestra: Punción venosa Periférica • - Preparación de la piel • Limpiar la zona con torunda de algodón con alcohol 70° o Yodo-povidona SIN FROTAR. Dejar actuar 1 minuto • - Obtención de la muestra: • Con Jeringa y aguja • Con sistema de Doble punta conectado al Frasco de Hemocultivo • Inoculación de los Frascos de Sistema Automatizado • Evitar el Reflujo • No alterar la Atmósfera del interior del Frasco

46. HEMOCULTIVO • ¿CUANTO? • VOLUMEN DE SANGRE POR MUESTRA • Neonatos: 0,5 a 1 ml • Pediatría: 1 a 5 ml • Adultos: 10 ml • NUMERO DE MUESTRAS • En situaciones no urgentes 2 con intervalo de 1 hora • En situaciones de urgencia dos muestras simultaneas de dos venas diferentes: • Meningitis • Neumonia Aguda • Endocarditis y FOD: 2 muestras iniciales con intervalo de 1 hora y si al dia siguiente no hay resultados positivos repetir dos muestras de igual modo

47. HEMOCULTIVO • ¿QUÉ TIPO DE MEDIOS DE CULTIVO? • Para recuperación de Gérmenes Aerobios • Para recuperacion de Anaerobios Estrictos • Para pacientes que recibieron Antibióticos previos • Para investigar Fastidiosos: • Brucella spp • Estreptococos DN • Post Transfusión • Para investigar organismos intracelulares: • Para Hongos causales de Micosis Profundas • Para Micobacterias

48. INFECCIONES ASOCIADAS A CATETERES CENTRALES • SI HAY INDICACIÓN DE EXTRACCIÓN DEL CATETER • Hemocultivo previo a la extracción del catéter • Punta de catéter en tubo estéril seco • Eventual Punción-aspiración de flebitis • PARA EVALUACIÓN DE CATETERES DE LARGA PERMANENCIA • Retrocultivo: • Cultivo cuantitativo de un volumen de 10 ml de sangre obtenida a traves del catéter a evaluar: Lo obtiene el médico. • Cultivo cuantitativo de igual volumen de sangre de una vena periférica: Lo obtiene el personal de Laboratorio

49. MATERIAL DE HERIDAS Y TEJIDOS BLANDOS • CULTIVO CUALITATIVO: • Por Punción-Aspiración: Por piel sana • Con solución fisiológica estéril en tubo con tapa a rosca • Para cultivo de Anaerobios en Frasco TAB • Hisopo: Desaconsejable • Piezas de Tejido: • En tubos estériles con tapa a rosca: Usar un tubo para cada sitio quirúrgico diferente • Piezas de más de 1 cc no necesitan conservante • CULTIVO CUANTITATIVO: • En Frasco Estéril Previamente tapado sin añadir conservante

50. LIQUIDOS DE PUNCION • LCR • Alícuota para Cultivo en Tubo estéril • Investigación de Antígenos solo es redituable en: • Parámetros anormales y Antibióticos previos (24 hs.) • Sospecha de Meningitis por C. neoformans • LIQUIDO PERITONEAL • Peritonitis Primaria: en Tubo estéril y Frasco de Hemocultivo • Peritonitis Terciaria: en Tubo estéril • Dialisis Peritoneal • LIQUIDO ARTICULAR • Artritis Séptica • Infección secundaria a Instrumentación • Infección post-Traumatismo • Con contaminación exógena • Por mordeduras