1 / 7

Elektroforéza nukleových kyselin

Elektroforéza nukleových kyselin. Princip metody. pohyb elektricky nabitých molekul v poli stejnosměrného elektrického proudu rozdělení složek směsi dle jejich náboje velikosti prostorové struktury Použití

zubeda
Download Presentation

Elektroforéza nukleových kyselin

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Elektroforéza nukleových kyselin

  2. Princip metody • pohyb elektricky nabitých molekul v poli stejnosměrného elektrického proudu • rozdělení složek směsi dle jejich • náboje • velikosti • prostorové struktury Použití • separace NK–DNA, RNA, produkty PCR, restrikce…. -agarosové gely-horizontální uspořádání • separace proteinů, krátkých úseků NK (<100bp) - polyakryalamidové gely-vertikální uspořádání

  3. Elektroforéza na agarosovém gelu • gely slouží jako „síto“ • kratší molekuly DNA se gelem pohybují rychleji než dlouhé úseky NK Agarosa: • polysacharid z mořských řas • bílý prášek jehož vodný roztok po zahřátí a ochlazení tvoří pevný gel • dle koncentrace gelu lze separovat kratší či delší úseky DNA

  4. Směr pohybu NK !!! Postup 1) Příprava gelu: odměřené množství agarosy se rozpustí v pufru, přivede k varu,nalije do vaničky s hřebenem a nechá ztuhnout 2) Příprava vzorku: vzorek NK smísit se vzorkovým pufrem (vyšší hustota, barvičky) 3) Ze ztuhlého gelu vyjmout hřeben, gel umístit do elfo. vany s pufrem 4) Podvrstvením pod hladinu pufru se do jednotlivých jamek nanášejí vzorky 5) Připojení stejnosměrného elektrického pole 6) Detekce rozdělených NK- ethidium bromid + UV

  5. Elektroforetickáaparatura • zdroj elektrického proudu • elektroforetická vanička s pufrem • připojení ke kladnému a zápornému pólu • pufr • agarosový gel

  6. fosfodiesterová vazba fosfodiesterová vazba 2’-deoxyribosa Struktura DNA

  7. DetekceNK • interkalace ethidium bromidu do DNA • fluorescence EtBr po osvícení UV světlem

More Related