Hal akut toxicitási teszt (OECD 203)

1. Hal akut toxicitási teszt(OECD 203) Készítette: Pomucz Anna Boglárka Gruiz Katalin Környezettoxikológia előadásához

2. Teszt jellemzése A teszt során halakat használunk a vízhez adott, vizsgálni kívánt minta toxicitásának teszteléséhez. A mérés végpontja, a halak pusztulása illetve túlélése. A vizsgálat időtartama 96 óra.

3. A teszthez ajánlott fajok * Kezdőoldali képen

4. Zebrahal, Brachydanio rerio Forrás: http://blogs.nature.com/nm/spoonful/2008/03/

5. A teszthal A vizsgálatokhoz egy vagy több faj is alkalmazható. A teszthez használt halfajtákat gyakorlati kritériumok alapján érdemes megválasztani: egész évben könnyen beszerezhető legyen, problémamentesen fenntartható legyen, a vizsgálat céljainak megfelelő legyen, továbbá figyelembe kell venni minden olyan gazdasági, biológiai vagy ökológiai tényező, amelynek bármilyen hatása lehet. A halaknak jó egészségi állapotban kell lenniük, és mindenfajta látható testi hibától mentesnek kell lenniük

6. A teszthal 2. A halakat legalább 12 nappal a vizsgálat megkezdése előtt be kell szerezni és a laborban fenntartani. A vizsgálatot megelőző hét napban olyan minőségű vízben kell tartani a halakat, amilyenben a teszt is zajlani fog és az alábbi feltételeknek kell teljesülni: • világítás: napi 12–16 órás megvilágítás, • hőmérséklet: az adott fajnak megfelelő • oldott oxigén koncentrációja: a levegőtelítettségi érték legalább 80 %-a, • etetés: háromszor hetente vagy naponta, 24 órával a teszt megkezdése előttig

7. Szivárványos guppifajták: Poecilia reticulata Forrás: http://diszhalak-oldala.hupont.hu/11/megtobb-kep

8. Méréshez szükséges készülékek Minden készüléket kémiailag inert anyagból kell készíteni: • oxigénmérő, • vízkeménység meghatározására szolgáló berendezés, • megfelelő készülék a hőmérséklet szabályozásához.

9. Hasznos információk a vizsgált anyagról • az anyag vízoldékonysága • gőznyomása • kémiai szerkezete • az anyag tisztasága • kémiai stabilitása • disszociációs állandói • biológiai lebonthatósága A fentiek fontos információk annak érdekében, hogy a legmegfelelőbb vizsgálati módszert lehessen kiválasztani (statikus, félstatikus vagy átfolyásos módszer) és a vizsgálat időtartama alatt a vizsgált anyag kielégítően állandó koncentrációja biztosítható legyen.

10. Vizsgálat érvényessége Ahhoz, hogy a vizsgálat érvényes legyen, a következő feltételeknek kell teljesülniük: • A kontrollcsoportban a kísérlet végéig a halpusztulásnak nem szabad 10%-nál nagyobbnak lennie (vagy maximum egy hal pusztulhat el, ha tíznél kevesebb halat használnak). • Állandó feltételeket kell fenntartani amennyire csak lehet az egész vizsgálat során, és ha szükséges, félig statikus vagy átfolyásos eljárásokat kell alkalmazni. • Az oldott oxigén koncentrációjának mindvégig nagyobbnak kell lennie, mint a levegőtelítettségi érték 60%-a. • A vizsgált anyag koncentrációit a kísérlet során mindvégig a kezdeti koncentráció 80%-án belüli értéken kell tartani.

11. Kékkopoltyús naphal: Lepomis macrochirus Forrás: http://www.cacaponriver.org/news/newsletter2003-3.htm

12. A vizsgálat menete

13. Alkalmazandó módszer meghatározása Típusát tekintve háromféle eljárás használható: • Statikus vizsgálat: Ez olyan toxicitásvizsgálat, amelyben a vizsgált oldat nem áramlik (az oldatok mindvégig változatlanok maradnak). • Félstatikus vizsgálat: A vizsgált oldat áramlása nélküli vizsgálat, amelynél rendszeresen, adagonként ki kell cserélni a vizsgált oldatokat hosszabb időtartamok (pl.: 24 óra) eltelte után. • Átfolyásos vizsgálat: Olyan toxicitásvizsgálat, amelyben a vizet állandóan cserélik a vizsgálati kamrákban.

14. Hígítási sor elkészítése El kell készíteni a szükséges erősségű törzsoldato(ka)t majd a vizsgálni kívánt koncentrációkat a törzsoldat hígításával kell elkészíteni. A hígításhoz használható jó minőségű természetes víz vagy művíz illetve ivóvíz is, melynek keménysége 10 és 250 mg/l közötti (CaCO3-ra meghatározva), pH-ja pedig 6,0 és 8,5 között van. Ultrahangos diszpergálás, szerves oldószerek, emulgeáló- vagy diszpergálószerek használhatók alacsony vízoldékonyságú anyagok törzsoldatainak elkészítéséhez. Valamilyen segédanyag használata esetén, a kontrollhalakat is ki kell tenni a segédanyag ugyanolyan koncentrációjának, mint amelyet a vizsgálati sorozatokban alkalmaztunk. Segédanyag maximum koncentrációja:100 mg/liter a vizsgált közegben. A vizsgálatot a pH-érték beállítása nélkül kell végrehajtani. Ha létezik bizonyíték a pH-érték jelentős változására, ajánlatos a vizsgálat megismétlése a pH-érték beállításával.

15. Teszt-körülmények • Teszt időtartam: 96 óra, • állatok száma: koncentrációnként és a kontrollban is legalább 7 egyed • egyedsűrűség: 1 g hal/liter ajánlott a statikus és a félstatikus vizsgálatokhoz; az átfolyásos rendszerekhez elfogadható ennél nagyobb egyedsűrűség is • vizsgált koncentráció: legalább 5 olyan koncentráció esetén szükséges a vizsgálat, amelyek mértani sorozatának tényezője nem haladja meg a 2,2-et és szükséges a kontroll minta vizsgálata is • világítás: 12–16 órás megvilágítás naponta, • hőmérséklet: a használt fajtáknak megfelelő, de minden esetben ± 1 °C-on belül, • oldott oxigén koncentrációja: a levegőtelítettségi érték nem kevesebb, mint 60 %-a, levegőztetés használható, ha nem okoz veszteséget a vizsgált anyag mennyiségében • etetés: nincs • zavarás: a halak viselkedését befolyásoló tényezőket ki kell zárni.

16. Észrevételek A halakat a teszt megkezdését követő 3. és 6. órában, majd 24., 48., 72. és 96. órában meg kell vizsgálni, a pusztulásokat feljegyezni és az elpusztult halakat el kell távolítani. A halak akkor tekinthetők élettelennek, ha a farokúszó érintése nem vált ki reakciót, és nem látható semmilyen mozgás. Nyilvántartást kell vezetni a látható rendellenességekről (például egyensúlyvesztés, az úszási viselkedés és a légzés változásai, pigmentáció stb.). Naponta mérni kell a pH-értéket, az oldott oxigén koncentrációt és a hőmérsékletet.

17. Adatok értékelése Minden olyan időtartamhoz, amikor fel lettek jegyezve megfigyelések (24, 48, 72 és 96 óra) meg kell határozni a kontrollhoz viszonyított százalékos pusztulásokat, majd ezt a koncentráció logaritmusának függvényében fel kell rajzolni. H=pusztulási/letlitási százalék(%) N k=a kontrollban életben maradt állatok száma(db) Nminta =a mérendő mintában életben maradt állatok száma (db) Minden egyes megfigyelési időhöz meg kell becsülni az LC50-et (50%-os pusztuláshoz tartozó koncentráció) és a hozzá tartozó (p=0,95) megbízhatósági tartományt.

18. Rizshal és rizshal-embriók: Oryzias latipes Forrás: http://www.biol.s.u-tokyo.ac.jp/users/hassei/English/research%20E/research%20E.html

19. Forrás: • OECD GUIDELINE FOR TESTING OF CHEMICALS 203 –Fish, Acute Toxicity Test Kép: • http://1.bp.blogspot.com/_AamNOe-sLvQ/SXeIcwHoltI/AAAAAAAAACM/bvmpPvTKq4o/s320/Szivárványos+pisztráng.png