370 likes | 788 Views
Les outils du Diagnostic de l’Infection à VIH. Dr Florence Damond Laboratoire de Virologie Hôpital Bichat Claude Bernard. Les outils du diagnostic des infections VIH. Diagnostic Direct : le virus Antigénémie p24 Isolement lymphocytaire et plasmatique
E N D
Les outils du Diagnostic de l’Infection à VIH Dr Florence Damond Laboratoire de Virologie Hôpital Bichat Claude Bernard
Les outils du diagnostic des infections VIH Diagnostic Direct : le virus • Antigénémie p24 • Isolement lymphocytaire et plasmatique • Mise en évidence des acides nucléiques sous forme d ’ADN proviral ou d ’ARN plasmatique Diagnostic Indirect : • Mise en évidence des anticorps anti-VIH
Diagnostic de l’infection VIH 1- Adulte : sérologie et dans le cas de la primo-infection ou de variants (ARN viral+Acs,ADN),. 2- Nouveau né : Mise en évidence du virus et/ou de l ’ADN proviral dans les lymphocytes (+ARN pl)
Tests de dépistage des Anticorps anti-VIH 1985 Lysats de cellules infectées par VIH-1Faux négatifs, et spécificité médiocre 1986 Antigènes recombinants et peptides de synthèse 1987 Tests mixtes de détection des anticorps anti-VIH1 et VIH2 1991 Tests: - Sensibilité +++ - Spécificité +++ 1997 Tests combinés détectant Acs anti-VIH1, Acs anti-VIH2 et Ag p24. Ag VIH1 groupe M sous type B et VIH1 groupe O Ag VIH2 sous-type A
Diagnostic indirect Enzyme linked immunoassay (ELISA) Système de lecture Système de révélation 2eme Ac marqué Sérum patient Ag viral [Traité de virologie médicale, Huraux, Agut, Nicolas, Peigue-Lafeuille]
Détection des Anticorps anti VIH • Technique Elisa • La plus utilisée • Simple • Rapide • Reproductibilité • Sensibilité++++ • Spécificité+++ • Adaptée à de grandes séries • Coût limité
Dépistage combiné : Ac + Ag (Vidas : HIV Duo)Test unitaire Sérum patient Utilité ++ pour diagnostic de primo-infection
Tests unitaires rapides de détection des anticorps anti VIH-1 et anti VIH-2 • Ne nécessitent pas « d’équipements » de laboratoire • 10-20 mn • Lecture visuelle • Sensibilité « légèrement » inférieure aux nouvelles techniques Elisa (séro-conversions) • Aide au diagnostic d’urgence et en situation de détresse matérielle. • France : en association obligatoire avec les tests Elisa • Utilisés en cas d’AES ou RESI • Cout + élevé : 29 euros vs 1.30 euro le test ELISA
Détection des Anticorps anti VIHImmuno-Diffusion Test rapide positif négatif
TESTS DE DÉPISTAGE DES ANTICORPS ANTI-VIH-1 ET VIH-2 • Agrément par l’AFSSAPS : • Sensibilité • - panels de séroconversions VIH-1 (50) • - VIH-1 groupe M sous types ( 150) • - VIH-2 ( 50) • - VIH-O ( 10) • Spécificité: 2000 sérums • Réévaluation périodique des tests par AFSSAPS • Contrôle de qualité des laboratoires, obligatoire, tous les 6 mois.
Immuno-empreinte = Western-blot (WB) • Analyse de la spécificité Antigénique des Ac Spécificité > ELISA mais Sensibilité < ELISA • Fractionnement préalable des Protéines virales • électrophorèse dénaturante sur gel de polyacrylamide) + • transfert sur un support (nitrocellulose, Nylon) autorisant ELISA
Tests de confirmation: WB ou Immunoblot • Confirme une séropositivité VIH-1 • permet de soupçonner une primo-infection VIH-1 • voire une séropositivitéVIH-2. Critères de positivité (France) 2 env + gag ou pol Env: gp160, gp120, gp41 Gag: p55, p40, p24, p18 Pol: p68, p52, p34
Critères d’interprétation des Western Blots OrganisationCritères Positivité (au minimum)Négativité Organisation Mondiale de la Santé 2 bandes env Aucune bande Centers for Disease Control 2 bandes parmi les: p24, gp41, gp120/160 Aucune bande Consortium pour la standardisation 1 bande p24 ou p32 et Aucune bande de la Sérologie des Rétrovirus 1 bande gp41 ou gp120/160 Croix-Rouge Américaine Au moins une bande de Aucune bande gag, pol et env Food & Drug Administration p24, p32, et gp41 ou gp120 Aucune bande Les profils ne remplissant ni les critères de positivité ni les critères de négativité sont considérés comme « Indéterminés ».
Algorithme sérologique Prélèvement n°2 Prélèvement n°1 Dépistage Dépistage (2 tests) (2 tests) –/– +/+ ou +/– Déclaration obligatoire Absence d’infection en l’absence d’exposition de moins de 3 mois WB ou IB VIH1 Négatif ou indéterminé Positif Infection à VIH Infection récente ? • Ag p24 ou ARN VIH au mieux Différenciation VIH-1 - VIH-2 VIH2 ? WB VIH2 • Faux positif ? 2è pvt • pvt Erreur tube ? 2è • Variant ? Tests spécialisés •
WB ou Immunoblot VIH-1 indéterminé? • Séroconversion VIH-1? • Infection par VIH-2? • Erreur de tube? • Variant?
Diagnostic sérologique des infections par VIH-2 • Basé sur stratégie identique à celle VIH-1 • La réactivité croisée par WB est un problème pour confirmer ou infirmer une infection par VIH-2. • Une stratégie utilisant des protéines spécifiques VIH-1 ou VIH-2 avec des tests évitant la réactivité croisée est nécessaire. • Pas de critères sérologiques pour les doubles infections VIH-1/VIH-2 • détection génomique +++
Différenciation Acs VIH1 / VIH2 • La différenciation entre Acs anti VIH-1 et VIH-2 n’est pas une obligation légale • Recommandée par le groupe ANAES (2000) • Peptides synthétiques spécifiques de chacun des 2 virus
WB HIV-1 WBHIV-2 Infection par VIH-2 VIH-2 sous type A Sous types A VIH-2 sous type A’ Sous types B VIH-2 sous type B
Doubles séropositifs VIH-1 et VIH-2 • Double réactivité sur les WB VHI-1 et VIH-2 • Double réactivité sur les peptides synthétiques VIH-1 et VIH-2 • Double infection ou réaction sérologique croisée ? • PCR VIH-1 et PCR VIH-2
DIAGNOSTIC DE LA PRIMO-INFECTION • Mesure de l’ARN-VIH plasmatique: B300 • Marqueur le plus précoce • Détectable 8 - 17 j après le contage • Au moment du pic : 102 à 107 copies/ml d • Tests commerciaux: quantification VIH-1 seulement • Problème pour variants VIH-1 du groupe O et VIH-2 • traitement équilibre à M4-M6.
Cinétique des marqueurs viraux lors de la primo-infection anti gp 160 gp 120 gp 41 set point Limite de détection des marqueurs 0 exposition 11-12 14-15 20-21 28-29 Temps (jours) ARN VIH plasmatique Antigénémie p24 ADN PROVIRAL Anticorps anti VIH ELISA Fenêtre Sérologique Anticorps anti VIH : WB
Diagnostic précoce de l’infection chez l’enfant né de mère séropositive • Transmission 1 % avec tmt prophylactique • 20-30% in utéro • 70-80% en péri-partum • Prélèvements de l ’enfant:première semaine, 1 mois, 3 mois et 6 mois de vie • Techniques • Isolement de virus à partir des lymphocytes • détection de l ‘ARN plasmatique • détection de l ’ADN proviral lymphocytaire par PCR • 2 PCR successives positives • ARN viral négatif avant l ’âge de 3-6 mois en cas de traitement