1 / 27

Les outils du Diagnostic de l’Infection à VIH

Les outils du Diagnostic de l’Infection à VIH. Dr Florence Damond Laboratoire de Virologie Hôpital Bichat Claude Bernard. Les outils du diagnostic des infections VIH. Diagnostic Direct : le virus Antigénémie p24 Isolement lymphocytaire et plasmatique

arty
Download Presentation

Les outils du Diagnostic de l’Infection à VIH

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Les outils du Diagnostic de l’Infection à VIH Dr Florence Damond Laboratoire de Virologie Hôpital Bichat Claude Bernard

  2. Les outils du diagnostic des infections VIH Diagnostic Direct : le virus • Antigénémie p24 • Isolement lymphocytaire et plasmatique • Mise en évidence des acides nucléiques sous forme d ’ADN proviral ou d ’ARN plasmatique Diagnostic Indirect : • Mise en évidence des anticorps anti-VIH

  3. Diagnostic de l’infection VIH 1- Adulte : sérologie et dans le cas de la primo-infection ou de variants (ARN viral+Acs,ADN),. 2- Nouveau né : Mise en évidence du virus et/ou de l ’ADN proviral dans les lymphocytes (+ARN pl)

  4. Tests de dépistage des Anticorps anti-VIH 1985 Lysats de cellules infectées par VIH-1Faux négatifs, et spécificité médiocre 1986 Antigènes recombinants et peptides de synthèse 1987 Tests mixtes de détection des anticorps anti-VIH1 et VIH2 1991 Tests: - Sensibilité +++ - Spécificité +++ 1997 Tests combinés détectant Acs anti-VIH1, Acs anti-VIH2 et Ag p24. Ag VIH1 groupe M sous type B et VIH1 groupe O Ag VIH2 sous-type A

  5. Diagnostic indirect Enzyme linked immunoassay (ELISA) Système de lecture Système de révélation 2eme Ac marqué Sérum patient Ag viral [Traité de virologie médicale, Huraux, Agut, Nicolas, Peigue-Lafeuille]

  6. Détection des Anticorps anti VIH • Technique Elisa • La plus utilisée • Simple • Rapide • Reproductibilité • Sensibilité++++ • Spécificité+++ • Adaptée à de grandes séries • Coût limité

  7. Dépistage combiné : Ac + Ag (Vidas : HIV Duo)Test unitaire Sérum patient Utilité ++ pour diagnostic de primo-infection

  8. Tests unitaires rapides de détection des anticorps anti VIH-1 et anti VIH-2 • Ne nécessitent pas « d’équipements » de laboratoire • 10-20 mn • Lecture visuelle • Sensibilité « légèrement » inférieure aux nouvelles techniques Elisa (séro-conversions) • Aide au diagnostic d’urgence et en situation de détresse matérielle. • France : en association obligatoire avec les tests Elisa • Utilisés en cas d’AES ou RESI • Cout + élevé : 29 euros vs 1.30 euro le test ELISA

  9. Détection des Anticorps anti VIHImmuno-Diffusion Test rapide positif négatif

  10. TESTS DE DÉPISTAGE DES ANTICORPS ANTI-VIH-1 ET VIH-2 • Agrément par l’AFSSAPS : • Sensibilité • - panels de séroconversions VIH-1 (50) • - VIH-1 groupe M sous types (­ 150) • - VIH-2 (­ 50) • - VIH-O (­ 10) • Spécificité: 2000 sérums • Réévaluation périodique des tests par AFSSAPS • Contrôle de qualité des laboratoires, obligatoire, tous les 6 mois.

  11. Immuno-empreinte = Western-blot (WB) • Analyse de la spécificité Antigénique des Ac Spécificité > ELISA mais Sensibilité < ELISA • Fractionnement préalable des Protéines virales • électrophorèse dénaturante sur gel de polyacrylamide) + • transfert sur un support (nitrocellulose, Nylon) autorisant ELISA

  12. Tests de confirmation: WB ou Immunoblot • Confirme une séropositivité VIH-1 • permet de soupçonner une primo-infection VIH-1 • voire une séropositivitéVIH-2. Critères de positivité (France) 2 env + gag ou pol Env: gp160, gp120, gp41 Gag: p55, p40, p24, p18 Pol: p68, p52, p34

  13. Western Blot ou Immunoblot (HIV confirmation)

  14. Critères d’interprétation des Western Blots OrganisationCritères Positivité (au minimum)Négativité Organisation Mondiale de la Santé 2 bandes env Aucune bande Centers for Disease Control 2 bandes parmi les: p24, gp41, gp120/160 Aucune bande Consortium pour la standardisation 1 bande p24 ou p32 et Aucune bande de la Sérologie des Rétrovirus 1 bande gp41 ou gp120/160 Croix-Rouge Américaine Au moins une bande de Aucune bande gag, pol et env Food & Drug Administration p24, p32, et gp41 ou gp120 Aucune bande Les profils ne remplissant ni les critères de positivité ni les critères de négativité sont considérés comme « Indéterminés ».

  15. Algorithme sérologique Prélèvement n°2 Prélèvement n°1 Dépistage Dépistage (2 tests) (2 tests) –/– +/+ ou +/– Déclaration obligatoire Absence d’infection en l’absence d’exposition de moins de 3 mois WB ou IB VIH1 Négatif ou indéterminé Positif Infection à VIH Infection récente ? • Ag p24 ou ARN VIH au mieux Différenciation VIH-1 - VIH-2 VIH2 ? WB VIH2 • Faux positif ? 2è pvt • pvt Erreur tube ? 2è • Variant ? Tests spécialisés •

  16. WB ou Immunoblot VIH-1 indéterminé? • Séroconversion VIH-1? • Infection par VIH-2? • Erreur de tube? • Variant?

  17. Diagnostic sérologique des infections par VIH-2 • Basé sur stratégie identique à celle VIH-1 • La réactivité croisée par WB est un problème pour confirmer ou infirmer une infection par VIH-2. • Une stratégie utilisant des protéines spécifiques VIH-1 ou VIH-2 avec des tests évitant la réactivité croisée est nécessaire. • Pas de critères sérologiques pour les doubles infections VIH-1/VIH-2 • détection génomique +++

  18. Différenciation Acs VIH1 / VIH2 • La différenciation entre Acs anti VIH-1 et VIH-2 n’est pas une obligation légale • Recommandée par le groupe ANAES (2000) • Peptides synthétiques spécifiques de chacun des 2 virus

  19. WB HIV-1 WBHIV-2 Infection par VIH-2 VIH-2 sous type A Sous types A VIH-2 sous type A’ Sous types B VIH-2 sous type B

  20. Doubles séropositifs VIH-1 et VIH-2 • Double réactivité sur les WB VHI-1 et VIH-2 • Double réactivité sur les peptides synthétiques VIH-1 et VIH-2 • Double infection ou réaction sérologique croisée ? • PCR VIH-1 et PCR VIH-2

  21. DIAGNOSTIC DE LA PRIMO-INFECTION • Mesure de l’ARN-VIH plasmatique: B300 • Marqueur le plus précoce • Détectable 8 - 17 j après le contage • Au moment du pic : 102 à 107 copies/ml d • Tests commerciaux: quantification VIH-1 seulement • Problème pour variants VIH-1 du groupe O et VIH-2 • traitement équilibre à M4-M6.

  22. Cinétique des marqueurs viraux lors de la primo-infection anti gp 160 gp 120 gp 41 set point Limite de détection des marqueurs 0 exposition 11-12 14-15 20-21 28-29 Temps (jours) ARN VIH plasmatique Antigénémie p24 ADN PROVIRAL Anticorps anti VIH ELISA Fenêtre Sérologique Anticorps anti VIH : WB

  23. Diagnostic précoce de l’infection chez l’enfant né de mère séropositive • Transmission  1 % avec tmt prophylactique • 20-30% in utéro • 70-80% en péri-partum • Prélèvements de l ’enfant:première semaine, 1 mois, 3 mois et 6 mois de vie • Techniques • Isolement de virus à partir des lymphocytes • détection de l ‘ARN plasmatique • détection de l ’ADN proviral lymphocytaire par PCR • 2 PCR successives positives • ARN viral négatif avant l ’âge de 3-6 mois en cas de traitement

More Related