IDENTIFICA REA ANTICORPILOR DE BAZĂ

1. IDENTIFICAREA ANTICORPILOR DE BAZĂ Jean Purcelli, MT (ASCP)SBB Centrul de Sânge al Pacificului

2. Există două tipuri de anticorpi eritrocitari ne-așteptați. Alo-anticorpicare pot apărea în rezultatul: Transfuziei Gravidității Transplantului Injectării cu material imunogenic Material I.V. sau I.M., cum ar fi IVIg sau RhIg (dobândiți pasiv) Auto-anticorpicare apar în urma anumitor boli sau tratamente medicale.

3. Alo-anticorpiipot fi detectați la aproximativ 0.3%-5% din populația generală. Incidența lor va crește, dacă se vor lua în calcul și persoanele care au fost anterior transfuzate sau gravide. Incidența este afectată de Anti-genicitate Prevalența antigenei în populație Statutul sistemului imunitar

4. Anti-A și Anti-B sunt exemple deanticorpi care apar în mod natural și aceștia sunt așteptați. Lewis (Anti-Lea, Leb), -P1, -M, -N sunt anticorpi ne-așteptați, dar pot apărea în mod natural. Anticorpii apăruți în mod natural sunt rezultatul antigenelor de mediu, bacteriale sau virale, care sunt similare antigenelor grupelor de sânge.

5. Un Alo- anticorp este important din punct de vedere Clinic Daca a cauzat reacții hemolitice la transfuzie. Daca a dus la îmbolnăvirea și a afectat supraviețuirea eritrocitelor transfuzate. Dacă a cauzat boala hemolitică a fătului sau nou-născutului (BHFN).

6. Ne concentrăm atenția asupra identificării a 13 alo-anticorpi care sunt întâlniți de obicei și care au importanță clinica: Sistemul de anticorpi Rh: D C E c e f Sistemul de anticorpi Kell: K Sistemul de anticorpi Duffy: Fya Fyb Sistemul de anticorpi Kidd: Jka Jkb Sistemul de anticorpi MNSs: S s uneori M (reacționează la 37ºC sauTIA)

7. Fără importanță clinică Se mai întâlnesc și unii alo-anticorpi și auto-anticorpi care nu sunt importanți din punct de vedere clinic. Alo-anti-M(reacționează numai sub 37ºC),-N, -P1, -Lea, -Leb, -A1în general reacționează la temperaturi mai joase de 37ºC și de obicei nu au importanță clinică. De obicei se transfuzează eritrocite compatibile. Auto-anti-I și –HI sunt deseori întâlniți atunci când testarea se efectuează la temperatura camerei sau temperaturi mai joase.

8. Un panel pentru eritrocite este un set pentru detectarea anticorpilor, cu 8-10 celule pentru identificarea celor mai des întâlniți anticorpi. Faceți copii ale ambelor părți ale Listelor Master când acestea sosesc, un set nou va sosi o dată la 2-4 săptămâni. Tabelele de instruire sunt folosite drept tabele de lucru. Numărul de lot de pe panel trebuie să coincidă cu numărul de lot înscris pe tabelul de instruire. Utilizați celule datate de fiecare dată când este posibil. Panelurile pentru eritrocite și Tabelele de Instruire

9. Panelul este făcut pentru a conține câteva soluții homozigote ale antigenelor, cu excepțiaP1. Soluțiile homozigoteK, Kpa, Jsa,șiLuasunt rareori plasate pe stativ. Alături de Număr, urmează o coloană pentru Tipuri Speciale. Mai sunt coloane pentru antigene Foarte Frecventek, Kpb, Jsb, Lub. Celulele negative pentru aceste antigene există rareori pe stative. Există o înscriere în partea stângă jos, care enumeră câteva alte antigene foarte frecvente, pentru care fiecare celulă a fost tipizată:I, Ge, Yta, Tja, Vel, Coa, Dib. Sunt coloane pentru cinci antigene Foarte Rare:V, Cw, Kpa, Jsa, Lua. În plus, există o înscriere în colțul din stânga jos, care enumeră alte câteva antigene foarte rare, pentru care fiecare celulă a fost tipizatăMg, Vw, Dia, Wra. Pe cealaltă parte este o altă listă a Tipizărilor Lărgite și înscrieri. Panelurile cu tabelele de Instruire

10. Obținerea Fișei Medicale și Fișei de Transfuzie Vârsta: poate afecta determinarea tipului ABO Genul Originea etnică: unele populații nu au unele antigene foarte frecvente Diagnoză: unele boli sunt asociate cu unii anticorpi; AHAI caldă și rece Transfuzii și Gravidități:câte transfuzii, când, numărul de gravidități Medicație Soluții intravenoase Verificați informația referitor la istoria anticorpilor sau reacțiilor la transfuzie sau BHFN FAZA PRE-TESTARE

11. FAZA PLANIFICĂRII TESTĂRII Fiecare instituție trebuie să dispună de un plan pentru testarea anticorpilor. Un plan oferă consistență și ghidare generală pentru efectuarea identificării anticorpilor. Un exemplu de plan: Folosiți o fișă, tabele si un suport special cu celule. Obțineți fișa pacientului. Verificați existența testărilor anterioare. Grupa de sânge și Rh-ul. TDA (opțional) Stativul Inițial, utilizați soluție catalizator obișnuită de tip LISS. Efectuarea unui test la Rece este opțional, dar poate oferi informație importantă. După identificare, verificați prezența altor anticorpi. Daca pacientul nu a fost transfuzat în ultimul timp, efectuați determinarea parțială sau complexă a fenotipului . Înscrieți concluziile, recomandările și raportul final. Etapele 4-7 pot fi efectuate simultan.

12. SISTEMUL DE TESTARE Majoritatea sistemelor de testare includ utilizarea unei soluții de verificare și anti-globulinei. Testarea cu celule panel se efectuează la 37ºC, se verifică aglutinarea sau hemoliza și se efectuează testul cu anti-globulină. Se recomandă efectuarea unui test la rece cu Celule de Control și un auto-control (cu soluție fiziologică).

13. Soluție fiziologică: Standard. Utilizați celulele panel și celulele de control direct din sticluță. Optați pentru un timp mai îndelungat la 37º. Util pentru identificarea auto-anticorpilor reci sau calzi. LISS: Soluție slab ionizată. Primul nivel în testarea anticorpilor, sporește sensibilitatea. Necesită mai puțin timp la 37º. Poatedetecta anticorpi nedoriți, rece și cald. LISS poate fi procurat de la producător, drept aditiv. SAU LISS poate fi preparat pe loc, și e mai ieftin. Reagentul preparat pe loc nu este catalogat drept aditiv.Este nevoie de a spăla celulele testate cu LISS și de a le re-suspenda 2% în LISS. Proporția celulelor suspendate în LISS față de plasma este importantă, și necesită o POS diferită. PEG: Polyethylene glycol. Al doilea nivel în testarea anticorpilor. Oferă o sporire chiar mai mare decât LISS. 15 minute la 37º. Sporește anticorpii ne-doriți, la rece și cald. PEG poate fi procurat de la producător, drept aditiv . OR PEG poate fi preparat pe loc, și e mai ieftin; necesită o POS diferită. Un amestec de PEG-celule-plasmă nu se centrifughează niciodată și aglutinarea nu se verifică la 37º. Dar se spală imediat de 4 oriși se efectuează testul cu anti-globulină.

14. FAZA ANALITICĂ Se exclude specificitatea reacțiilor negative utilizând metoda încrucișată. Un singur anticorp creează, de obicei, un model clar. Sunt importante atât reacțiile pozitive, cât și cele negative. Rezultatele obținute trebuie să corespundă cu anticorpii celulelor de control. Verificați existența altor anticorpi posibili. S-ar putea să aveți nevoie de un stativ cu celule. Când a(u) fost identificat(-ți) anticorpul(-ii), următoarea etapă este confirmarea identității, determinând tipul antigenelor eritrocitare ale pacientului .

15. Pentru a mări probabilitatea identificării corecte, se observă o valoarep de<0.05care dă un interval de încredere de 95%. Plasma pacientului este pozitivă cu 2 celule cu antigene pozitive și negativă cu 2 celule cu antigene negative. Pentru a spori probabilitatea verificării corecte, plasma pacientului nu trebuie să reacționeze cu cel puțin una din celulele cu expresia homozigotă a acestei antigene sau două celule cu expresie heterozigotă, în cazul când lipsesc celulele homozigote. P1, K, C, când Anti-D este prezent E când Anti-D este prezent.

16. Un posibil anticorp poate fi de asemenea verificat prin tipizarea antigenei. Dacă celulele unei persoane sunt pozitive la o antigenă, persoana dată nu va produce anticorpul corespunzător. Excepții:Există mai multe cazuri când persoanele cu D+ produc anti-D și mulți anticorpi își arată specificitatea în sistemul Rh, în special -e.

17. În general, persona care are antigenă negativă este capabilă să producă anticorp. Sistemul de anticorpi Lewis face excepție: Numaipersoanele Le(a-b-) pot produce anticorpi Lewis de orice tip.

18. Dacă nu se observă un model clar, atunci se analizează: Anticorpii multipli: D+C, sau D+E, sau E+K Un anticorp care sa demonstreze doza Unele antigene au expresii variate la diferiți indivizi: P1, I, HTLA Reacții ne-dorite din cauza auto-anticorpilor calzi și reci. Se efectuează TDA sau auto-controlul și testarea anticorpilor reci, pentru a găsi vreun indiciu.

19. Anticorpii multipli Există câteva abordări diferite în cazul anticorpilor multipli, care pot include determinarea fenotipului celulelor autologe, selectarea panelului cu celule, neutralizarea, tratarea panelului cu celule cu enzime și adsorbția. la moment, ne vom concentra atenția asupra metodei cele mai eficiente: o combinație între determinarea fenotipului și celulele selectate. Vom face referire la tratamentul cu enzime a panelului de celule drept o metodă posibil de utilizat. Determinarea complexă a fenotipului este o metodă costisitoare și trebuie să fie utilizată moderat. De la fenotip, se poate afla care anticorpi sunt posibili și care pot fi excluși. După care se creează un panel cu celule să se testează.

20. Panelul cu celule selectate Folosiți un panel cu celule selectat. Celulele selectate sunt alese din alt panel sau celule de control pentru a confirma sau a elimina anticorpii posibili. Celulele selectate trebuie să fie pozitive (+) la antigena bănuită și negative (0) la celelalte. Alegeți expresii homozigote oricând este posibil. Înregistrați antigenele + și 0 și includeți numărul de lot al panelului, numărul donatorului și numărul sticluței pentru fiecare celulă aleasă. Testați cu PEG și LISS. Analizați rezultatele.

21. Enzimele proteolitice Cele două etape tehnice cu folosirea soluțiilor fictin sau papain pentru pre-tratarea eritrocitelor sunt foarte utile. Enzimele sunt folosite pentru a întări sau distruge antigenele unei anumite grupe de sânge. Enzimele tehnice sunt utile la sortarea anticorpilor multipli, întărirea anticorpilor slabi, oferă indicii pentru identificarea anumitor anticorpi după antigenele cu prevalență înaltă și pot fi utilizate la efectuarea anumitor proceduri de adsorbție. Pre-testarea panelului cu celule ia în jur de 10 minute, apoi se adaugă serul și se pune la 37º pentru 30 minute. Cu papain, se observă deseori “pan-aglutinarea” la 37º și are loc dezagregare, dacă se verifică cu toate celulele, inclusiv și în cazul efectuării autocontrolului. Pot duce la prevenirea reacțiilor ne-dorite, cauzate de către alo- sau auto- anticorpii reci și anticorpii calzi.

22. Antigenele distruse:M, N, S, Fya, Fyb.S miceste variabilși trebuie tratată cu anti-s Antigeneleîntărite:Rh: D, E, c, e, f, șitoate antigenele Rh.Jka, Jkb. Antigenelene-schimbate:K, k și toate antigenele Kell.

23. TDA POZITIV Eritrocitele s-au coagulatin vivo. În cazul reacției la transfuzie, celulele transfuzate au fost coagulate de către imuno-globulineși reacția poate fi slabă. În cazul Anemiei Hemolitice Auto Imune la Cald, eritrocitele sunt coagulate numai de către IgG sau de IgG și C3, și reactivitatea e foarte puternică. În cazul Bolii Aglutinin la Rece, eritrocitele sunt coagulate de către C3. În cazul BHFN, anticorpul mamei traversează placenta și duce la coagularea eritrocitelor fătului.

24. Celulele coagulate de IgG (TDA pozitiv) nu pot fi tipizate cu anti-AHG. Re-agenții mono-clonali pot fi folosiți cu încredere. Pentru a testa Fya, Fyb, Jka, Jkb, S, s; celulele trebuie să fie tratate mai întâi cuglicin-HCI-EDTA (EgA), pentru a înlătura IgG-ul lipit. Glicin-HCI-EDTA distruge toate antigenele Kell; de aceea nu poate fi efectuată testarea la K sau k.

25. Se face o eluțiune și eluantul se testează, în cazul în care pacientul a fost transfuzat recent. Dacă pacientul nu a fost transfuzat recent, nu se face eluțiunea, decât în cazul în care acest lucru este cerut.

26. AUTOANTICORPII – RECI ȘI CALZI Autoanticorpii recisunt de obicei non-patologici și sunt considerați “normali” dacă reacționează doar la 4ºC. Autoanticorpii reci normali pot avea specific anti-I sau anti-IH, dar identitatea lor nu este importantă. Autoanticorpii reci patologici au o gamă termală mai largă, reacționează la TC, 37º, și la AGU. La pacienții cu Boala Aglutinină Rece, eritrocitele se coagulează cu componentele complementului (C3).

27. Aglutininele reci patologice pot cauza dificultăți determinarea corectă a tipului celulelor.Încălziți o sticluță cu soluție fiziologică la 37º în baia de apă. Pre-spălați eritrocitele de câteva ori cu soluție fiziologică încălzită înainte de a efectua testarea. Aglutininele reci, care au o gamă termală mai largă, pot necesita Auto-absorbție Rece și tehnici de pre-spălare cu soluție fiziologică.

28. Autoanticorpii calzipot cauza hemoliza lentă sau rapidă. Pacienții devin anemici și pot avea nevoie de transfuzii. TDA este pozitiv la IgG saula ambele IgG și C3. Plasma reacționează cu toate celulele panel. Autoanticorpii calzi pot “masca” sau ascunde alo-anticorpii existenți.

29. Eritrocitele TDA pozitive pot fi testate cu re-agenți mono-clonali. Pentru a testa serul, în cazul testului cu anti-globulină, eritrocitele trebuie mai întâi tratate cu Glicin-HCI-EDTA. Auto-adsorbția caldă este folosită pentru a înlătura autoanticorpii. Există mai multe metode disponibile. Auto-adsorbția PEG este cea mai eficientă și cea mai ieftină. Auto-adsorbția poate fi efectuată numai în cazul în care pacientul nu a fost transfuzat recent.

30. Post identificarea De fiecare dată când se detectează sau identifică un alo- sau autoanticorp, trebuie să se efectueze testul complet cu anti-globulină (TAG). Găsiți eritrocitele care sunt “negative la antigene” efectuând mai întâi testul complet cu anti-globulină. Selectați unitățile și tipul compatibil după antigenă folosind antiserul preparat. Unitatea (-țile)vor fi etichetate ca fiind negative la antigene și compatibile. Când un anticorp a fost identificat drept anti-P1, -Lea, -Leb, -M, sau N, nu este necesar de a efectua testul cu anti-globulină pentru a determina compatibilitatea. În cazul pacienților cu autoanticorpi la cald, nu se va efectua TAG, iar unitățile vor fi etichetate drept Incompatibile.Șeful laboratorului trebuie să informeze medicul despre posibilitatea apariției unei reacții le transfuzie.

31. Informația despre rezultatele identificării anticorpilor, reacțiilor la transfuzie și nevoilor speciale trebuie să fie păstrată la Serviciul de Transfuzie. Cu timpul, anticorpii pot deveni de ne-detectat, dar unitățile cu antigene negative trebuie să fie disponibile.