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PRUEBAS INMUNOLOGICAS DE DIAGNOSTICO CLINICO

TABLA DE CONTENIDO. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOSLINFOCITOTOXICIDADEIA-ELISAIFIINMUNOPEROXIDASAENASANASANCAS. . . ANTI-DNAAMAATAMEIAAGLUTINACI

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PRUEBAS INMUNOLOGICAS DE DIAGNOSTICO CLINICO

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Presentation Transcript

    1. PRUEBAS INMUNOLOGICAS DE DIAGNOSTICO CLINICO LADY YURANI RODRIGUEZ GONZALEZ U.C.M.C VIII-D 2004

    2. TABLA DE CONTENIDO CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS LINFOCITOTOXICIDAD EIA-ELISA IFI INMUNOPEROXIDASA ENAS ANAS ANCAS

    3. ANTI-DNA AMA ATA MEIA AGLUTINACIÓN ELFA TABLA DE CONTENIDO

    4. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS FUNDAMENTO: El CML es un procedimiento in-Vitro que mide reconocimiento y proliferación celular. El ensayo representa la medida funcional de inmunidad celular en el cual los linfocitos ayudadores (CD4) de un individuo son inducidos a proliferar después de estar en contacto con las células mononucleares de otro individuo. La señal de activación o estimulación es originada por los determinantes de las moléculas de clase II región HLA-D que están expresadas en células B y monocitos que están situados en en el,primer dominio en la región hipervariable de las moléculas HLA II. Cuando dos poblaciones alogenicas de linfocitos que difieren en la región HLA-D son puestas juntas en cultivo va a ver una mutua activación celular en un periodo de seis días.

    5. Esta activación es manifestada metabolicamente con incremento de proteínas, síntesis de RNA y DNA y morfológicamente por la transformación de linfocitos pequeños en linfoblastos (blastogenesis). Células normales alcanzaran un pico máximo de síntesis o la rata máxima de proliferación de DNA en u periodo de seis días. Las células activadas se dividen y se proliferan. Para medir esta actividad se mide la incorporación de Timidina Tritiada al nuevo DNA sintetizado. La activación de una población celular es mediada por el tratamiento de la segunda población con un inhibidor de DNA (mitomicina C) o irradiación para bloquearla síntesis de DNA.Las células tratadas son llamadas población estimuladora (E) y las células sin tratar son la población respondedora( R) . Si hay compatibilidad en el locus D entre los individuos, y por supuesto si hay diferencias entre las moléculas D entre las dos poblaciones celulares estimulación fuerte ocurrirá.

    6. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS

    7. CULTIVO MIXTO DE LINFOCITOS

    8. LINFOCITOTOXICIDAD FUNDAMENTO: El HLA-antisuero se liga a su membrana celular especifica de antigenos blanco de los linfocitos. El complemento es activado por el complejo Ag-Ac sobre la célula la cual conduce a lisis celular. Este es detectado por la entrada de tinte dentro de la célula muerta (=reacción positiva), y cundo no existe complejo Ag-Ac la célula no se lisa y por lo tanto no es coloreada por el tinte (= reacción negativa)

    11. ENZIMUNOENSAYO ELISA FUNDAMENTO: ENZIMUNOANALISIS O ENZIMUNOENSAYO, en este se determina la presencia de antigenos (Ag) o anticuerpos (Ac) a partir de una fase sólida en la que están fijados Ag o Ac dependiendo de lo que se determine y de la técnica, si es en Sandwich, por competencia o por captura. Esta técnica es basada por la presencia de una enzima como la peroxidas de rábano picante o fosfatasa alcalina que permitirá la detección de Ag o Ac por medio de la acción sobre un sustrato. EJEMPLO: InmunoComb, Enzymun-Test

    12. ELISA (Sandwich)

    13. ELISA (Sandwich)

    14. ELISA (Captura)

    15. ELISA (Competitivo)

    16. InmunoComb

    17. IFI FUNDAMENTO: El método está dividido en dos etapas. En la primera se coloca en contacto la muestra del paciente con el antigeno dejándose incubar, luego se retiran los excesos de muestra no unida. En la segunda etapa se colocan en contacto el complejo inmune y el conjugado que es un anticuerpo marcado con fluorocromo, se incuba, se retira el exceso de anticuerpo no unido y se observa la preparación al microscopio. Este método es indirecto porque es necesario utilizar un anticuerpo que actuara sobre el anticuerpo unido al antigeno para la detección del complejo inmune.El sustrato siempre serán células o el parasito.

    18. IFI

    19. INMUNOPEROXIDASA (PEROXISET) FUNDAMENTO: Utiliza en método indirecto, este procedimiento se basa en tres reacciones. El primer paso el suero del paciente se pone en contacto con el sustrato antigénico. Si los Ac están presentes, éstos se unirán al Ag, formando un complejo Ag-Ac. El segundo paso se agrega una antigamma-globulina humana marcada con peroxidasa y si esta el complejo presente ésta se unirá. En el tercer paso, se revela con una reacción colorimetrica en presencia de un cromógeno y agua oxigenada, dando un complejo insoluble y estable en el que se pueda visualizar al microscopio óptico.

    20. INMUNOPEROXIDASA (PEROXISET)

    21. ENAS (Prueba inmunoenzimatica para la determinación de antigenos extractables) FUNDAMENTO: Prueba inmunoenzimatica para la determinación de antigenos extractables (ENAS) detecta anticuerpos IgG, IgM y IgA para los antigenos ya identificados Smith (Sm), Sm/RNP (ribonucleoproteina), SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70 y Jo-1. Los antigenos purificados se encuentran en la superficie del pozo. Se realiza una dilución a la muestra del paciente y se agrega a los pozos, allí se formara un complejo Ag-Ac si el paciente posee un Ac para los Ag mencionados anteriormente, agrega un conjugado anti- IgG, IgM o IgA marcado con peroxidasa, este reacciona con el complejo, se adiciona cromógeno/sustrato (TMB/H2O2). Lee la absorbancia a 450 nm es directamente proporcional a la concentración de Ac.

    22. ENAS ELISA

    23. ENAS IDR

    24. ENAS CONTRAINMUNOELECTROFORESIS

    25. ANAS (anticuerpos antinucleares) Sustrato: Células tumorales Técnica: ELISA, IFI, Peroxiset

    26. ANCAS (anticuerpos anticitoplasmaticos) Sustrato: Mieloperoxidasa del neutrófilo Técnica: ELISA, IFI, Peroxiset

    27. ANTI-DNA (anticuerpos anti-DNA) Sustrato: Crithidia luciliae Técnica: ELISA, IFI, Peroxiset

    28. AMA (anticuerpos antimitocondriales) Sustrato: Células con su mitocondria Técnica: ELISA, IFI, Peroxiset

    29. ATA (anticuerpos antitiroideos) Sustrato: Cortes de tiroides Técnica: IFI

    30. MEIA (enzimunoensayo de micropartículas) FUNDAMENTO: Es la tecnología de enzimunoensayo de micropartículas recubiertas de Ag o Ac (MEIA). Se basa en la determinación de Ag o Ac en la muestra comparando la tasa de formación de fluorescencia y la tasa de punto de corte determinada a partir de una calibración index del ensayo Ejemplo: AxSYM

    31. MEIA (Ac pte.)

    32. MEIA (Ag pte.)

    33. AGLUTINACIÓN FUNDAMENTO: Aglutinación indirecta: Es aquella en la que un antígeno celular o de partículas insolubles es aglutinado directamente por al Ac presente en el suero; los eritrocitos, una gran variedad bacteriana y de hongos, pueden aglutinar directamente los anticuerpos séricos. Aglutinación directa: existen otras sustancias para ser utilizadas como la Bentonita, el látex, el carbón activado Ejemplo: Serodia

    34. AGLUTINACIÓN

    35. ELFA (Reacción inmunoenzimatica a una detección final en fluorescencia)

    36. ELFA

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