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USO E INTERPRETACION DE LAS PRUEBAS DE DIAGNOSTICO: SEROLOGIA. Campaña Nacional contra la Brucelosis en los animales. PRUEBAS SEROLOGICAS. Evalúan la respuesta inmune humoral en líquidos orgánicos. Ninguna prueba serológica permite descubrir la totalidad de los casos
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USO E INTERPRETACION DE LASPRUEBAS DE DIAGNOSTICO: SEROLOGIA Campaña Nacional contra la Brucelosis en los animales
PRUEBAS SEROLOGICAS • Evalúan la respuesta inmune humoral en líquidos orgánicos. • Ninguna prueba serológica permite descubrir la totalidad de los casos • Importancia del diagnóstico de hato o poblacional en programas de control y erradicación
Cualitativas: Prueba de tarjeta, Anillo en leche (resultados + ó -) Cuantitativas: Rivanol, FC’(resultados en títulos) Tamiz o de “screening” Confirmatorias De vigilancia epidemiológica CLASIFICACION DE LAS PRUEBAS SEROLOGICAS
PRUEBAS TAMIZ • Alta sensibilidad: pocos o ningún falso negativo • Pruebas cualitativas • Sencillas • Prácticas: fácil realización • Económicas • Ejemplo: prueba de tarjeta
PRUEBAS CONFIRMATORIAS • Más específicas • Son cuantitativas • Mayor número de casos crónicos diagnosticados • Diferencian títulos residuales de la vacunación de títulos de origen infeccioso • Ejemplo: Rivanol, Fijación del Complemento.
PRUEBAS DE VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA • Son cualitativas • Realización rápida • Pruebas poblacionales o de hato • Ejemplo: prueba de anillo en leche • En áreas controladas y/o libres para descubrir hatos presuntamente infectados
DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO I • Se requieren muestras repetidas. • Muestra óptima para aislamiento en animales: contenido abomasal, placenta, feto, y membranas fetales; leche, nódulos linfáticos supramamarios • Toma aséptica y envío inmediato y en refrigeración de las muestras. • Las muestras deben ser frescas.
DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO I I • Aislamiento a partir de sangre, sólo en animales bacterémicos, situación muy improbable • Facilidad de contaminación de la muestra, sobre todo en abortos. • Necesidad de personal capacitado:muestras de alto riesgo al personal. • Tiempo prolongado de crecimiento: desde 15 días hasta 1 mes
PRUEBAS OFICIALES PARA EL DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE BRUCELOSIS - NOM Para brucelas lisas: • Tarjeta (rosa de bengala o “card test”) • Rivanol • Fijación del complemento • Anillo en leche Para B. ovis: • Inmunodifusión doble y FC’
PRUEBA DE TARJETA • Prueba tamiz, cualitativa • En sueros de bovinos, ovinos, caprinos • Detecta IgG e IgM vs cepas lisas de Brucella • Requiere suero sanguíneo no hemolisado • Resultados: (+) ó (-) • Concentración celular: 8% para bovinos y 3% para cabras y ovinos
PRUEBA DE RIVANOL (I) • Prueba confirmatoria y cuantitativa para sueros de bovinos • Detecta IgG. • Requiere suero sanguíneo no hemolisado positivo a prueba de tarjeta. • Resutados expresados en títulos de anticuerpos.
PRUEBA DE RIVANOL (II) • Resultados: títulos 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 y 1:400 Interpretación: • Animales no vacunados se consideran positivos cuando hay aglutinación completa desde 1:25 • Animales vacunados: positivos si hay aglutinación completa a partir de 1:50 • Negativos: cuando no se observa aglutinación
FIJACION DE COMPLEMENTO • Prueba cuantitativa, complementaria en todas las especies: bovinos, ovinos, caprinos • Sueros no hemolisados indispensables • Requiere personal y laboratorios especializados.
FIJACION DE COMPLEMENTO Interpretación de resultados Bovinos: • No Vacunados: Positivo si el título es mayor o igual a 1:20. • Vacunados: Positivos a 1:40. Caprinos y ovinos: • Positivo a partir de 1:8.
ANILLO EN LECHE (I) • Prueba de vigilancia epidemiológica • Cualitativa • Requiere muestras de leche fresca, refrigerada: 12 a 72 hs de haber sido tomadas • Se requiere sólo 1 ml para realizar la prueba (muestra mínima: al menos 10 ml)
ANILLO EN LECHE (II)Interpretación En leche de vacas: • Positivo = cualquier coloración de un anillo teñido en la superficie de la columna de leche • Negativo = ausencia de anillo teñido en la superficie En leche de cabras: • Reacción positiva si se forma un botón coloreado al fondo del tubo o grumos teñidos en la columna de leche. Negativo si se tiñe toda la columna.
DIAGNOSTICO DE EPIDIDIMITIS OVINA POR B. ovis • Tamiz:Prueba de Inmunodifusión doble en agar, con antígeno soluble en solución salina caliente (HS) de B. ovis. • Confirmatoria: Fijación de Complemento con antígeno de B. ovis. • Sólo en machos > de 8 meses.